Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование _Российской    Федерации_

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств клетодима и его основных метаболитов в плодах томатов и томатном соке, капусте белокочанной,гречихе и горохе (нуте) методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.13362—16

Издание официальное

Москва • 2017

Федеральная служба по надзору в сфере зашиты прав потребителей и благополучия человека

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств клетодима и его основных метаболитов в плодах томатов и томатном соке, капусте белокочанной, гречихе и горохе (нуте) методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.3362—16

МУК 4.1.3362—16

Устройство перемешивающее (50—200 колебаний в минуту)    ТУ 4389-007-44330709—11

Установка для твердофазной экстракции

Фильтры низкой плотности    ТУ 2642-001-05015242—07

Примечание. Допускается применение оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4. Требования безопасности

4.1.    При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007—76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-09, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.

4.2.    Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточновытяжной вентиляцией, соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313—03 и ГН 2.2.5.2308—07.

Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004-90.

5. Требования к квалификации операторов

Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на жидкостном хроматографе, ознакомленный с руководством по эксплуатации хроматографа, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 13.

6. Условия измерений

При выполнении измерений выполняют следующие условия:

•    приготовление растворов и подготовку проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 ± 5) °С и относительной влажности не более 80 %;

•    измерения на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

МУК 4.1.3362—16

7. Подготовка к определению

Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление градуировочных растворов и раствора внесения, установление градуировочных характеристик, приготовление смесей растворителей, растворов для экстракции и очистки экстрактов, подготовка патронов для твердофазной экстракции (ТФЭ) и проверка поведения клетодима и его метаболитов на патронах.

7.7. Кондиционирование колонки

Перед началом работы аналитические колонки кондиционируют в потоке подвижной фазы до стабилизации нулевой линии не менее 30 мин.

7.2. Кондиционирование патрона для твердофазной экстракции

Патрон промывают 3 см³ смеси № 1, затем 3 см³ гексана.

7.3. Подготовка растворителей и приготовление растворов

7.3.1.    Подготовка растворителей. Растворители, используемые для анализа, специальной подготовки не требуют. Рекомендуется проверить чистоту применяемых растворителей. При обнаружении примесей, которые могут мешать определению, растворители очищают общепринятыми методами.

7.3.2.    Раствор Ns 1 (гексан-этилацетат в соотношении 9:1). 450 см³ гексана помещают в мерную колбу на 500 см³ и добавляют 50 см³ этилацетата, перемешивают.

7.3.3.    Раствор №2 (гексан-этилацетат в соотношении 3:1). 375 см³ гексана помещают в мерную колбу на 500 см³ и добавляют 125 см³ этилацетата, перемешивают.

7.3.4.    Раствор N9 3 (гексан-этилацетат в соотношении 1:4). 400 см³ этилацетата помещают в мерную колбу на 500 см³ и добавляют 100 см³ гексана, перемешивают.

7.3.5.    1 % раствор уксусной кислоты. В мерную колбу емкостью 1 000 см³ помещают 10 см³ ледяной уксусной кислоты и доводят биди-стиллированной водой до метки.

7.4. Приготовление основного и градуировочных растворов

7.4.1. Основной раствор клетодима с концентрацией 0,1 мг/см³: точную навеску клетодима (10 ± 0,2) мг помещают в мерную колбу вместимостью 100 см³, растворяют в 50—60 см³ ацетонитрила, доводят объем до метки ацетонитрилом и тщательно перемешивают.

И

7.4.2.    Раствор клетодима Ns 1 с концентрацией 5,0 мкг/см³ для градуировки: в мерную колбу вместимостью 100 см³ вносят 5,0 см³ основного раствора и доводят до метки ацетонитрилом, тщательно перемешивают.

7.4.3.    Рабочие растворы клетодима Ns 2—4 с концентрацией 0,5— 2,5 мкг/см³ для градуировки: в мерные колбы вместимостью 100 см³ помещают 10; 20 и 50,0 см³ раствора № 1 и доводят до метки ацетонитрилом, тщательно перемешивают. Получены рабочие растворы с концентрациями клетодима 0,5; 1,0 и 2,5 мкг/см³.

