Государственная система санитарно-эпидемиологического нормировании _ _ Российской    Федерации_

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств пестицидов в пищевых продуктах, сельскохозяйственном сырье и объектах окружающей среды

Сборник методических указаний МУК 4.1.1802—4.1.1820—03; 4.1.1822—4.1.1826—03

Выпуск 5

Издание официальное

Москва • 2007

УТВЕРЖДАЮ Главный Государственный санитарный врач Российской Федерации Первый заместитель министраздравоохраления 'федерации

'.Г. Онищенко

Дата введения - < 1 Q+ju** Zwlrt

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ по определению остаточных количеств просульфурона в воде, почве, зерне и соломе зерновых колосовых культур, зеленой массе и зерне кукурузы, семенах льна методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

1. ВВОДНАЯ ЧАСТЬ

Фирма производитель: Сингента Кроп Протекши (Швейцария) Торговое название: ПИК

Действующее вещество: просульфурон ( АЕ F115005)

1-(4- метокси-6-метил-1,3,5-триазин-2-ил) -3-|2-{3,3,3-грифторпропил)-фенилсульфонил]мочсвина (ИЮПАК)

N-[((4- метокси-6-метил-1,3,5-триазип-2-ил)амино)карбонил]-2-(3,3_>3-трифторпропил)бензолсульфонамид (С.А.)

CHjCHjCFj    ОСН,

Эмпирическая формула: Ci5H|₆FjN504S Молекулярная масса: 419,4

Химически чистый просульфурон представляет собой белое кристаллическое вещество без запаха

Температура плавления: 155°С (с разложением)

Давление паров при 25°С: < 3,5 х 10° мПа

Коэффициент распределения н-октанол/вода: K_ow log Р = 1,5 (pH 5,0), -0,21 (pH 6,9),-0,76 (pH 9) (25°С)

Плотность 1,45 г/см³

ПРИМЕЧАНИЕ:    При    использовании    новой    партии    сорбента или

растворителей проводится проверка хроматографического поведения просульфурона на колонке с силикагелем.

2.7 Условия хроматографирования

Жидкостной хроматограф с ультрафиолетовым детектором фирмы Клаиег (Г ермания).

Хроматографическая колонка стальная, 4x150 мм, заполненная Диасфером 110-С 18 (5 мкм)

Подвижная фаза: ацетонитрил - метанол - 0,005М ортофосфорная кислота (38:10:52, по объему).

Скорость потока элюснта: I мл/мин Температура колонки: комнатная.

Рабочая длина волны: 226 нм Чувствительность: 0,005 сд. абсорбции на шкалу Объем вводимой пробы: 20 мкл

Минимально определяемое количество просульфурона - 0,5 нг Время выход просульфурона: около 14 мин.

Альтернативная неподвижная фаза: Диасорб 130-С16Т (5 мкм)

Подвижная фаза: ацетонитрил-метанол-0,005 М ортофосфорная кислота (35:10:55, по объему)

Время выхода просулг»фурона: около 12 мин.

Каждую анализируемую пробу вводят 3 раза и вычисляют среднюю высоту пика.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 0,25 мкг/мл, разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ.

2.8 Обработка результатов анализа

Содержание просульфурона рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:

I I, х Л х V

X =------------,    где

И, х m

X - содержание просульфурона, мг/дм³ или мг/кг;

Н, - высота пика образца, мм;

Но - высота пика стандарта, мм;

А - концентрация стандартною раствора просульфурона , мкг/мл;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл; m - масса или объем анализируемой части образца, г или мл (для поды -100 мл; для почвы, зерна и соломы соответственно - 5, 2,5 и 2 г).

&

3 .ТРЕБОВАНИЯ ТЕХНИКИ БЕЗОПАСНОСТИ

Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными    веществами,

электронагревательными приборами.

4.КОНТРОЛЬ ПОГРЕШНОСТИ ИЗМЕРЕНИЙ

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95. ГСИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа.

5. РАЗРАБОТЧИКИ

Назарова Т.А., науч. сотр., канд. биол. наук; Микитюк О.Д., ст. науч. сотр., канд. биол. наук; Макеев А.М., зав. лабораторией, канд. биол. наук.

ВНИИ фитопатологии, 143050, Московская обл., п/о Большие Вяземы, тел. 592-92-20

j/u

Подписьруки НазаровойТ.А., МикитюкаО./К кеева А.М. заверя!

Зав.

Z*t

Генри < 3 x 10*⁴ Па x м³х мол *'

Растворимость (г/л) при 25°С: гексан - 0,0064, толуол - 6,1, этанол - 8,4, этилацетат - 56, ацетон - 160, дихлорметан -180; растворимость в воде (мг/л): 87 (pH 5), 4000 (pH 6,8), 43000 (pH 7,7).

Быстро гидролизуется при pH 5 (DT50 = 5-10 дней) и очень медленно при pH 7 и 9.

В биологически активных почвах в аэробных условиях просульфурон достаточно быстро разлагается (DTjo - 5- 23 дня, DT90 = 30 - <100 дней (обычно 60 дней). В силу высокой скорости разрушения в почве гербицид не вымывается глубже, чем на 50 см.

