МАЛЛЕИН

ТЕХНИЧЕСКИЕ УСЛОВИЯ

Издание официальное

ИПК ИЗДАТЕЛЬСТВО СТАНДАРТОВ Москва

УДК 616—074:619:006.354

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

МАЛЛЕИН Технические условия

Mallein. Specifications    Взамен    ГОСТ    14109—76

ОКП 93 8751

Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 06.04.82 № 1436 дата введения установлена

01.07.83

Ограничение срока действия снято по протоколу № 2—92 Межгосударственного Совета по стандартизации, метрологии н сертификации (ИУС 2—93)

Настоящий стандарт распространяется на маллеин, представляющий собой стерильный культуральный фильтрат, полученный в результате выращивания возбудителя сапа на мясопептонном глицериновом бульоне.

Маллеин предназначается для диагностики сапа у животных.

Стандарт полностью соответствует СТ СЭВ 4317—83.

(Измененная редакция, Изм. № 1).

1. ТЕХНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ

1.1.    Маллеин должен изготовляться в соответствии с требованиями настоящего стандарта по технологическим правилам, утвержденным в установленном порядке.

1.2.    Маллеин по физико-химическим и биологическим свойствам должен соответствовать требованиям и нормам, указанным в табл. 1.

© Издательство стандартов, 1982 © И ПК Издательство стандартов, 1999

ГОСТ 14109-82 С. 2

1 3 В качестве референс-препарата используют РРД-маллеин в лиофилизированном виде, изготовленным и апробированным Всесоюзным государственным научно-контрольным институтом ветеринарных препаратов Министерства сельского хозяйства СССР

1 4 Активность референс-препарата устанавливают на лошадях, больных сапом, или на искусственно сенсибилизированных животных

1    5 Срок годности референс-препарата не менее 5 лет 12—15 (Введены дополнительно, Изм № 1).

2 ПРАВИЛА ПРИЕМКИ

2    1 Малтеин принимают сериями Под серией следует понимать определенное количество препарата полученное в результате одноразового смешивания в одной емкости исходных материалов и специальной обработки их в одних производственных условиях Серия должна быть оформлена одним документом о качестве, иметь свои номер и номер государственного контроля

2 2 Каждая серия маллеина должна быть принята на предприятии-изготовителе государственным контролером Всесоюзного государственного научно-контрольного института ветеринарных препаратов Министерства сельского хозяйства СССР

2 3 Внешний вид маллеина определяют по каждой ампуле (флакону) всей серии маллеина 2 4 Для контроля качества маллеина от каждой серии методом случайного отбора отбирают 40 ампул (флаконов)

2 5 При получении неудовлетворительных результатов испытаний хотя бы по одному из показателей по нему проводят повторные испытания удвоенного количества ампул (флаконов) с препаратом Результаты повторных испытании распространяют на всю серию

2 6 Контроль качества препарата по требованию потребителя проводит государственный контролер или Всесоюзный государственный научно-контрольный институт ветеринарных препаратов Министерства сельского хозяйства СССР

3. МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЙ

31 Отбор проб

3 11 Из ампул (флаконов), отобранных по п 2 4, 20 используют для испытаний, 20 оставляют в архиве государственного контролера в течение 5,5 лет (Измененная редакция, Изм. N° 1).

3 2 Для определения внешнего вида маллеина ампулы (флаконы) с препаратом просматривают

визуально

3 3 Концентрацию водородных ионов (pH) определяют потенциометром ЭВ-74 или другим прибором того же класса точности по правилам, приложенным к потенциометру 34 Определение стерильности 3 4 1 Аппаратура, материалы и реактивы Термостат с температурой нагрева 37—38 “С Автоклав

Пипетки пастеровские Пробирки стеклянные по ГОСТ 25336-82 Воронки стеклянные по ГОСТ 25336-82 Пробки ватно-марлевые Фильтры бумажные

Пептон сухой ферментативный по ГОСТ 13805-76

Агар пищевой по ГОСТ 16280-88

Глицерин по ГОСТ 6259-75

Вазелиновое масло по ГОСТ 3164-78

Глюкоза кристаллическая гид ратная по ГОСТ 975-88

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709-72

(Измененная редакция, Изм. № 1).