7.4.4.    Основной раствор клетодим сульфоксида с концентрацией 0,1 мг/см³: точную навеску клетодим сульфоксида (10 ± 0,2) мг помещают в мерную колбу вместимостью 100 см³, растворяют в 50—60 см³ ацетонитрила, доводят объем до метки ацетонитрилом и тщательно перемешивают.

7.4.5.    Раствор клетодим сульфоксида №5 с концентрацией 5,0 мкг/см³ для градуировки: в мерную колбу вместимостью 100 см³ вносят 5,0 см³ основного раствора и доводят до метки ацетонитрилом, тщательно перемешивают.

7.4.6.    Рабочие растворы клетодим сульфоксида Ns б—8 с концентрацией 0,5—2,5 мкг/см³ для градуировки: в мерные колбы вместимостью 100см³ помещают 10; 20 и 50,0см³ раствора №5 и доводят до метки ацетонитрилом, тщательно перемешивают. Получены рабочие растворы с концентрациями клетодима 0,5; 1,0 и 2,5 мкг/см³.

7.4.7.    Основной раствор клетодим сульфона с концентрацией 0,1 мг/см³: точную навеску клетодим сульфона (10 ± ОД) мг помешают в мерную колбу вместимостью 100 см³, растворяют в 50—60 см³ ацетонитрила, доводят объем до метки ацетонитрилом и тщательно перемешивают.

7.4.8.    Раствор клетодим сульфона Ns 9 с концентрацией 5,0 мкг/см³ для градуировки: в мерную колбу вместимостью 100 см³ вносят 5,0 см³ основного раствора и доводят до метки ацетонитрилом, тщательно перемешивают.

7.4.9.    Рабочие растворы клетодим сульфона Ns 10—12 с концентрацией 0,5—2,5 мкг/см³ для градуировки: в мерные колбы вместимостью 100см³ помещают 10; 20 и 50,0см³ раствора №9 и доводят до метки ацетонитрилом, тщательно перемешивают. Получены рабочие растворы с концентрациями клетодима 0,5; 1,0 и 2,5 мкг/см³.

Основные и градуировочные растворы можно хранить в холодильнике при температуре 0—4 °С в течение 15 дней.

МУК 4.1.3362—16

7.4.10. Рабочий раствор клетодима, клетодим сульфона и клето-дим сульфоксида № 2—4 с концентрацией по 1,0 мкг/см³ каждого для изучения хроматографического поведения клетодима и его метаболитов на патроне для твердофазной экстракции: в мерную колбу вместимостью 10 см³ помещают по 2,0 см³ рабочих растворов № 1,5, 9, доводят до метки ацетонитрилом и тщательно перемешивают.

При изучении полноты извлечения клетодима используют растворы, приготовленные из основного раствора методом последовательного разбавления по объему ацетонитрилом.

7.5. Построение градуировочного графика

Для установления градуировочной характеристики (площадь пика -концентрация клетодима, клетодим сульфона и клетодим сульфоксида в растворах) в хроматограф вводят по 20 мм³ градуировочных растворов (не менее 3 параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4 точек по диапазону измеряемых концентраций). Затем измеряют площади пиков и строят графики зависимости среднего значения площадей пиков от концентрации клетодима, клетодим сульфона и клетодим сульфоксида в градуировочных растворах.

Методом наименьших квадратов рассчитывают градуировочные коэффициенты (К) в уравнениях линейной регрессии:

С = KS_у где

S - площадь пика 1радуировочного раствора.

Градуировку признают удовлетворительной, если значение коэффициента линейной корреляции оказывается не ниже 0,99.

Градуировочную характеристику необходимо проверять при замене реактивов, хроматографической колонки или элементов хроматографической системы, а также при отрицательном результате контроля градуировочного коэффициента.

