Государственная система санитарно-эпидемиологического нормирования ___ Российской Федерации___
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Определение остаточных количеств пестицидов в пищевых продуктах, сельскохозяйственном сырье и объектах окружающей среды
Сборник методических указаний МУК 4.1.1802—4.1.1820—03;
4.1.1822—4.1.1826—03
Выпуск 5
Издание официальное
Москва • 2007
нтарный врач РФ, хранения РФ ГТ. Онищенко
|
Главный Госуда Первый зам |
|
2003 г.
МУК 4.1
Дата введения: с ^ См*+*+* 1<пмц
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ЭСФЕНВАЛЕРАТА В СЕМЕНАХ И МАСЛЕ ПОДСОЛНЕЧНИКА И СОИ МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ.
1. Вводная часть
Фирма производитель: Август Торговое наименование: Сэмпай Действующее вещество: эсфенвалерат (ISO), Структурная формула:
($)-а-циано-3-феноксибензил-(8)-2-{4-хлорфенил)-3-метилбутират (IUPAC).
Брутто формула: C25H22CINO)
Мол. масса: 419.9.
Химически чистый препарат - бесцветное кристаллическое вещество (до 23°С). Температура плавления: 59.0-б0.2°С Давление паров при 25®С - 2Х10-4 тРа
Коэффициент распределения н-октанол/вода: K«w log Р - 6.22 (25°С)
Растворимость: в воде при 25°С - 0.002 мг/л; в к-гексане - 10-50, метаноле - 70-100,
в ксилоле, ацетоне, хлороформе, этмлацетате, DMSO, DMFA - > 600 (в г/кг при 25*С). Вещество относительно стабильно на свету, стабильно к гидролизу при pH 5.7 и 9 (25°С).
68
Класс токсичности по ВОЗ - И, ЕПА - II.
Острая пероральная токсичность (LD*)) Для крыс 75-88 мг/кг.
В России гигиенические нормативы для сои и подсолнечника не установлены.
Область применения: инсектицид широкого спектра действия (группа пиретроидов), применяется на зерновых, плодовых, горохе и др.
2. Методика определения эсфеквалератя в семенах и масле подсолнечника и сон методом газожидкостной хроматографии
2.1. Основные положения
2.1.1. Принцип метода
Методика основана на извлечении эсфенвалерата из семян и масла подсолнечника и сои водно-ацетоновым раствором или ацетонитрилом с последующей очисткой перераспределением между двумя несмешивающимися жидкостями и на колонке с флорисилом. Количественное определение проводят методом газожидкостной хроматографии с использованием электронозахватиого детектора.
2.1.2. Избирательность метода
Избирательность метода обеспечивается очисткой экстрактов анализируемых проб и сочетанием условий хроматографирования. Присутствие других пестицидов, близких по химическому строению и области применения, определению не мешает.
2.1J. Метрологическая характеристика метода
Метрологическая характеристика метода представлена в таблицах 1 и 2.
Метрологическая характеристика метода
|
Таблица 1 |
|
Объект
анализа |
Предел
обнаруже
ния
мг/кг |
Диапазон
определяемых
концентраций
мг/кг |
Среднее значение определения, %(для каждого объекта п=24) |
Относитель
ное
стандартное
отклонение
S,% |
Доверительный интервал среднего, пв24, Р=*0.95 |
|
Семена сои |
0,01 |
0 Ъ
1 © |
79.5 |
4.4 |
4.6 |
|
Семена
подсолнечника |
0.01 |
0.01 -0.1 |
77.2 |
5.3 |
5.9 |
|
Масло сои |
0.02 |
0.02 - 0.2 |
77.4 |
4.9 |
5.6 |
|
Масло |
0,02 |
0,02 - 0,2 |
78.2 |
