Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование _Российской Федерации_
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Определение остаточных количеств флумиоксазина в семенах и масле подсолнечника методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
Методические указания МУК 4.1.2548—09
Издание официальное
Москва • 2009
Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека
4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ, БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Определение остаточных количеств флумиоксазина в семенах и масле подсолнечника методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
Методические указания МУК 4.1.2548—09
МУК 4.1.2548—09
промывку отбрасывают. Флумиоксазин элюируют 3 см3 ацетона в чистую круглодонную колбу вместимостью 10 см . Элюат упаривают досуха на ротационном испарителе (40 °С), сухой остаток растворяют в 2 см3 смеси гексан — этилацетат (75 : 25) и полученный раствор количественно вносят в подготовленный концентрирующий патрон, заполненный силикагелем 60. Патрон промывают 2 см3 смеси гексан — этилацетат (75 : 25). Фильтрат и промывку отбрасывают. Флумиоксазин элюируют 2 см3 этилацетата. Полученный раствор упаривают досуха на ротационном испарителе (40 °С), сухой остаток растворяют в 2 см3 подвижной фазы и 10 мм3 образца вводят в жидкостный хроматограф.
2.6.2. Определение флумиоксазина в масле подсолнечника. Навеску масла (20 г) помещают в коническую колбу вместимостью 250 см3, прибавляют 20 см3 воды и 80 см3 ацетонитрила и экстрагируют флумиоксазин на ультразвуковой бане в течение 15 мин. Колбу помещают на 30 мин в холодильник для более полного разделения слоев. Содержимое колбы осторожно переносят в делительную воронку, отделяют нижний слой масла и отбрасывают. Оставшийся в воронке водно-ацетонитрильный слой дважды промывают 20 см3 гексана и упаривают на ротационном испарителе (40 °С) до полного удаления ацетонитрила. Водный остаток подвергают очистке на концентрирующих патронах также, как это описано в п. 2.6.1. Сухой остаток растворяют в 2 см3 подвижной фазы и 10 мм3 образца вводят в жидкостный хроматограф.
2.6.3. Условия хроматографирования. Ультраэффективный жидкостный хроматограф «ACQUITY» фирмы Waters с быстросканирующим УФ детектором, снабженный дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки. Колонка - ACQUITY UPLC ВЕН С18 (100 х 2,1) мм, 1,7 мкм (Waters). Температура колонки 30 ± 1 °С. Подвижная фаза: ацетонитрил - 0,005 М ортофосфорная кислота в соотношении 55 :45. Скорость потока элюента: 0,2 см3/мин. Рабочая длина волны 290 нм. Объем вводимой пробы 10 мм3. Время удерживания флумиоксазина 3,9 ± 0,1 мин.
Альтернативные условия хроматографирования: жидкостный
хроматограф «Breeze» фирмы Waters с УФ детектором и дегазатором. Рабочая длина волны 290 нм. Аналитическая колонка Spherisorb ODS2 (Waters) 150 х 2,1 мм, 3 мкм. Подвижная фаза ацетонитрил - 0,005 М ортофосфорная кислота в соотношении 50 : 50. Скорость потока элюента 0,2 см3/мин. Дозируемый объем 20 мм3.
3. Обработка результатов анализа
Содержание флумиоксазина в образцах семян и масла подсолнечника {Ху мг/кг) вычисляют по формуле:
S\- площадь пика флумиоксазина в стандартном растворе, (мВ-сек); Яг - площадь пика флумиоксазина в анализируемой пробе, (мВ*сек); V - объём пробы, подготовленной для хроматографического анализа, см3;
Р - навеска анализируемого образца, г;
С - концентрация стандартного раствора флумиоксазина, мкг/см3. Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор флумиоксазина 1 мкг/см3, разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ.
4. Проверка приемлемости результатов параллельных определений
За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает придела повторяемости (1):
Хи Х2 - результаты параллельных определений, мг/кг; г - значение предела повторяемости (г = 2,8ог).