Градуировочную зависимость признают стабильной при выполнении следующего условия:

1£^.100<^,где

С - аттестованное значение массовой концентрации клетодима (клетодим сульфона и клетодим сульфоксида) в градуировочных растворах;

С_к - результат контрольного измерения массовой концентрации клетодима (клетодим сульфона и клетодим сульфоксида) в градуировочных растворах;

13

Контр. - норматив контроля градуировочного коэффициента, % (Контр. - 10 % при Р = 0,95).

7.6. Проверка хроматографического поведения клетодима и

его метаболитов на патроне для твердофазной экстракции

На подготовленный патрон (п. 7.2) вносят 1 см³ рабочего стандартного раствора, приготовленного по п. 7.4.10, с концентрацией клетодима, клетодим сульфона, клетодим сульфоксида по 1,0мкг/см³ каждого. Промывают патрон 3 см³ гексана, элюат отбрасывают. Затем элюируют клетодим раствором № 1 со скоростью 1—2 капли в секунду. Отбирают 3 фракции по 2 см³, упаривают досуха, растворяют в 1 см³ каждую и анализируют по п. 9.3.

Фракции, содержащие клетодим, объединяют и вновь анализируют.

Продолжают элюировать клетодим сульфон раствором № 2 со скоростью 1—2 капли в секунду. Отбирают 3 фракции по 2 см³, упаривают досуха, растворяют в 1 см³ ацетонитрила каждую и анализируют по п. 9.3.

Фракции, содержащие клетодим сульфон, объединяют и вновь анализируют.

Продолжают элюировать клетодим сульфоксид раствором № 3 со скоростью 1—2 капли в секунду. Отбирают 3 фракции по 2 см³, упаривают досуха, растворяют в 1 см³ ацетонитрила каждую и анализируют по п. 9.3.

Фракции, содержащие клетодим сульфоксид, объединяют и вновь анализируют.

Устанавливают концентрацию вещества в элюатах, определяют полноту смывания с патрона и необходимый для очистки объем элюентов.

Примечание. Проверку хроматографического поведения клетодима и его метаболитов на патроне следует проводить обязательно, поскольку профиль вымывания может изменяться при использовании новой партии патронов и растворителей.

8. Отбор проб и хранение

Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (№2051-79 от 21.08.79) а также в соответствии с ГОСТ Р 51809-01 «Капуста белокочанная, свежая, реализуемая в розничной торговой сети. Технические условия»; ГОСТ 1725-85 «Томаты свежие. Технические условия»; ГОСТ 28674-90 «Горох. Требования при заготовках и поставках»; ГОСТ Р 56105-2014 «Гречиха. Техниче-

МУК 4.1.3362—16

ские условия». Пробы томатов и капусты хранят в морозильной камере при температуре -18 °С. Для длительного хранения зерно гороха и гречиху подсушивают при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света. Сухие образцы могут храниться в течение года. Перед анализом пробы гороха и гречихи доводят до стандартной влажности и измельчают. Пробы томатов и капусты перед анализом, не размораживая, измельчают на терке или в гомогенизаторе.

9. Проведение определения

9.1. Экстракция клетодима и его метаболитов из проб гречихи и гороха Навеску измельченной пробы 10 г помещают в центрифужный стакан на 100 см³, добавляют 2 г хлорида натрия и 30 см³ хлороформа, плотно закрывают крышкой, встряхивают на механическом встряхива-теле в течение 30 мин и центрифугируют 10 мин (л = 4 000 об./мин). Содержимое фильтруют в кругло донную колбу емкостью 100 см³ методом декантации через фильтр низкой плотности. Экстракцию повторяют 2 раза по 30 см³ хлороформа. Объединенный экстракт упаривают досуха на вакуумном ротационном испарителе при температуре бани не выше 40 °С.