5.3 |
5.8 |
|
подсолнечника |
|
|
|
|
|
|
SB
Полнота определения эсфеавалервгга в семенах и масле подсолнечника и сои (N••5 для каждой конц «предки)
|
Таблица 2 |
|
Среда |
Внесено,
мг/кг |
Найдено,
мг/кг |
Стандартное
отклонение,
S, мг/кг |
Доверительный
интервал,
(P-0.95, n=6),% |
Полнота определения, % |
|
Семевя сои |
0,01 |
0.0078 |
8.310* |
4.01 |
78.3 |
|
0,02 |
0.0160 |
~1.7-i0r |
5.25 |
80.0 |
|
0,05 |
0.043 |
3.8 10J |
4.10 |
80.6 |
|
0J |
0.079 |
6.310" |
5.11 |
79.0 |
|
Среднее |
79.5 |
|
Семена
подсолнечника |
0.01 |
0.0075 |
в.МО^ |
5.07 |
75.0 |
|
0.02 |
0.0152 |
2.2-10° |
5.12 |
76.0 |
|
0.05 |
0.038 |
3.510° |
6.06 |
77.4 |
|
0.1 |
0.080 |
6.6-10° |
4.81 |
80.2 |
|
Среднее |
77.2 |
|
Масло сои |
0.02 |
0.0160 |
1.2-10° |
4.71 |
80.0 |
|
0.05 |
0.038 |
3.4Ю1' |
5.68 |
75.8 |
|
0.1 |
0.077 |
7.3-10 s |
4.21 |
76.6 |
|
0.2 |
0.155 |
4. МО* |
5.10 |
77.4 |
|
Среднее |
77.4 |
|
Млело
подсолнечника |
0,02 |
0.0160 |
2.9 10" |
5.11 |
80.0 |
|
0,05 |
0.038 |
4.0 10" |
4.92 |
75.8 |
|
0,1 |
0.079 |
7.1 10" |
5.04 |
79.0 |
|
0.2 |
0.156 |
|
6.02 |
78.2 |
|
Среднее |
78.2 |
|
2.2. Реактивы и материалы.
Аналитический стандарт эсфенвалерата 99.8%
Ацетон, ч.д.а., ГОСТ 2603-79.
Ацетонитрил, х.ч., ТУ 6-09-3534-87.
Азот газообразный в баллонах с редуктором, ТУ-6-16-40-1 4-88.
Бумажные фильтры "красная лента", ТУ 6.091678-86.
Вода дистиллированная, ГОСТ 6709-79.
Гексан, х.ч., ТУ 2631-003-05807999-98.
Калий углекислый, х.ч., ГОСТ 4221-76.
Калия перманганат, ГОСТ 20490-75.
Кальция хлорид. х.ч., ГОСТ 4161-77.
Насадка для колонки: хроматон N-Super (0.125-0.160 мм) с 5% SH-ЗОили ХЕ-бО(Чсхия) Натрий сернокислый безводный, ч., ГОСТ 4166-76, свсжспрокаленный.
Натрия хлорид, х.ч., ГОСТ 4233-77.
Стекловата.
Флорисил 150-250 цш (Merck, Германия), содержание воды <2 5%.
Фосфора пентокекд, ч., МРТУ 6-09-5759-69.
Хлороформ, ч.д.а., ТУ-2631-020-1J29J058-96.
40
Этиловый спирт, ректификат, х.ч., ГОСТ 18300-87 Этиловый эфир уксусной кислоты, ч.дл., ГОСТ 22300-76.
Элюент для колоночной хроматографии М: гексан-этил ацетат (50.50 но объему). Элюент для колоночной хроматографии №2: гексан-этилацетат (20:80 по объему).
2.3. Приборы и посуда.
Газовый хроматограф Цвет-550 М или аналогичный с ДЭЗ (ДПР) и стеклянной насадочной колонкой, длиной 1м; внутренним диаметром 3 мм.
Весы аналитические ВЛА-200, ГОСТ 34104-80Е или аналогичные.
Весы технические ВЛКТ-500, ГОСТ 24104-80.
Мельница лабораторная зерновая ЛМЗ, ТУ 1-01-0593-79.
Установка ультразвуковая «Серьга», ТУ 3.836.008.
Ротационный испаритель вакуумный ИР-IM, ТУ 25-И-917-74 или аналогичный. Микрошприц МШ-10, МШ- ЮМ, ГУ 2-833-106.
Насос водоструйный, МРТУ 42 861-64.
Колбы плоскодонные на шлифах КШ500 29/32 ТС, ГОСТ 10384-72.
Колбы круглодонные на шлифах КШ50 29-32 ТС, ГОСТ 10384-72.
Воронки лабораторные В-75-110, ГОСТ 25 336-82.
Воронки делительные ВД-3-500, ГОСТ 8613-75.
Цилиндры мерные на 100 см3, ГОСТ 1774-74.
Колбы мерные на 25,50,100 см3, ГОСТ 1770-74.
Пипетки на 1,2, 5, 10 см3 , ГОСТ 22292-74.
Стаканы химические, ГОСТ 25336-82Е.
Колонка стеклянная хроматографическая длиной 25 см, диаметром 10 мм.
