ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
СОЮЗА ССР
АНТИГЕН ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ ИНФЕКЦИОННОГО ЭПИДИДИМИТА БАРАНОВ, ВЫЗЫВАЕМОГО БРУЦЕЛЛОЙ ОВИС
ТЕХНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ И МЕТОДЫ ИСПЫТАНИИ
ГОСТ 27M6-86 (СТ СЭВ 5157—85)
Издание официальное
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ПО СТАНДАРТАМ
Москва
УДК 616—097:619:006.354 Группа Р31
ГОСУДАРСТВЕННЫ» СТАНДАРТ СОЮЗА ССР
АНТИГЕН ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ ИНФЕКЦИОННОГО ЭПИДИДИМИТА БАРАНОВ, ВЫЗЫВАЕМОГО БРУЦЕЛЛОЙ ОВИС
Технические требования и методы испытаний
Antigen revealing infectious sheep’s epididymitis caused by Brucella ovis. Technical requirements and test methods
ГОСТ27146-86(СТ СЭВ 5157—85)
Срок действия с 01.01,88 до 01.01.93
Несобпюдение стандарта преследуется по закону
Настоящий стандарт распространяется на антиген, предназначенный для диагностики инфекционного заболевания овец, вызываемого Бруцеллой овис, методом реакции длительного связывания комплемента (РДСК).
Стандарт полностью соответствует СТ СЭВ 5157—85.
1. ТЕХНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ
1.1. Антиген по своим физическим и биологическим свойствам должен соответствовать характеристикам и нормам, указанным
|
в табл. 1. |
Таблица 1 |
|
Наименование показателя |
Характеристика и норма |
|
I. Внешний вид |
Прозрачная, слегка опалесцирующая жидкость зеленовато-желтого цвета |
|
2. Наличие посторонней примеси, плесени, хлопьев, осадка, трещин флаконов |
Не допускается |
|
3. Стерильность |
В посевах из антигена на питательные среды не должно быть роста микрофлоры после выдерживания в течение 10 дней при температуре (37±0,5)°С, на агаре Сабуро при температуре (22±2)°С |
|
Издание официальное |
Перепечатка воспрещена © Издательство стандартов, 1987 |
Продолжение габл. 1
4. Активность в РДСК
5. Специфичность в РДСК
6. Антикомплементарные свойства
7. Гемотоксичность
Титр не ниже 1 : 200 с оценкой «три-четыре креста»; рабочий титр 1 : 100 Антиген в разведении 1 : 50 и выше не должен вызывать задержки гемолиза эритроцитов с S-бруцеллезной и нормальными сыворотками Антиген в разведении 1 :50 и выше ве должен обладать антикомплементарными свойствами Антиген в разведении 1 :50 и выше не должен обладать гемотоксическими свойствами
2. МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЙ
2.1. Отбор проб
2.1.1. Для проведения испытания от каждой серии отбирают десять флаконов. Пять флаконов используют для анализа, а пять — хранят в архиве государственного контролера в течение 18 мес.
2.1.2. Флаконы, предназначенные для хранения, сопровождают документом с указанием:
наименования препарата; даты изготовления; номера серии; номера контроля; даты отбора пробы;
общего количества упаковочных единиц и объема серии; должности и подписи лица, отобравшего пробу; обозначения настоящего стандарта.
2.2. Определение внешнего вида, цвета и на-линия посторонней примеси
Для определения внешнего вида, цвета, наличия посторонней примеси, плесени, хлопьев, осадка каждый флакон с препаратом встряхивают и просматривают в проходящем свете.
2.3. Определение стерильности
Сущность метода заключается в определении роста бактериальной и грибковой микрофлоры в посевах из проб антигена на питательных средах.
2.3.1. Аппаратура, материалы и реактивы Для проведения испытания применяют:
термостаты с температурой нагрева (22±2)°С и (37±0,5)°С; пипетки мерные вместимостью 1 и 2 см3 по ГОСТ 20292-74;
ГОСТ 27146—8b с. 3
пробирки по ГОСТ 25336-82; флаконы стеклянные вместимостью 100 см3; бульон мясо-пептонный (МПБ) по ГОСТ 20730-75; бульон мясо-пептонный печеночный (МППБ) под вазелиновым маслом;
агар мясо-пептонный (МПА); пептон сухой ферментативный по ГОСТ 13805-76; агар микробиологический по ГОСТ 17206-84 или агар пищевой по ГОСТ 16280-70;
масло вазелиновое по ГОСТ 3164-78; раствор физиологический, pH 7,0—7,2; агар Сабуро;
натрий хлористый по ГОСТ 4233-77.