9.2. Экстракция клетодима и его метаболитов из проб плодов томатов, томатного сока и капусты белокочанной Навеску измельченной пробы или томатного сока 10 г помещают в коническую колбу на 100 см⁵, добавляют 2 г хлорида натрия и 30 см³ хлороформа, плотно закрывают пробкой и встряхивают на механическом встряхивателе в течение 30 мин. Экстракт переносят в делительную воронку на 100 см³ и отделяют органическую фазу, фильтруя ее через слой безводного сульфата натрия в круглодонную колбу емкостью 100 см³. Водную фазу возвращают к навеске и повторяют экстракцию 2 раза по 30 см³ хлороформа. Объединенный экстракт упаривают досуха на вакуумном ротационном испарителе при температуре бани не выше 40 °С.

9.3. Очистка на патроне для твердофазной экстракции

Сухой остаток, полученный по п. 9.1—9.2, растворяют в 1 см³ гексана и вносят на предварительно кондиционированный патрон (п. 7.2), колбу ополаскивают 1 см³ гексана и также наносят на патрон. Патрон промывают 3 см³ гексана, элюат отбрасывают. Клетодим элюируют 5 см³ раствора № 1 (фракция 1), продолжают элюировать клетодим суль-

15

ББК51.23

0-62

0-62 Определение остаточных количеств клетодима и его основных метаболитов в плодах томатов и томатном соке, капусте белокочанной, гречихе и горохе (нуте) методом высокоэффективной жидкостной хроматографии: Методические указания.—М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2017.—19 с.

ISBN 978—5—7508—1533—3

1.    Разработаны сотрудниками ФГБНУ «Всероссийский НИИ защиты растений» (В. И. Долженко, С. Е. Маслаков) и ООО «Инновационный центр защиты растений» (И. А. Цибульская, В. Ф. Павлова).

2.    Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 20 мая 2016 г. № 1).

3.    Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А. Ю. Поповой I июля 2016 г.

4.    Введены впервые.

ББК 51.23

ISBN 978—5—7508—1533—3

© Роспотребнадзор, 2017 © Федеральный центр гигиены и

эпидемиологии Роспотребнадзора, 2017

Химически чистый клетодим представляет собой вязкую жидкость светло-желтого цвета со слабым ароматическим запахом.

Удельная масса технического клетодима - 1 140 кг/м³.

Давление паров при 25 °С менее 0,013 мПа.

Разлагается при температуре ниже точки кипения.

Растворимость в воде 54 мг/л при pH - 7.

Растворимость в органических растворителях: более 900 г/л в большинстве растворителей.

Коэффициент распределения в системе октанол-вода - 1,5 * 10⁷.

Температура вспышки 62 °С.

Клетодим нестабилен. Разлагается под действием УФ света, при повышенных температурах и экстремальных значениях pH. В аэробных условиях окисляется и разлагается с периодом полураспада от 1 до 3 дней. Относительно устойчив в водных растворах с pH 7—10 при отсутствии солнечного света. Период полураспада в результате гидролиза в водных растворах с pH 7 и pH 9 составляет 300 и 310 дней соответственно.

Основные продукты метаболизма - клетодим сульфон и клетодим сульфоксид.

Основные метаболиты:

Клетодим сульфоксид

Название по ИСО: клетодим сульфоксид.

Название действующего вещества по ИЮПАК: (Е,Е)-(+)-2-{1-[[3-хлоро-2-(пропенил) окси] имино]пропил}-5-[2-(этилсульфоксид)про-пил]-3-гидрокси-2-циклогексен-1

Структурная формула:

ОСН₂СН=СНС1

II

.с-сн₂сн₃

он

Эмпирическая формула: C17H26CINO4S Молекулярная масса: 375,9.

Химически чистый клетодим сульфоксид представляет собой белое кристаллическое вещество.

Растворимость в органических растворителях: хорошо растворим в большинстве органических растворителей.

4

МУК 4.1.3362—16

Является основным метаболитом при разложении клетодима в почве в аэробных условиях, в воде (при условиях, способствующих фотолизу) и растениях. Клетодим сульфоксид нестабилен. Период полураспада в почве от 2,5 до 20 дней.

Клетодим сульфон.

Название по ИСО: клетодим сульфон.

Структурная формула:

CH₃CH₂-S-CHCH₂ О

Химически чистый клетодим сульфон представляет собой белое кристаллическое вещество.