2.4. Отбор проб.
Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (76 2051-79 от 21.08.79). Для длительного хранения пробы семян подсушивают при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света. Сухие образцы могут храниться в течение года. Перед анализом пробы семян подсолнечника и сои измельчают на лабораторной мельнице.
2.5. Подготовка к определению.
2.5.1. Подготовка и очистка реактивов и растворителей.
Органические растворители перед началом работы очищают, сушат и перегоняют в соответствии с общепринятыми методиками. Ацетон перегоняют над перманганатом калия и поташем (на 1 л ацетона 10 г КМл04 и 2 г КгССЬ). Ацетонитрил сушат над пснтоксидом фосфора и перегоняют; отогнанный растворитель повторно перегоняют над углекислым калием. Этилацстагг промывают равным объемом 5%-ного раствора двууглекислого натрия, сушат над хлористым кальцием и перегоняют.
2.5.2. Кондиционирование колонки.
Перед началом анализа колонку, заполненную хроматоном N-Super (0.125-0.160 мм) с 5% SE-30, не присоединяя к детектору, кондиционируют в токе инертного газа
г/
(азот) при температуре 250°С в течение 8-10 часов.
2.53. Приготовление стандартного и градуировочных растворов:
Берут точную навеску эсфенвалерата (50 мг), переносит в мерную колбу на 50 мл, растворяют навеску в ацетоне и доводят до метки (Стандартный раствор с концентрацией 1.0 мг/мл). Градуировочные растворы с концентрациями 0.1,0.2, 0.5, 1.0 и 2.0 мкг/мл готовят методом последовательного разбавления по объему, используя для разбавления гексан. Стандартный раствор можно хранить в холодильнике при температуре 0-4°С в течение 6 месяцев, градуировочные растворы - в течение недели.
Для внесения в образец при определении полноты извлечения используют градуировочные растворы.
2.5.4. Построение градуировочного графика.
Для построения градуировочного графика (площадь пика концентрация эсфенвалерата в растворе) в хроматограф вводят по I мкл градуировочных растворов (не менее 3-х параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4-х точек по диапазону измеряемых концентраций), измеряют высоты или площади пиков и строят график зависимости среднего значения высоты (площади) пика от концентрации эсфенвалерата в градуировочном растворе (мкг/мл).
2.5.5. Подготовка колонка с флорнсклом для очистки экстракта.
В нижнюю часть стеклянной колонки длиной 2S см и внутренним диаметром 1 см помещают тампон из стекловаты и вносят суспензию 4.5 г флорненла в 20 мл смеси гексан:этилацетат (1:1, по объему), дают растворителю стечь до верхнего края сорбента. Колонку промывают 25 мл этой же смеси со скоростью 1-2 капли в секунду, после чего она готова к работе.
2.5.6. Проверка хроматографически о поведения эсфенвалерата на колонке с флорисилом.
В круглодонную колбу емкостью 10 мл отбирают 0,5 мл стандартного раствора эсфенвалерата с концентрацией 1 мкг/мл. Отдувают растворитель током теплого воздуха, остаток растворяют в 2 мл элюента №1 и вносят в колонку. Колбу обмывают еще 2 мл элюекта №1 и также вносят в колонку. Затем промывают колонку 25 мл гексана и элюируют эсфенвалерат 60 мл элюента №2 со скоростью 1-2 капли в секунду. Отбирают фракции по 10 мл каждая, упаривают досуха, остаток растворяют в 2 мл гексана и анализируют на содержание эсфенвалерат по п. 2.6.4. Фракции, содержащие эсфенвалерат, объединяют, упаривают досуха, остаток растворяют в 2 мл гексана и анализируют по п. 2.6.4. Рассчитывают содержание эсфенвалерата в элюате, определяя полноту вымывания вещества из колонки и необходимый для этого объем элюента.
Примечание: профиль вымывания эсфенвалерата может меняться при
использовании новой партии сорбента.
7&
2.5.7. Подготовка приборов и средств измерения.
Установка и подготовка всех приборов и средств измерения проводится в соответствии с требованиями стандартов и технической документации.