Краткая токсикологическая характеристика

Острая пероральная токсичность (LD$o) для крыс и мышей - 986 и 1247 мг/кг, соответственно; острая дермальная токсичность (LD50) для кроликов более 2000 мг/кг; острая ингаляционная токсичность (ЬС₅₀) для крыс более 5000 мг/м¹ воздуха. Просульфурон не оказывает раздражающего действия на слизистые оболочки глаз и кожу кроликов и не обладает тератогенным и мутагенным эффектами.

Гербицид практически нетоксичен для птиц, рыб, пчел, диких животных, дождевых червей, дафний и водорослей.

Гигиенические нормативы для просульфурона в России не установлены.

Область применения препарата

Просульфурон - послевсходовый гербицид системного действия из класса сульфонилмочевин. Вещество достаточно хорошо поглощается листьями и передвигается в акропетальном и базипстальном направлениях в различные органы растения. Просульфурон в дозах от 12 до 40 г д.в. на 1 га эффективно уничтожает однолетние и многолетние двудольные сорные растения в посевах зерновых злаков, кукурузы и сорго, на пастбищах и в дернине. Проходит регистрационные испытания в России и странах СНГ под торговым названием Пик, ВДГ (750 г/кг) в качестве гербицида на зерновых колосовых культурах при норме расхода 15-45 i7i*a и однократной обработке за сезон в период от фазы кущения до начала выхода в трубку.

2. МЕТОДИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ПРОСУЛЬФУРОНА В ВОДЕ, ПОЧВЕ, ЗЕРНЕ И СОЛОМЕ ЗЕРНОВЫХ КОЛОСОВЫХ КУЛЬТУР, ЗЕЛЕНОЙ МАССЕ И ЗЕРНЕ КУКУРУЗЫ, СЕМЕНАХ ЛЬНА МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

2.1    Основные положения

2.1.1    Принцип метода

Метод основан на определении просульфурона с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на обращенной фазе с ультрафиолетовым детектором после извлечения препарата из воды хлористым метиленом, из почвы, семян льна и соломы водным ацетонитрилом, из зерна и зеленой массы смесью метанол-фосфатный буфер при ультразвуковой обработке, последующей очистки экстрактов путем перераспределения действующего вещества между несмешивающимися растворителями и на колонке с силикагелем.

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

2.1.2    Избирательность метода

В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых в интенсивной технологии выращивания зерновых культур, кукурузы и льна.

2.1.3    Метрологическая характеристика метода

Таблица Метрологическая характеристика метода__

Анали- зируе- мый объект Метрологические параметры Р = 0,95, п = 20 Предел обнару жения, мг/дм3 мг/кг Диапазон определяемых концентраций, мг/дм3 мг/кг Среднее значение определе ния, % Стандартное отклонение, S, % Относи тельное откло нение, % Довери тельный интервал среднего, % Вода 0,001 0,001-0,01 91,9 3,1 1,4 *2,9 Почва 0,01 о о \ о _ 82,6 5,1 2,3 ±4,7 Зерно 0,01 0,01-0,1 79,0 5,8 2,6 ±5,4 Солома 0,05 0,05-0,5 82,0 4,1 1,9 ±3,8 Зеленая масса 0,05 0,05-0,5 80,2 5,6 2,5 ±5,2 Зерно кукуру зы 0,01 0,01-0,1 78,1 5.3 2,4 ±5,0 Семена льна 0,05 0,05-0,5 79,6 5,4 2,4 ±5,0

2.2 Реактивы, растворы, материалы

Просульфурон с содержанием д.в. 99,5% (Сингента, Швейцария)

26

Ацетон, чда, ГОСТ 2603-79 Ацетонитрил, ч, ТУ 6-09-3534-82 Вода бидистиллированная, ГОСТ 7602-72 Гексан, ч., ТУ 6-09-3375-78 Калий углекислый, хч, ГОСТ 4221-76

Калий фосфорнокислый однозамегценный, чда, ГОСТ 4198-75

Кальция хлорид, хч., ГОСТ 4161-77

Кислота ортофосфорная, 85,6%, хч., ГОСТ 6552-80

Кислота серная, хч., ГОСТ 4204-77

Натрия гидроксид, хч., ГОСТ 4328-77

Натрия сульфат безводный, хч., ГОСТ 4166-76

Натрий фосфорнокислый двузамещенный, 2-х водный, чда, ГОСТ 11773-

76

Натрия хлорид, хч, ГОСТ 4233-77 Спирт метиловый, хч., ГОСТ 6995-77 Фосфора пентоксид, ч, МРТУ 6-09-5759-69 Хлористый метилен, ГОСТ 12794-80

Элюент №1 для колоночной хроматографии: смесь гексан-ацетон (8:2, по объему)

Элюент №2 для колоночной хроматографии: смесь гексан-ацетон (7:3, но объему)

Подвижная фаза для ВЭЖХ: смесь ацетонитрил - метанол - 0,005 М ортофосфорная кислота (38 : 10 : 52, но объему)