2.3.2. Проведение испытания
Посев проводят из каждого отобранного для испытания флакона в объеме 0,2—0,3 см3 в пробирки с МПА, МПБ, МППБ под вазелиновым маслом, агаром Сабуро и по 0,5—1 см3 во флаконы с МПА и МППБ под вазелиновым маслом. Посевы проводят в две пробирки и два флакона с каждой средой. Питательные среды с посевами выдерживают при температуре (37±0,5)°С, а на агаре Сабуро при температуре (22±2)°С в течение 10 дней. В посевах на питательных средах не должно быть роста бактериальной микрофлоры и грибов.
2.4. Определение активности, специфич
ности, гемотоксичности и антикомплемента р-ных свойств
Сущность метода заключается в способности антигена образовывать комплекс со специфическими антителами, выявляемый
в РДСК.
2.4.1. Аппаратура и материалы
Для проведения испытания применяют:
баню водяную с температурой 38°С и 62—64°С;
холодильник, поддерживающий температуру 2—4°С;
пробирки по ГОСТ 25336-82;
штативы;
пипетки мерные вместимостью 1, 2, 5 и 10 см3 по ГОСТ 20292-74;
колбы мерные вместимостью 100, 200 и 1000 см3 по ГОСТ 20292-74;
воронки стеклянные по ГОСТ 25336-82;
полиглобулин для стандартизации овисных антигенов или референтную овисную сыворотку с титром в РДСК 1 :20 четыре креста (+ + + + );
две нормальные сыворотки крови баранов разных серий; S-бруцеллезную сыворотку с титром в РДСК 1:40 четыре креста ( + + + +);
|
Титрация овнсного антигена
Таблица 2 |
|
|
Разведения антигена |
Конт
роль- |
Конт
роль
ный |
|
|
Компоненты реакции |
1:50 |
1:100 |
1:150 |
1:200 |
1:250 |
1:300 |
1:350 |
1:400 |
ный
овис-
ный
анти
ген |
бруцел
лез
ный
анти
ген |
Без антигена |
|
Разведения полиглобулина или референтной овисной сыворотки, |
0,5 |
|
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
1.0 |
|
см3 |
|
Выдерживают |
в водяной бане при температуре |
62—64°С в течение 30 мин |
|
Испытуемый и контрольный антиген, см3 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
— |
|
Комплемент в разведении по |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
|
|
титру, см3
Выдерживают при температуре 2—4°С в течение 16—18 ч, затем при комна гной температуре в течение 20 мин |
1,0
1,0
1,0
1.0
Гемолитическая система в рабочем титре (см. табл. 4), см3
Выдерживают в водяной бане при температуре 37—38°С в течение 20 мин
|
Титрация овисного антигена и примерный результат
Таблица 3 |
|
|
|
Разведения антигена |
Конт
роль
ный
овнс-
ный
анти
ген |
Конт
роль
ный |
|
|
Компоненты реакции |
Разведе
ния |
1:50 |
1:100 |
1:150 |
1:200 |
1:250 |
1:300 |
1:350 |
1:400 |
бруцел
лез
ный
анти
ген |
Без антигена |
|
Полиглобулин или референтная овисная сыворотка |
1:10 |
++
++ |
++
++ |
++
++ |
++
++ |
+++ |
|
+ |
■— |
++
++ |
— |
|
|
5-бруцеллезная сыворотка |
1:5 |
— |
— |
— |
— |
— |
— |
-—- |
— |
— |
+4-
++ |
— |
|
|
1:10 |
— |
— |
— |
— |
— |
— |
— |
— |
— |
++
++ |
— |
|
Негативная сыворотка 1-я |
1:5 |
— |
— |
— |
— |
— |
— |
—. |
— |
— |
— |
— |
|
Негативная сыворотка 2-я |
1:5 |
— |
— |
— |
— |
— |
— |
— |
— |
— |
— |
— |
|
Антикомплементар -ность антигена |
(В двойной дозе) |
— |
— |
Реакцию не проводят |
|
— |
— |
— |
|
Гемотоксичность антигена |
(В двойной дозе) |
++
++ |
++
++ |
|
|
То же |
|
|
++
++ |
++
++ |
Реакцию не проводят |
|
П
Титрация гемолитической системы для реакции длительного связывания комплемента
|
Таблица 4 |
|
Компоненты |
Дозы компонентов в пробирках, см3 |
|
I |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
9 |
10 |
|
Негативная сыворотка в разведении 1 : 5 |
0,5
В |
0,5
ыдержива |
0,5
ют в водя |
0,5 ной бане |
0,5 при темп |
0,5 ературе 61 |
0,5
2—64°С в |
0,5 течение с |
0,5 0 мин |
0,5 |
|
Антиген в рабочем титре |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
|
Комплемент (в том же разведении, как для главного опыта) |
0,5
В
2( |
0,5
ыдержива] ) мин при |
0,5
от при Tf комнатно |
0,5
?мпературе й темперап |
0,5
; 2—4°С ] гуре 16—2 |
0,5
в течение
4°С |
0,5
16—18 |
0,5
4, затем |
0,5
в течение |
0,5 |
|
Гемолитическая
система |
0,2
В |
0,4
ыдержива1 |
0,6
от в вод* |
0,8 1ной бане |
1,0
при темп |
1,2
ературе |
1,4
37—38°С |
1,6
в течени |
1,8
е 20 мин |
2,0 |
|
Результат |
ПГ |
ПГ |
ПГ |
ПГ |
ПГ |
ПГ |
ЧГ |
ЧГ |
ЧГ |
зг |
|
Общий титр гемолитической системы—1,2 см3 Рабочий титр— 1,0 см3
Примечание. ПГ — полный гемолиз, ЧГ — частичный гемолиз, 3Г — задержка гемолиза. Опыт проводится параллельно с двумя негативными сыворотками.
