«УТВЕРждак»

Главный Государственный санитарный врач РФ, Первый зам.    у^а^зхрансния РФ

4-

«_>

Методические указания по определению остаточных количеств флу гриафола в зерне гороха, семенах и масле подсолнечника методом газожидкостной хроматографии

!. Вводная часть Фирма регистрант: Кеминова А/С. Торговое наименование: Импакт, Винцит. Действующее вещество: флутриафол Структурная формула:

СА: (±) -а-(2-фторфенил)-а-(4-фторфенил>-1Н-1,2,4-триазол-1 -этанол Брутто формула: C^HijFzNjO Мол. масса: 301.3

Химически чистый препарат - твердое белое кристаллическое вещество Температура плавления: 130°С. Давление паров при 20°С 7.1 х10* тРа.

Коэффициент распределения н-октанол/вода: Ko_W log Р“2.3 ( 20°С )

Растворимость (20ч2): в воде 130 мг/л, в ацетоне 190 г/л, дихлорметаме 150 г/л, метаноле 69 г/л, гексане 0.3 г/л.

В почве период полураспада DTjo 65-125 дней.

Оральная токсичность (LDso) для крыс 1480 мг/кг.

Гигиенические нормативы, МДУ (мг/кг): зерно хлебных злаков, свекла сахарная - 0.1, виноград - н.д., яблоки - 0.1 *. Для зерна гороха, семян и масла подсолнечника гигиенические нормативы не установлены.

/39

(Кишеть применения: фунгицид широкого спектра действия для борьбы с болезнями листа и полоса зерновых культур, также применяется для защиты плодовых, зернобобовых и других культур. Используется для борьбы с почвенными, семенными и аэрогенными инфекциями.

/ Методика определения флутриафола в зерне гороха, семенах и масле подсолнечника мегодом газожидкостной хроматографии

) I Основные положения ; 1.1. Принцип метода

Метод определения флутриафола в растительных объектах основан на экстракции Пестицида органическими растворителями и очистке перераспределением между двумя намешивающимися жидкими фазами, а также при необходимости, на колонке с силикагелем. Количественное определение проводят методом газожидкостной чюмлтографии с использованием термоионного детектора (ТИД).

i 1.2. Избирательность метода

Избирательность метода обеспечивается очисткой экстрактов анализируемых проб и и|метанием условий хроматографирования. Присутствие других пестицидов, близких по химическому строению и области применения, определению не мешает.

Л. 3. Метрологическая характеристика метода

Метрологическая характеристика метода представлена в таблицах 1 и 2.

Таблица 1 Метрологическая характеристика метода

(>Г)ьскт анализа Предел обнаружения мг/кг Диапазон измеряемых концентраций, мг/кг Среднее значение определения, % (для каждого объекта п=24) >гносительное стандартное отклонение S, % Доверительны й интервал среднего, п«24, Р=0.95 1 орех, tCPHO 0.05 0.05-0.5 83.1 5.20 4.95 •им. о л мечник, «смска 0.05 0.05-0.5 80.4 5.45 4.15 |иш олнечник, млело 0.05 0.05-0.5 79.0 5.65 4.15

Таблица 2 Полнота определения флутриафола в зерне гороха, семенах и масле подсолнечника

Среда Внесено, мг/кг Найдено, мг/кг Стандартное отклонение, ± Полнота определения, % горох, зерно 0.05 0.0402 0.0031 80.4 0.1 0.0816 0.0064 81.6 0.2 0.1640 0.0100 82.0 0.5 0.4275 0.0220 88.5 Среднее 83.1 подсолнечник, семена 0.05 0.0380 0.0021 76.0 0.1 0.0792 0.0072 79.2 0.2 0.1648 0.0120 82.4 0.5 0.3200 0.0200 83.8 С редисе 80.4 подсолнечник. масло 0.05 0.0376 0.0024 75.1 0.1 0.0792 0.0072 792 0.2 0.1592 0.0110 79.6 0.5 0.441 0.0210 82.2 Среднее 79.0

2.2. Реактивы, материалы

Флутриафол, аналитический стандарт (фирма " Кеминова .Л/С" )

Ацетон, о.с.ч.9-5. ТУ 2633-039-4493179-00 или ч.д.а., ГОСТ 2603-79

Вода дистиллированная, ГОСТ 7602-76

н-Гексан, х.ч..ТУ 6-09-3375-78

Натрий сернокислый безводный, ч.д.а., ГОСТ 4166-76

Натрия хлорид, х.ч., ГОСТ 4233-77.