При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
5. Оформление результатов
Результат анализа представляют в виде:
X ± А мг/кг при вероятности Р = 0,95, где
X - среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;
А - граница абсолютной погрешности, мг/кг;
S - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.
Если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
В случае, если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: «содержание вещества в пробе «менее нижней границы определения» (например: менее 0,05 мг/кг*, где *- 0,05 мг/кг - предел обнаружения флумиоксазина в семенах подсолнечника)
6, Контроль качества результатов измерений
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».
6.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.
6.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок. Величина добавки Сд должна удовлетворять условию:
Величина добавки Сд должна удовлетворять условию:
Сд * АяХ + Дл,г .где
±Ап у (±Ая Х.) - характеристика погрешности (абсолютная по-
грешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно) мг/кг, при этом:
Д* = ±0,84Д , где
Д - граница абсолютной погрешности, мг/кг;
S - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %. Результат контроля процедуры Кк рассчитывают по формуле:
Kk - X'-Х~Сд, где
МУК 4.1.2548—09
X', Х,Сд - среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 11) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки, соответственно, мг/кг.
Норматив контроля К рассчитывают по формуле:
k = JaIx+aI'X .
Проводят сопоставление результата контроля процедуры (Кк) с нормативом контроля (К).
Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию
№* (2)
процедуру анализа признают удовлетворительной.
При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры к их устранению.
6.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости:
Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):
ХиХг - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;
R ~ предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.
7. Требования техники безопасности.
При проведении работы необходимо соблюдать требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими, легковоспламеняющимися веществами (ГОСТ 12.1005-88).
При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа и работе с электроустановками соблюдать правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкциями по эксплуатации приборов.
Помещение лаборатории должно соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91.
13
МУК 4.1.2548—09
8. Требования к квалификации оператора
Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист-химик, имеющий опыт работы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, ознакомленный с руководством по эксплуатации жидкостного хроматографа, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 6.
9. Разработчики
Долженко В. И., Цибульская И. А„ Журкович И. К., Луговки-на Н. В., Ковров Н. Г.
Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений, Санкт-Петербург.
Определение остаточных количеств флумиоксазина в семенах и масле подсолнечника методом высокоэффективной жидкостной хроматографииМетодические указания МУК 4,1.2548—09
Технический редактор А. В. Терентьева
Подписано в печать 18.12.09 Формат 60x88/16 Печ. л. 1,0
Тираж 200 экз.
Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 127994, Москва, Вадковский пер., д. 18, стр. 5, 7
Оригинал-макет подготовлен к печати и тиражирован отделом издательского обеспечения Федерального центра гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора 117105, Москва, Варшавское ш., 19а Отделение реализации, тел ./факс 952-50-89
ББК51.21
060
060 Определение остаточных количеств флумиоксазина в семенах и масле подсолнечника методом высокоэффективной жидкостной хроматографии: Методические указания.—М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора» 2009.—14 с.
1. Разработаны Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана (Долженко В. И., Цибульская И. А., Журкович И. К., Луговкина Н. В., Ковров Н. Г.).
2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 25 июня 2009 г. № 2).
3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 9 сентября 2009 г.
4. Введены в действие с 1 декабря 2009 г.
5. Введены впервые.
ББК 51.21
© Роспотребнадзор, 2009 © Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2009
МУК 4.1.2548—09
Содержание
1. Вводная часть..........................................................................................................4
1.1. Краткая характеристика препарата................................................................4
1.2. Краткая токсикологическая характеристика.................................................5
1.3. Область применения препарата......................................................................5
2. Методика определения остаточных количеств флумиоксазина в
семенах и масле подсолнечника методом ВЭЖХ................................................5
2.1. Основные положения.......................................................................... 5
2.2. Реактивы и материалы.....................................................................................6
2.3. Приборы и посуда.................................................... 7
2.4. Отбор и хранение проб....................................................................................8
2.5. Подготовка к определению.............................................................................8
2.6. Проведение определения................................................................................9
3. Обработка результатов анализа...........................................................................11
4. Проверка приемлемости результатов параллельных определений..................11
5. Оформление результатов......................................................................................11
6. Контроль качества результатов измерений.........................................................12
7. Требования техники безопасности......................................................................13
8. Требования к квалификации оператора..............................................................14
9. Разработчики.........................................................................................................14
3
МУК 4.1.2548—09
УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации
Г. Г. Онищенко
9 сентября 2009 г.