3 4 2 Подготовка к испытанию

Готовят в соответствии с действующей рецептурой мясопепгонный агар (МПА), МПА с 2—4 % глицерина, мясопепгонный бульон (МПБ) по ГОСТ 20730-75, мясопепгонный печеночный бульон (МППБ) под вазелиновым маслом (среда Китг-Тароцци) и среду Сабуро Среды разливают по 8—10 см³ (МПА и среду Сабуро по 5—6 см³) в пробирки, закрывают ватно-марлевыми пробками и стерилизуют в автоклаве при давлении 0,15 МПа в течение 30 мин Плотные питательные среды перед применением скашивают

3.4.3.    Проведение испытания

Проводят посев по 0,3—0,5 см³ из трех ампул (флаконов) маллеина на МПБ, МПА, МПА с 2—4 % глицерина, а также на среду Китт-Тароцци и среду Сабуро — по 3 пробирки каждой среды на ампулу (флакон) маллеина.

3.4.4.    Обработка результатов

Посевы должны оставаться стерильными при выдерживании их в термостате в течение 10 сут при температуре 37—38 °С, а на среде Сабуро — при 20—22 °С.

3.5.    Определение безвредности

3.5.1.    Аппаратура, материалы и реактивы Шприцы стеклянные вместимостью 1—2 см³.

Иглы инъекционные № 0612—0625.

Спирт этиловый 70 %-ный.

Тампоны ватные.

(Измененная редакция, Изм. № 1).

3.5.2.    Проведение испытания

Пяти здоровым белым мышам массой 18—20 г каждая вводят подкожно по 0,5 см³ маллеина. При тех же условиях содержат пять контрольных мышей.

3.5.3.    Обработка результатов

Мыши должны оставаться клинически здоровыми в течение 10 сут и в месте инъекции у опытных животных не должно быть никаких изменений.

3.6.    Определение реактогенности

3.6.1.    Для проведения испытания применяют пипетки глазные.

3.6.2.    Проведение испытания

Пяти здоровым лошадям, не бывшим в эксплуатации в течение суток, наносят пипеткой на конъюнктиву глаза 3—4 капли испытуемого маллеина.

3.6.3.    Обработка результатов

Реакцию учитывают каждые 3 ч после нанесения маллеина в течение 12 ч и через 24 ч.

Серию считают нереактогенной, если она не вызывает воспаления конъюнктивы. Допускается кратковременное слезотечение с незначительным выделением слизистого секрета.

3.7.    Определение активности

Активность маллеина устанавливают в процентах к активности референс-препарата в аллергической пробе на морских свинках, сенсибилизированных сапной культурой в смеси с минеральным маслом и ланолином (сапной эмульсин-антиген).

3.7.1. Аппаратура, материалы и реактивы Термостат с температурой нагрева 37—38 °С.

Автоклав.

Баня водяная с терморегулятором.

Весы аналитические.

Центрифуга на 6000—8000 об/мин.

Гомогенизатор на 5000 об/мин.

Потенциометр ЭВ-74 или прибор того же класса точности.

Холодильник бытовой.

Пипетки пастеровские.

Пробирки стеклянные по ГОСТ 25336-82.

Воронки стеклянные по ГОСТ 25336-82.

Флаконы для медицинских препаратов вместимостью 10—20 см³.

Матрацы стеклянные посевные.

Шприцы стеклянные вместимостью 1 см³.

Иглы инъекционные № 0415.

Иглы инъекционные №№ 0612—0625.

Пробки ватно-марлевые.

Тампоны ватные.

Марля бытовая хлопчатобумажная по ГОСТ 11109-90.

Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026-76.

Кутиметр или линейка.

Пептон сухой ферментативный по ГОСТ 13805-76.

Агар пищевой по ГОСТ 16280-88.

Глицерин по ГОСТ 6259-75.

Масло вазелиновое по ГОСТ 3164-78.

Масло легкое минеральное для вакцин.

ГОСТ 14109-82 С. 4

Ланолин безводный

Натрий хлористый х ч по ГОСТ 4233-77

Фенол по НТД

Глюкоза кристаллическая гидрлтная по ГОСТ 975-88.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709-72

3 6 2—3 7 1 (Измененная редакция, Изм. № 1).

3 7 2 Подготовка к испытанию

3 7 2 1 Получение бактериальной массы возбудителя сапа для изготовления эмульсин-антигена

Для получения бактериальной массы культуру возбудителя сапа выращивают на МПА с 2—4 % пиперина в плоских матрацах pH среды 6,8—7,0. Посев проводят суспензией двухсуточной культуры возбудителя сапа, выращенной в пробирках на МПА с 2—4 % глицерина и смытой стерильным физиологическим раствором в количестве 10—12 см³ Суспензией культуры из каждой пробирки засевают по одному матрацу, для чего над пламенем горелки переливают содержимое пробирки в матрац, затем покачиванием его распределяют суспензию по всей поверхности питательной среды.

Выращивание культуры проводят при 37 °С в течение 4 сут, затем все матрацы просматривают визуально в проходящем и отраженном свете Матрацы со слабым ростом культуры или загрязненные посторонней микрофлорой на используют

В матрацы с чистой культурой вносят над пламенем горелки по 50—60 см³ стерильного физиологического раствора, содержащего 0,5 % фенола, и выдерживают 30 мин в наклонном положении, обеспечивающем смачивание всей поверхности посева Затем покачиванием матраца смывают культуру с поверхности агара и сливают в отдельный чистый матрац через воронку с одним слоем марли. Полученную взвесь культуры стерилизуют автоклавированием при давлении 0,2 МПа в течение 30 мин.

Суспензию культуры возбудителя сапа проверяют на стерильность посевом по 0,3—0,5 см³ на МПА, МПА с 2—4 % глицерина, МПБ, среду Китг-Тароцци и среду Сабуро — по 3 пробирки каждой среды, и выдерживают в течение 10 сут при 37 *С, а посевы на среду Сабуро — при 20—22 “С.

Стерильная суспензия культуры должна храниться при 6—8 “С и может быть использована для изготовления сапного эмульсин-антигена в течение года.

При получении бактериальной массы возбудителя сапа должны соблюдаться правила техники безопасности, утвержденные в установленном порядке.

3.7.2    2 Изготовление сапного эмульсин-антигена

Легкое минеральное масло для вакцин и ланолин безводный стерилизуют автоклавированием при давлении 0,2 МПа в течение 2 ч

Для изготовления антигена смешивают в стакане гомогенизатора 85 см³ минерального масла с 15 см³ ланолина, разогретого до жидкого состояния. Затем добавляют 50 см³ взвеси бактериальной массы возбудителя сапа, содержащей 37,5 г культуры.

Взвесь сапной культуры готовят следующим образом, в стерильную центрифужную пробирку, предварительно взвешенную на аналитических весах, вносят бактериальную массу, полученную в соответствии с п 3 7.2 1, и центрифугируют при 6000—8000 об/мин в течение 15 мин. Над осадочную жидкость сливают и пробирку вновь взвешивают. Осадок разводят стерильным физиологическим раствором с таким расчетом, чтобы в 1 см³ взвеси содержалось 0,75 г культуры.

Смесь масла, ланолина и взвеси сапной культуры гомогенизируют при 5000 об/мин в течение 5 мин и переливают в стерильные флаконы для медицинских препаратов.

Всю работу по изготовлению эмульсин-антигена проводят с соблюдением условий стерильности.