Стекловата.

Силикагель L 100/400 для хроматографии (0.040-0 063мм) (Хсмапол, Венгрия) Серная кислота ОСЧ 11-5 ГОСТ 14262-78.

Хлористый метилен, ч.д а., ТУ-2631-020-11291058-96.

2.3 Приборы и посуда.

Газовый хроматограф Цвет-550 М или аналогичный с ТИД и стеклянной насадочной колонкой, длиной 1м, внутренним диаметром 3 мм. Весы аналитические ВЛА-200, ГОСТ 34104-80Е или аналогичные.

Весы технические ВЛКТ-500, ГОСТ 24104-80.

Мельница лабора горная зерновая ЛМЗ, ТУ 1-01-0593-79.

Установка ультразвуковая «Серьга». ТУ 3.836.008.

Ротационный испаритель вакуумный ИР-1М, ТУ 25-11-917-74 или аналогичный. Микрошприц МШ-10.МШ-10М. ТУ 2-833-106.

Насос водоструйный, МРТУ 42 861-64.

Колбы плоскодонные на шлифах КШ500 29/32 ТС. ГОСТ 10384-72

/Зё>

Колбы круглодонные на шлифах КШ50 29-32 ТС, ГОСТ 10384-72. Воронки лабораторные В-75-110, ГОСТ 25 336-82.

Норонки делительные на 500, 1000 мл ВД-3-500, ГОСТ 8613-75.

I Цилиндры мерные на 100 см³, 500см³ ГОСТ 1774-74 Колбы мерные на 100 см³, ГОСТ 1770-74.

Пипетки на 1,2,5, 10 см3 , ГОСТ 22292-74.

Стаканы химические, ГОСТ 25336-82Е.

Колонка стеклянная хроматографическая длиной 30 см, диаметром 10 мм.

2.4. Отбор проб.

Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб . сльскохозяйствснной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микрохоличеств пестицидов» (№ 2051-79 от 21.08.79). Для длительного хранения зерно и семена подсушивают при комнатной температуре в отсутствие света. Сухие образцы могут храниться в течение года. Перед анализом пробы зерна и семян и (мельчают. Масло хранят в холодильнике.

2.5. Подготовка к определению.

2.5.1.    Подготовка и очистха реактивов и растворителей.

< >1 мимические растворители перед началом работы очищают, сушат и перегоняют в нкггвстствии с общепринятыми методиками. Гексан и дихлорметан встряхивают с небольшими порциями концентрированной серной кислоты до прекращения окрашивания i пежей порции, затем промывают водой, после чего сушат над щелочью и перегоняют.

2.5.2.    Кондиционирование колонки.

Перед началом анализа колонку, заполненную хроматоном N-Super (0.125-0.160 мм) с 5% SE-10. не присоединяя к детектору, копдиционируют в токе инертного газа (азот) при юмпературе 250°С в течение 8-10 часов.

! VI Приготовление стандартного и градуировочных растворов:

0« ионной раствор флутриафола готовят, количественно перенося 10 мг аналитического • шнларта флутриафола в мерную колбу на 100 мл, растворяют навеску в ацелоне. Из Нонучснного раствора флутриафола с концентрацией 100 мкг/мл готовят рабочие растворы с цоипппрациями 1 мкг/мл, 2 мкг/мл, 4 мкг/мл, 10 мкг/мл последовательным разведением в

Щдоне.

Дим внесения в образец при определении полноты извлечения используют соответствующий И янцвртный раствор флутриафола в ацетоне.

i ' 4 I [остроение градуировочного графика.

1\>построения градуировочного графика зависимости высоты (площади) пика от |пннон грации флутриафола в растворе в хроматограф вводят по I мкл градуировочных

/39

растворов (не менее 3-х параллельных измерений для каждой концентрации, нс менее 4-х точек по диапазону измеряемых концентраций), измеряют высоты (площади) пиков и строят |рафик зависимости среднего значения высоты, мм (плошали, мв/сск) пика от концентрации флутриафола и градуировочном растворе (мкг/мл).