2.6. Проведение определения
2.6.1. Экстракция эсфеявалсрита из семян соя н подсолнечника
Навеску измельченных на лабораторной мельнице семян массой 10 г помещают в коническую колбу на 250 мл, заливают 50-100 мл смеси растворителей ацетон - вода (в соотношении 1:1) и экстрагируют эсфенвалерат в ультразвуковой ванне в течение 15 мин. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр («красная лента»). Экстракцию повторяют дважды 30 мл той же смеси. Объединенный фильтрат помещают в делительную воронку и переэкстрагируют эсфенвалерат гексаном трижды порциями по 30 мл. Объединенные гексановые экстракты фильтруют через слой безводного сернокислого натрия. Полученный раствор выпаривают на ротационном испарителе при температуре бани 50°С до полного удаления гексана. Далее проводят очистку экстрактов по п.2.6.3.
2.6.2. Экстракция эсфенвалерат* из масла подсолнечника
Навеску масла 10 г растворяют в 60 мл гексана и экстрагируют эсфенвалерат 50 мл ацетонитрила в УЗ-ваинс в течение 15 мин. Полученную смесь помещают в делительную воронку объемом 250 мл. После расслоения* нижний ацетонитрильный слой сливают, из верхнего гексанового слоя экстрагируют эсфенвалерат ацетонитрилом еще дважды порциями по 30 мл. К объединенному ацетонитрильному экстракту добавляют воду в соотношении ацетонитрид:вода - 1:4 н переэкстрагируют эсфенвалерат хлороформом трижды порциями по 30 мл. Объединенные хлороформные экстракты сушат над безводным сернокислым натрием и выпаривают досуха на ротационном испарителе при температуре 50°С. Сухой остаток растворяют в 5 мл ацетона и помещают в морозильную камеру с температурой -18°С на 2 часа. Охлажденный ацетоновый раствор декантируют в круглодонную колбу на 10 мл через фильтр «красная лента», после чего фильтр промывают 2 мл ацетона. Полученный раствор упаривают на ротационном испарителе при температуре бани не выше 40°С до полного удаления ацетона. Далее очистку проводят по п.2.6.3.
•В случае образования сравнительно стойких эмульсий можно добавить несколько мл насыщенного раствора хлористого натрия или этилового спирта.
2.6.3. Очистка экстрактов на колонке с флорисилом
Остаток в колбе, полученный при упаривании очищенных по п.п. 2.6.1 и 2.6.2. экстрактов семян или масла, количественно переносят двумя порциями по 2 мл смеси гексан-этилацетат (1:1, по объему) в кондиционированную хроматографическую колонку (п. 2.5.5.). Промывают колонку 25 мл гексана, которые отбрасывают. Эсфенвалерат элюируют 60 мл элюента №2 (гексан-этилацетат 3 2:8). Весь элюат собирают в грушевидную колбу емкостью 100 мл. Раствор выпаривают досуха на ротационном испарителе при температуре не выше 50°С. Сухой остаток растворяют в 1-2 мл гексана и 1 мкл раствора вводят в хроматограф.
2.6.4. Условия хроматографирования
Газовый хроматограф «Цвст-550М» с ДПР (ДЭЗ) или аналогичный.
1. Колонка стеклянная I м х 3 мм, заполненная хроматоном N-Super (0.125-0.160 мм) с 5%
SE-30.
Температура колонки 250°С, испарителя 250°С, детектора 320°С Скорость газа-носителя (азот) через колонку 41 см3/мин.
Шкала электрометра 8x1010.
Объем вводимой пробы 1 мкл.
Время удерживания эсфенвалерата 3 мин 15 сек.
Линейный диапазон детектирования 0.1-2 нг.
2.6.6. Обработка результатов анализа
Количественное определение проводят методом абсолютной градуировки, содержание эсфенвалерата в образце семян или масла (X, мг/кг) вычисляют по формуле:
HjxCxV
X --
HixP
где Hj- высота (площадь) пика эсфенвалерата в стандартном растворе; мм;
Hj- высота (площадь) пика эсфенвалерата в анализируемой пробе, мм;
V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл;
Р - навеска анализируемого образца, г;
С - концентрация эсфенвалерата в стандартном растворе, мкг/мл.
Содержание остаточных количеств эсфенвалерата в анализируемом образце вычисляют как среднее из 3-х параллельных определений.
Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор эсфенвалерата 2 мкг/мл, разбавляют.
3. Требования техники безопасности.
При проведении работы необходимо соблюдать требования инструкции «Основные правила безопасной работы в химической лаборатории», общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, а также инструкции по эксплуатации газового хроматографа и электрооборудования до 400 В.
4. Контроль погрешности измерений.
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости результатов измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95. ГСИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа.
5. Разработчики.
Цибульская И.А., Копытова Ф.И.
Всероссийский научно-исследовательский институт зашиты растений (ВИЗР).