Дата введения: 1 декабря 2009 г
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Измерение концентраций прометрина в атмосферном воздухе населенных мест методом капиллярной газожидкостной хроматографии
Методические указания МУК 4.1.2548—09
1. Вводная часть
1.1. Краткая характеристика препарата
Действующее вещество: флумиоксазин.
Название действующего вещества но номенклатуре ИЮГ1АК: У-(7-фтор-3,4-дигидро-3-оксо-4-нроп-2-инил-2Я-1,4-бензоксазин-6-ил)-циклогекс-1 -ен-1,2-дикарбоксамид.
Структурная формула:
Эмпирическая формула: C19H15FN2O4.
4
МУК 4.1.2548—09
Молекулярная масса: 354,3.
Химически чистое вещество: желтовато-коричневый порошок без запаха.
Температура плавления: 202—204 °С.
Давление пара при 22 °С: 0,32 мПа. X^logP = 2,55 (20 °С).
Растворимость в воде (25 °С) - 1,79 г/л, растворим в большинстве органических растворителей. Гидролиз: DT50 4,2d (pH 5), Id (pH 7), 0,0Id (pH 9). Стабилен при хранении.
1.2. Краткая токсикологическая характеристика
ЛД50 для крыс и мышей > 5 000 (ЛД50 дерм. > 2 000) мг/кг. СК50 (96 ч, в мг/л): для ушастого окуня >21, для радужной форели 2,3. Минимально раздражает глаза, не раздражает кожу кроликов.
Гигиенические нормативы: МДУ для подсолнечника не установлен.
1.3'. Область применения препарата
Гербицид для борьбы с однолетними двудольными и некоторыми однолетними злаковыми сорными растениями на посевах подсолнечника, сои, кукурузы и других.
2. Методика определения остаточных количеств флумиоксазина в семенах и масле подсолнечника методом ВЭЖХ
2.1. Основные положения
2.1.1 .Область применения и принцип метода. Настоящий документ устанавливает методику определения остаточных количеств флумиоксазина в семенах подсолнечника в диапазоне концентраций 0,05— 0,5 мг/кг, в масле подсолнечника - 0,025—0,25 мг/кг.
Методика основана на определении флумиоксазина методом ВЭЖХ с использованием УФ детектора после его извлечения из образцов водно-ацетонитрильной смесью с последующей очисткой жидкостной экстракцией и на концентрирующих патронах.
2.1.2. Метрологические характеристики. При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1, для соответствующих диапазонов концентраций.