Готовый антиген проверяют на стерильность посевом по 0,3—0,5 см³ на МПА, МПА с 2—4 % глицерина, МПБ, среду Китг—Тароцци и среду Сабуро — по 3 пробирки каждой среды. Посевы инкубируют в течение 10 сут при 37 °С, а на среде Сабуро — при 20—22 °С.

Антиген может сохраняться при 6—8 °С в течение года. Перед применением антиген нагревают в водяной бане при 37 °С и тщательно взбалтывают

3 7 2.3 Сенсибилизация морских свинок

Морских свинок-альбиносов или с белым окрасом на боках массой не менее 400 г каждая сенсибилизируют введением 0,1 см³ антигена в заднебедренные мышцы. Через месяц животные могут быть использованы для контроля маллеина.

Морских свинок используют 5—6 раз с месячным интервалом при условии сохранения у них при предыдущем испытании хорошо выраженной чувствительности к маллеину в разведении 1:50. Животных, не имеющих или утративших чувствительность к этой дозе препарата, уничтожают.

3.7.3    Проведение испытания

Испытуемую серию маллеина берут в разведении 1:5 и 1.50 стерильным физиологическим раствором.

Готовят основной раствор референс-препарата в соответствии с указанием, имеющимся на этикетке ампулы (флакона), затем разводят его стерильным физиологическим раствором 1:5 и 1:50.

У морских свинок удаляют с боков шерсть выщипыванием или выбриванием, затем в депили-рованные участки кожи вводят внутрикожно по 0,1 см³ референс-препарата в разведении 1:5 (доза 1) и в разведении 1:50 (доза 2), а также испытуемую серию маллеина в разведении 1:5 (доза 3) и в разведении 1:50 (доза 4) в условные точки инъекций а, б, в, г по скользящей схеме в соответствии с требованиями табл. 2.

Таблица 2 Схема введения маллеина морским свинкам

Метка Дозы маллеина, вводимые в условные точки инъекций слева, от головы . 1 справа, от головы а б в г Без метки 1 2 3 4 Голова 2 3 4 1 Спина 3 4 1 2 Крестец 4 1 2 3 Без метки 1 2 3 4 Голова 2 3 4 1 Спина 3 4 1 2

Для проверки каждой серии маллеина берут 10—12 морских свинок. Для введения маллеина и референс-препарата используют шприцы вместимостью 1 см³ и иглы № 0415, используемые только для этой цели.

Каждую дозу испытуемой серии маллеина и референс-препарата вводят отдельным шприцем, маркированным в соответствии с дозой препарата (1, 2, 3, 4). Расстояние между точками инъекций с одной стороны тела животного должно быть не менее 5 см. Морских свинок метят несмываемой краской. Свинок с одинаковым местом введения доз маллеина метят одной меткой.

3.7.4. Обработка результатов

Через 24 ч после введения маллеина реакцию оценивают в миллиметрах по среднему диаметру папулы, образующейся в месте инъекции препарата. Для этого измеряют продольный и поперечный диаметры папулы, полученные данные суммируют и делят на 2. Результаты измерений заносят в графу табл. 3, указывающую соответствующую дозу маллеина.

Таблица 3

Результаты учета реакции

Интенсивность реакции на введение доз препарата, мм

испытуемой серии маллеина

1

19.5

18.5

17.5

18.5

18.5

Итого: ^

При обработке полученных данных для определения активности маллеина учитывают результаты испытания только у тех свинок, которые реагируют на все дозы референс-препарата и испытуемой серии маллеина. При этом средний диаметр папулы должен быть не менее 5 мм. Средний диаметр папулы менее 5 мм считается как отсутствие реакции.

Заключение об активности маллеина делают не менее чем по 7 свинкам.