ГОСТ 27146-86 С. 7
антиген бруцеллезный для РА, РСК (РДСК);
комплемент для РСК;
сыворотку гемолитическую для РСК;
эритроциты барана, 3—4%-ную взвесь в физиологическом растворе;
физиологический раствор, pH 7,0—7,2.
2.4.2. Проведение испытания
Определение активности, сцецифичности, гемотоксичносги и антикомплементарных свойств антигена проводят в РДСК по табл. 2 и 3.
Для испытания в РДСК испытуемый антиген разюдят физиологическим раствором в соотношении 1:50, 1:100, 1:150, 1 : 200, 1 : 250, 1 : 300, 1 : 350, 1 :400; полиглобулин или рефе{ент-ную овисную сыворотку — в разведении 1:10; S — бруцелле:ную сыворотку — в разведении 1:5 и 1:10; две нормальные сывфот-ки крови баранов разных серий — в разведении 1:5.
Контрольный овисный и бруцеллезный антигены используэт в рабочих титрах.
Комплемент разводят физиологическим раствором 1: 20— : 30 в зависимости от титра.
Гемолитическую систему готовят из равных объемов ввеси эритроцитов барана в физиологическом растворе (из осадка эритроцитов, отмытых 2-3 раза центрифугированием с частотойвра-щения 2500—3000 мин-1 в течение 10—12 мин) и разведени гемолитической сыворотки в утроенном-учетверенном титре, (пределение рабочего титра гемолитической системы для РДСКпро-водят по табл. 4.
При испытании антигена на антикомплементарность весто сывороток вносят равный объем антигена в том же разведяии, а при испытании на гемотоксические свойства физиологичеким раствором заменяют комплемент и сыворотку.
Реакцию оценивают по четырехбальной системе в крестах четыре креста (+ + + + ) —гемолиз эритроцитов от 0 до 0%; три креста (+ + + ) —гемолиз эритроцитов св. 10 до 40% два креста (++)—гемолиз эритроцитов св. 40 до 70%; один крест ( + )—гемолиз эритроцитов св. 70 до 90%; отрицательная реакция (—)—гемолиз эритроцитов св. £ до 100%.
Титром антигена считают наибольшее его разведение, езы-вающее полную задержку гемолиза эритроцитов с полиглосш-ном или референтной овисной сывороткой в разведении 1:10
3. ПРОТОКОЛ ИСПЫТАНИЯ
Для каждой проверенной серии антигена составляют протол испытания, который должен содержать следующие данные:
С. 8 ГОСТ 27146-86
наименование штамма; использованный метод; результат испытания показателей качества; лату изготовления;
подпись лица, проводившего испытания; сбозначение настоящего стандарта.
ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ
1. РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН Госагропромом СССР ИСПОЛНИТЕЛИ:
К. В. Шумилов, канд. вет. наук (руководитель темы); У. Э. Ниязов, канд. ■ет. наук; Т. И. Малахова, канд. вет. наук
2. УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 11 декабря № 37613. ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ4. ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ
Редактор Т. П. Шатина Технический редактор М. И. Максимова Корректор Р. Н. Корчагина
Сдано в наб. 30.12 86 Подп. в печ. 23 02.87 0,75 уел. п. л. 0,75 уел. кр.-отт. 0,48 уч. Тир. 8000 Цена
Ордена «Знак Почета» Издательство стандартов, 123840, Москва, ГСП, Новопреснеиский пер., 3 Тип «Московский печатник», Москва,Лялин пер., 6. Зак. 5