5
МУК 4.1.2548—09
|
Таблица 1
Метрологические параметры |
|
Объект
анализа |
Диапазон определяемых концентраций, мг/кг |
Показатель точности (граница относительной погрешности),
±6,%/* =0,95 |
Стандартное отклонение повторяемости, аг, % |
Предел повторяемости, г, % |
Предел воспроизводимости, /?, % |
|
Семена |
0,05—0,1 |
50 |
4,2 |
11,8 |
12,9 |
|
подсол
нечника |
0,1—0,5 |
25 |
4,6 |
12,9 |
15,5 |
|
Масло |
0,025—0,1 |
50 |
3,6 |
10,1 |
12,1 |
|
подсол
нечника |
0,1—0,25 |
25 |
3,8 |
10,6 |
12,7 |
|
|
Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для полного диапазона концентраций (п ~ 20) приведены в табл. 2. |
|
Таблица 2
Полнота извлечения флумиоксазина, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата дла п - 20, Р = 0,95 |
|
Анализи
руемый
объект |
Предел обнаружения, мг/кг |
Диапазон
определяемых
концентраций,
мг/кг |
Среднее значение определения, % |
Стандартное отклонение,
5, % |
Доверительный интервал среднего результата, ±, % |
|
Семена
подсол
нечника |
0,05 |
0,05-0.5 |
86,5 |
5,2 |
4,7 |
|
Масло
подсол
нечника |
0,025 |
0,25-0,25 |
90,9 |
4,8 |
4,4 |
|
|
2.1.3. Избирательность метода. Избирательность метода определения флумиоксазина достигается условиями подготовки проб и хроматографического анализа. |
2.2. Реактивы и материалы
Ацетон, осч ТУ 6-09-3513—86
Ацетонитрил для ВЭЖХ, «В-200нм»,
Сорт 5 или х.ч. ТУ 6-09-3534—87
Бумажные фильтры «красная лента» ТУ 6.091678—86
Вода бидистиллироваиная, деионизированная ГОСТ 6709-79
6
МУК 4.1.2548—09
Флумиоксазин, аналитический стандарт с содержанием д.в. 100 % (Сумитомо Кем. Со Лтд)
Кислота ортофосфорная, хч,
0,005 М водный раствор ГОСТ 6552-80
н-Гексан, х.ч., свежеперегнанный ТУ 2631-003-05807999—98
Метанол, х.ч. ГОСТ 6995-77
Этилацетат, х.ч., с изм. 1,2,3 ГОСТ 22300-76
Подвижная фаза для ВЭЖХ: смесь ацетонитрила - 0,005 М Н3РО4 (55 :45, по объему).
Концентрирующие патроны, заполненные силикагелем 60 (0,040—0,063 mm), 0,5 г, Merck Концентрирующие патроны Диапак С16 (0,4 г),
БиоХимМак
2.3. Приборы и посуда Жидкостный хроматограф «ACQUITY» фирмы «Waters» с быстросканирующим УФ детектором, снабженный дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки или «Breeze» фирмы «Waters» или аналогичный Аналитические колонки ACQUITY UPLC ВЕН С18 (100 х 2,1) мм, 1,7 мкм (Waters) и Spherisorb ODS2 (2,1 х 150) мм, 3 мкм (Waters)
Баня ультразвуковая «Серьга» или аналогичная Весы аналитические ВЛА-200или аналогичные Воронка Бюхнера
Мельница ножевая РМ -120 и лабораторная зерновая ЛМЗ Насос водоструйный Центрифуга ОПн-8УХЛ4.2 Бидистиллятор
Аллонж прямой с отводом для вакуума
(для работы с концентрирующими патронами)
Шприц медицинский с разъемом Льюера
PH-метр универсальный ЭВ-74
Колбы плоскодонные на шлифах
КШ500 29/32 ТС
Колбы круглодонные на шлифах
КШ50 29/32 ТС
Воронки лабораторные В-75-110
7
МУК 4 Л .2548—09
Цилиндры мерные на 100,250 и 1 ООО см3 Колбы мерные на 25, 50, 100 и 1 ООО см3 Пипетки на 1, 2, 5, 10 см3 Микродозаторы Ленпипет переменного объем от 200 до 1 000 мм3 и от 1 до 5 см3
2.4. Отбор и хранение проб
Отбор проб семян подсолнечника производится в соответствии с ГОСТ 10852-86. «Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб». Семена хранят при комнатной температуре в полотняных мешочках, перед анализом доводят до стандартной влажности и измельчают. Масло подсолнечника хранят в холодильнике при температуре 0—4 °С в герметично закрытой стеклянной таре в течение 6 мес.