Активность маллеина (А) в процентах вычисляют по формуле

„ В - 100

ГОСТ 14109-82 С. 6

где А — сумма средних диаметров папул на введение рсферснс-препарата в дозах 1 и 2,

В — сумма средних диаметров папул на введение испытуемой серии маллеина в дозах 3 и 4, 100 — активность рсфсренс-прспарлта, %

В данном примере активность испытуемой серии равна

147,0 х 100

151,5

3 7 2 3—3 7 4 (Измененная редакция, Изм. № 1).

4. УПАКОВКА, МАРКИРОВКА, ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ

4 1 Маллеин фасуют в хорошо промытые ампулы вместимостью 5 см³ — по 5 см³ препарата или во флаконы вместимостью 10 см’ — по 10 см³, изготовленные из нейтрального стекла Ампулы запаивают, а флаконы закрывают резиновыми пробками, которые закатывают металлическими колпачками. Затем ампулы и флаконы стерилизуют в соответствии с правилами по приготовлению препарата.

4 2 На ампулы (флаконы) наклеивают или несмываемой краской по стеклу наносят с помощью клише этикетку с указанием наименования препарата и номера серии

4 3 По 20 ампул (флаконов) должно быть упаковано в картонные коробки с разделительными перегородками, обеспечивающими неподвижность и целостность ампул (флаконов) в коробке.

В каждую коробку должно быть вложено наставление по применению препарата.

На коробке должна быть этикетка, на которой указывают

-    наименование и товарный знак предприятия-изготовителя,

-    наименование препарата,

-    количество ампул (флаконов),

-    количество маллеина в ампуле (флаконе),

-    номер серии,

-    номер госконтроля,

-    дату изготовления,

-    гарантийный срок хранения,

-    обозначение настоящего стандарта

4 4 Коробки с маллеином упаковывают в дощатые ящики по ГОСТ 10131-93 массой брутто не более 15 кг

Внутрь каждого ящика вкладывают контрольный лист с указанием.

-    наименования предприятия-изготовителя и его товарного знака,

-    наименования препарата,

-    количества коробок в ящике,

-    номера серии,

-    даты упаковки,

-    фамилии или номера упаковщика

4 5 На каждое грузовое место наносят транспортную маркировку по ГОСТ 14192-96 с указанием манипуляционных знаков «Хрупкое Осторожно», «Беречь от нагрева», «Ограничение температур» и предупредительную надпись «Биопрепараты». Маркировка, характеризующая данные об упакованной продукции, должна содержать следующие обозначения.

-    наименование препарата,

-    количество препарата в ящике,

-    срок годности,

-    условия хранения,

-    обозначение настоящего стандарта.

Нанесение транспортной маркировки и маркировки, характеризующей данные об упакованной продукции, на одной стороне транспортной тары не допускается.

4 6 Транспортируют препарат транспортом всех видов в соответствии с правилами перевозок скоропортящихся грузов и багажа, действующих на транспорте данного вида.

4 7 Маллеин хранят в сухом темном месте при температуре 4—15 °С.

4.3—4 7 (Измененная редакция, Изм. № 1).

5. ГАРАНТИИ ИЗГОТОВИТЕЛЯ

5.1.    Изготовитель гарантирует соответствие маллеина требованиям настоящего стандарта при соблюдении условии транспортирования, хранения и применения.

5.2.    Гарантийный срок хранения маллеина — 5 лет со дня изготовления.

Редактор В.Н.Копысов Технический редактор В.Н.Прусакова Корректор НЛ.Шнайдер Компьютерная верстка А.Н. Золотаревой

Изд. лиц. N° 021007 от 10.08.95. Сдано в набор 23.02.99. Подписано в печать 17.03.99. Усл.печл. 0,93. Уч.-иадл. 0,90.

Тираж 119 экз. С 2280. Зак. 235.

ИПК Издательство стандартов, 107076, Москва, Колодезный пер., 14 Набрано в Издательстве на ПЭВМ Филиал ИПК Издательство стандартов — тип. “Московский печатник”, Москва, Лялин пер., 6

Плр № 080102