2.5.5.    Подготовка колонки с силикагелем для очистки экстракта.

Силикагель прогревают в термостате при 120°С в течение 3-х часов и охлаждают до комнатной температуры. На дно стеклянной колонки помещают стекловату, слой 0.5 см безводного сульфата натрия и заполняют через воронку суспензией 5 г силикагеля в 25 мл гексана при открытом кране колонки, сверху наносят слой 1 см безводного сульфата натрия. Затем колонку промывают 10 мл смеси гексан : ацетон в соотношении 3 : 2 и закрывают кран, когда уровень растворителя достигнет верхнего края сорбента. Колонка готова к работе.

2.5.6.    Проверка хроматографического поведения флутриафола на колонке с силикагелем.

В подготовленную колонку пипеткой вносят 1 мл стандартного раствора флутриафола и дают впитаться. После этого в колонку вносят 10 мл смеси гексан ; ацетон (1:3), элюаг отбрасывают. Флутриафол элюируют 40 мл смеси гексан : ацетон (1:5 ), отбирая фракции по 5 мл, упаривают досуха, остаток растворяют в I мл ацетона и хроматографируют Фракции, содержащие флутриафол, объединяют, упаривают досуха, остаток растворяют в 1 мл ацетона и хроматографируют. Рассчитывают содержание флутриафола в элюате, определяя его полноту извлечения из колонки и необходимый для этого объем элюента.

Примечание: профиль вымывания флугриафола может изменяться при использовании силикагеля новой партии или другой марки.

2.5.7.    Подготовка приборов и средств измерения.

Установка и подготовка всех приборов и средств измерения проводится в соответствии с требованиями стандартов и технической документации.

2.6. Проведение определения

2.6.1. Экстракция и очистка экстрактов

2.6.1.1. Зерно гороха. Нивсску размолотого в лабораторной мельнице гороха (20 г) помещают в коническую колбу объемом 250 мл и экстрагируют флутриафол 50 мл ацетона нп ультразвуковой установке в течение 15 мин. Иадосадочнную жидкость фильтруют через складчатый фильтр " красная лента " в делительную воронку объемом 500 мл. Экстракцию повторяют дважды порциями но 50 мл ацетона. После третьей экстракции осадок переносят на фильтр, колбу ополаскивают 20 мл ацетона и 50 мл дистиллированной воды к фильтруют смывы через фильтр с осадком. К объединенному экстракту добавляют 50 мл дистиллированной воды и промывают 10 мл гексана , встряхивая делительную ворояху в течение 2-х минуг. После полного разделения слоев верхний гексановый слой отбрасывают и промывку повторяют дважды порциями по 10 мл гексана. Промытый гексаном водно ацетоновый экстракт концентрируют на роторном испарителе до объема 130-150 мл и переносят в делительную воронку, ополаскивая концентратор. Переэкстрагирукм

флутриафол в хлористый метилен трижды порциями по 50 мл, встряхивая воронку в течение 2-х минут. Нижний органический слой фильтруют через слой безводного сульфата натрия, промывают осушитель 10 мл хлористого метилена. Объединенный дихлорметановый •кстракт упаривают досуха и расгворяют в 1-2 мл ацетона. При необходимости проводят

•    •чистку на колонке с силикагелем, по п. 2.6.2.

2.6.1.2 Семена подсолнечника. Навеску очищенных от лузги и размолотых на лабораторной мельнице семян (20 г) помешают в коническую колбу объемом 500 мл и экстрагируют флутриафол 150 мл охлажденной смеси гексан : ацетон в соотношении 2 : 1 на ультразвуковой установке в течение 15 мин (ванна установки заполнена водой со льдом). >кстракт фильтруют через складчатый фильтр ’’белая лента" в делительную воронку объемом 1000 мл. Экстракцию повторяют дважды порциями экстрагента по 150 мл, после чего остаток переносят на фильтр, колбу и осадок промывают 20-30 мл экстрагирующей смеси. К объединенному экстракту в делительную воронку добавляют 100 мл дистиллированной воды и встряхивают в течение 2-х минут. После полного разделения фаз нижний водно-ицетоновый объем собирают, при этом эмульсию пограничного слоя разбивают непосредственно перед тем, как предстоит отбор эмульсионного слоя, внесением в него очень малого количества хлористого натрия. Оставшийся в делительной воронке гексановый слой промывают дважды 50 мл водного ацетона (50:50), который собирают. Объединенный ж• дно-ацетоновый экстракт упаривают на роторном испарителе до объема 150-180 мл и переносят в делительную воронку. Флутриафол переэкстрагируют в хлористый метилен фнжды порциями по 50 мл, встряхивая делительную воронку в течение 2-х минут. Нижний органический слой собирают, фильтруя через слой безводного сульфата натрия, и иыпаривают досуха на роторном испарителе. Сухой остаток растворяют в 1-2 мл ацетона и дальнейшую очистку проводят на колонке с силикагелем (п. 2.6.2).