Растворимость в органических растворителях: хорошо растворим в большинстве органических растворителей.

Является одним из основных метаболитов при разложении клетодима в почве в аэробных условиях. Клетодим сульфон нестабилен. Период полураспада в почве от 1 до 2 дней.

Краткая токсикологическая характеристика. Острая пероральная токсичность LD₅₀ для крыс 300—623 мг/кг, острая дермальная токсичность LD50 для крыс 2 ООО мг/кг. Оказывает незначительное раздражающее действие на слизистую глаз кролика. Побочные отрицательные эффекты не обнаружены.

Область применения препарата: послевсходовый гербицид для применения на широколистных культурах (свекле, картофеле, масличных культурах, бобовых и других) для борьбы с одно- и многолетними сорняками.

Гигиенические нормативы для клетодима в России: МДУ в продукции: горох - 2,0 мг/кг; томаты - 1,0 мг/кг; для капусты белокочанной и гречихи не установлен.

1. Погрешность измерений

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 нс превышает значений, приведенных в табл. 1, для соответствующих диапазонов концентраций.

5

МУК 4.1.3362—16

7

2. Метод измерений

Определение клетодима и его метаболитов в образцах осуществляется методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием УФ-детектора после его экстракции из образцов гороха и гречихи, белокочанной капусты, томатов и томатного сока и очистки на патронах для твердофазной экстракции (ТФЭ).

Идентификация клетодима и его метаболитов проводится по временам удерживания, количественное определение - методом абсолютной калибровки.

Избирательность метода обеспечивается сочетанием условий подготовки проб и хроматографирования.

3. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы

3.1. Средства измерении Жидкостный хроматограф с УФ-дстектором, снабженный дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки Весы аналитические с пределом взвешивания до 210 г и пределом допускаемой погрешности 0,1 мг    ГОСТ

Весы технические с пределом взвешивания до 150 г и пределом допускаемой погрешности 0,1 г    ГОСТ

Колбы мерные на 10, 50, 100 и 1 000 см³ ГОСТ Микродозаторы одноканальные переменного объема от 100 до 1 000 мм³ и от 1 до 5 см³ Цилиндры мерные    на 50, 100 и 250 см³    ГОСТ

Примечание. Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы

Ацетонитрил для ВЭЖХ Ацетон, чда

Вода бидистиллированная, деионизированная Гексан, хч

Клстодим, аналитический стандарт с содержанием основного компонента 99,0 %

МУК 4.1.3362—16

Клетодим сульфоксид, аналитический стандарт с содержанием основного компонента 99,0 %

Клетодим сульфон, аналитический стандарт с содержанием основного компонента 99,0 % Натрий сернокислый безводный (сульфат), хч Натрий хлористый (хлорид натрия), хч Подвижные фазы для ВЭЖХ: смесь ацетонитрила и 1 % водного раствора уксусной кислоты в соотношениях 70 : 30 и 60 : 40 Раствор № 1 (гексан-этилацетат в соотношении 9 : 1)

Раствор № 2 (гексан-этилацетат в соотношении 3 : 1)

Раствор № 3 (гексан-этилацетат в соотношении 1 :4)

Уксусная кислота (ледяная), хч Хлороформ, чда

Этиловый эфир уксусной кислоты (этилаце-тат), чда

Примечание. Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки растворителей.

3.3. Вспомогательные устройства и материалы

Аналитическая колонка, заполненная сорбентом с привитыми монофункциональными полярными группами С18, (150 х 3,9) мм с зернением 5 мкм

Воронки делительные емкостью 100 и 250 см³ Воронки химические конусные Колбы круглодонные на шлифе вместимостью 10, 50, 100 и 250 см³

Колбы плоскодонные конические вместимостью 100 см³

Патроны для твердофазной экстракции, заполненные гидрофильным слабокислотным сорбентом с постоянной активностью, на основе гексадецилсилана (С 16), масса сорбента по 0,4 г Ротационный вакуумный испаритель с мембранным насосом, с пределом вакуума до 10 мбар

9