2.5. Подготовка к определению
2.5.1, Подготовка и очистка реактивов и растворителей. Органические растворители при необходимости перед началом работы очищают, сушат и перегоняют в соответствии с типовыми методиками. Гексан встряхивают с небольшими порциями концентрированной серной кислоты до прекращения окрашивания свежей порции кислоты, затем промывают водой, 2 %-м раствором гидроксида натрия и снова водой, после чего его сушат над гидроксидом натрия и перегоняют. Ацетон перегоняют над перманганатом калия и поташом (на 1 дм3 ацетона 10 г КМп04 и 2 г К2С03). Ацетонитрил сушат над пентоксидом фосфора и перегоняют; отогнанный растворитель повторно перегоняют над углекислым калием. Этилацетат последовательно промывают 5 % водным раствором карбоната натрия и насыщенным раствором хлористого кальция, высушивают над безводным карбонатом калия и перегоняют над пентоксидом фосфора.
2.5.2. Кондиционирование колонки. Перед началом анализа аналитические колонки кондиционируют в потоке подвижной фазы (0,1— 0,2 см3/мин) до стабилизации нулевой линии в течение 1 ч.
Приготовление растворов.
Для приготовления 0.005 М раствора ортофосфорной кислоты 0,5 г 98% ортофосфорной кислоты помещают в мерную колбу объемом 1 дм3, растворяют в бидистиллированной воде и доводят объем до метки.
Приготовление стандартного и градуировочных растворов:
Точную навеску флумиоксазина (50 мг) помещают в мерную колбу объемом 100 см3, растворяют в ацетонитриле и доводят до метки. (Стандартный раствор с концентрацией 0,5 мг/см3). Градуировочные растворы с концентрациями 0,25; 0,5; 0,75 и 1,0мкг/см3 готовят методом по-
МУК 4.1.2548—09
следовательного разбавления по объему, используя раствор подвижной фазы - смесь ацетонитрил - 0,005 М ортофосфорная кислота (55 : 45, по объему).
Стандартный раствор можно хранить в холодильнике в силанизи-рованном или тефлоновом флаконе при температуре 0—4 °С в течение 1 месяца, градуировочные растворы используют в течение рабочего дня.
При изучении полноты извлечения флумиоксазина используют ацетонитрильные растворы вещества.
Построение градуировочного графика.
Для построения градуировочного графика (площадь пика - концентрация флумиоксазина в растворе) в хроматограф вводят по 10 мм3 градуировочных растворов (не менее 3-х параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4-х точек по диапазону измеряемых концентраций). Затем измеряют площади пиков и строят 1рафик зависимости среднего значения площади пика от концентрации флумиоксазина в градуировочном растворе.
Подготовка приборов и средств измерения
Установка и подготовка всех приборов и средств измерения проводится в соответствии с требованиями технической документации.
Подготовка концентрирующих патронов для очистки экстракта
2.5.6.1, Кондиционирование патрона, заполненного гексадецилси-ликагелем - Диапак С16 (0,4 г), осуществляют, пропуская через патрон последовательно по 1 см3 метанола и воды. Элюат отбрасывают.
2.5.6.2. Кондиционирование патрона для повторной очистки экстрактов семян и масла, заполненного Силикагелем 60 (0,5 г), осуществляют пропусканием 1 см3 смеси гексана и этилацетата в соотношении 75 :25.
2.6\ Проведение определения
2.6.1. Определение флумиоксазина в семенах подсолнечника. Навеску размолотых на лабораторной мельнице семян массой 10 г помещают в коническую колбу вместимостью 250 см3, прибавляют 10 см3 воды и 40 см3 ацетонитрила. Флумиоксазии экстрагируют на ультразвуковой бане в течение 10 мин. Суспензию фильтруют в вакууме через воронку Бюхнера с фильтром «красная лента». Экстракцию повторяют и объединенный экстракт дважды промывают в делительной воронке 20 см3 гексана. Раствор упаривают на ротационном испарителе при температуре бани не выше 40 °С до полного удаления ацетонитрила. Водный остаток пропускают через концентрирующий патрон Диапак С16, откондицио-нированный по п. 2.5.6.1. Патрон промывают 4 см3 воды. Фильтрат и