2.6.1.3. Масло подсолнечника. 20 г масла помещают в делительную воронку объемом 500 мл, т»|>авляют 100 мл охлажденной смеси гексан : ацетон в соотношении 2 : 1 и осторожно круговыми движениями перемешивают в течение 2-3 минут. Затем добавляют 50 мл пиошллированной воды и встряхивают воронку в течение двух минут, происходит разделение слоев и перераспределение флутриафола в водно-ацетоновый слой, который

•    ••(•ирают. К гексановому слою в делительной воронке добавляют 50 мл водного ацетона <50:50), интенсивно встряхивают и после полного разделения фаз собирают водно-ицеюновый слой. Промывку гексанового слоя повторяют. Собранный объединенный jkcгрант переносят в чистую делительную воронку и переэкстрагируют флутриафол ■ пористым метиленом трижды порциями по 50 мл. Органический слой фильтруют через Пешодный сульфат натрия и выпаривают досуха на роторном испарителе. Сухой остаток |чн гиоряют в 1-2 мл ацетона и дальнейшую очистку проводят на колонке с силикагелем (и 2.6.2).

2 6.2. Очистка экстрактов на колонке с силикагелем 1*ак торенный в 1 -2 мл ацетона сухой остаток пипеткой количественно переносят в ■роматографическую колонку, колбочку ополаскивают еще 1-2 мл ацетона и вносят в Попонку, после чего открывают кран и дают раствору впитаться в сорбент. Затем в колонку вносят 10 мл смеси гексан : ацетон в соотношении 2:3, элюат отбрасывают. Флутриафол ммируют 15 мл смеси гексан : ацетон в соотношении 1 : 5, элюат собирают и упаривают я*н уха. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона и хроматографируют.

¥39

2.6.3. Услония хроматографирования

Газовый хроматограф «Цвст-550М» с ТИД или аналогичный. Колонка стеклянная I м х 1 мм, заполненная хроматоном N-Super (0.125-С. 160 мм) с Э% Ы>30.

Т емпература колонки 230°С, испарителя 240°С. детектора 380°С.

Скорость газа-носителя (азот) через колонку 30 см ^?/мнн.

Расход ьодорода 16 см /мин.

Расход воздуха 200 см^л/мин.

Шкала электрометра !6х10^,с.

Объем вводимой пробы 1 мкл. Бремя удерживания флутриафола 2 28 мин.

2.6.6. Обработка результатов анализа

Количественное определение проводят методом абсолютной калибровки, содержание флутриафола в пробе (X, мг/кг) вычисляют по формуле:

H₂*OV

х ----,

н,.р

где Н|- высота (площадь) пика флутриафола в стандартном растворе, мм;

И₂ - высота (площадь) ника флутриафола о анализируемой пробе, мм;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл;

Р - навеска анализируемого образца, г;

С - копией грация флутриафола в стандартом растворе, мкг/мл.

Содержание остаточных количеств флутриафола в анализируемом образце вычисляют как среднее из 2-х параллельных оиредслештй.

Образцы, дающие ники большие, чем стандартный раствор флутриафола 100 мкг/мл. разбавляют.

3.    Требовании техники безопасности.

При проведении работы необходимо соблюдать требования инструкции (-Основные правил* безопасной работы в химической лаборатории», общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, а также инструкции по эксплуатации газового хроматографа и электрооборудования до 400 В.

4.    Контроль погрешности измерений.

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости результатов измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МП 2335-95. ГСП Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа.

5.    Разработчики.

Должеико В.И., Цибульская И.А., Карпова Л.М.

Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений, Санкг-Петсрбург.