Силикагель марки Л (40-100 мкм) для колоночной хроматографии (Хеманол, Чехия) 1 степени активности, или силикагель КСК (60-100 меш) Стекловата Хлопковая вата

Фильтры бумажные, синяя лента, ТУ 6-09-1678

2.3 Приборы, аппаратура, посуда

Жидкостной хроматограф с ультрафиолетовым детектором фирмы Knauer (Германия) или аналогичный

Хроматографическая колонка стальная, длиной 15 см, внутренним диаметром 4 мм, заполненная Диасфером 110-С 18 или Диасорбом 130-С 16 Т (ЗАО БиоХимМак СТ, РФ; 119899, Москва, Ленинские горы)

Шприц для ввода образцов в жидкостной хроматограф

Весы аналитические типа ВЛР-200, ГОСТ 19401-74

Водоструйный насос, ГОСТ 10696-75

Встряхиватель механический, ТУ 64-1-1081-73

Иономер ЭВ-74, ГОСТ 22261-76, или аналогичный

Мельница электрическая лабораторная, 1У 46-22-236-79 или аналогичная

Ротационный испаритель тип ИР-IM, ТУ 25-11-917-76

Сито с диаметром отверстий 1 мм

Z<?

Баня ультразвуковая, модель D 50, Branson Instr. Со., США или аналогичная

Воронка Бюхнера, ГОСТ 0147-73

Воронки делительные вместимостью 100, 250 мл, ГОСТ 25336-82 Воронки для фильтрования, стеклянные, ГОСТ 8613-75 Колба Бунзена, ГОСТ 5614-75

Колбы круглодонные на шлифе вместимостью 100, 250 и 500 мл, ГОСТ 9737-70

Колбы конические с притертыми пробками вместимостью 250 мл, ГОСТ 25336-82

Колбы мерные вместимостью 25, 50, 100 и 1000 мл, ГОСТ 1770-74 Колбы хрушевидные вместимостью 100, 250 и 500 мл, ГОСТ 25336-82 Пипетки мерные вместимостью 1,2, 5 и 10 мл, ГОСТ 20292-74Е Пробирки градуированные с притергыми пробками вместимостью 5 и 10 мл, ГОСТ 10515-75

Цилиндры мерные вместимостью 50, 100, 250 и 500 мл, ГОСТ 1770-74

2.4    Отбор проб

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов (№ 2051-79 от 21.08.79 г.).

Отобранные пробы зерна, семян и соломы подсушивают до стандартной влажности и хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике при температуре не выше 4°С не более трех месяцев. Пробы зеленой массы замораживают при температуре -18°С и хранят в морозильной камере не более трех месяцев. Пробы воды хранят при температуре не выше 4°С в течение 2 дней, при темпера гуре -18°С в течение месяца.

Пробы почвы высушивают при комнатой температуре в отсутствии прямого солнечного света до воздушно-сухого состояния и хранят в темном сосуде не более трех месяцев.

Перед анализом зерно, семена и солому размалывают на мельнице, зеленую массу измельчают ножницами, сухую почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм.

2.5    Подготовка к определению

2.5.1 Подготовка и очистка реактивов и растворителей Органические растворители перед началом работы очищают.сушат и перегоняют в соответствии с типовыми методиками. Гексан и хлористый метилен встряхивают с небольшими порциями концентрированной серной кислоты до тех пор, пока свежая порция кислоты не перестанет окрашиваться. Затем растворители последовательно промывают водой, 2%-ным раствором гидроксида натрия и снова водой, после чего сушат над гидроксидом натрия и перегоняют.

г?

Ацетонитрил сушат над пентоксидом фосфора и перегоняют; отогнанный растворитель повторно перегоняют над углекислым калием.

Ацетон перегоняют над перманганатом калия и поташом (на 1 л ацетона Юг КМп0₄ и 2 г К₂С0₃).

Силикагель I степени активности встряхивают с двойным объемом ацетона и затем фильтруют на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. Силикагель на фильтре промывают 1,5 объемом ацетона и затем высушивают при температуре 130°С в течение 2 часов.

2.5.2    Приготовление 2 М и 0,005 М растворов ортофосфорной кислоты

Для получения 2М раствора Н3РО4 отмеряют 137 мл 85,6%-ной

ортофосфорной кислоты, переносят в мерную колбу емкостью 1000 мл, добавляют 500-600 мл бидистиллированной воды, перемешивают и доводят объем водой до метки.

Для получения 0,005 М раствора Н3РО4 отбирают 2,5 мл приготовленного 2 М раствора ортофосфорной кислоты, переносят в колбу на 1000 мл, добавляют бидистиллированную воду до метки и перемешивают.

2.5.3    Приготовление фосфатного буферного раствора № 1 (pH 7)

0,73 г Na2HP0₄ х 21ЬО и 0,38 г КН2РО4 переносят в мерную колбу емкостью 250 мл, добавляют 150-200 мл бидистиллированной воды, перемешивают до полного растворения осадка, доводят водой до метки, контролируют pH полученного раствора с помощью мономера, доводя его значение до 7 с помощью 1 N раствора гидроксида натрия.

2.5.4    Приготовление фосфатного буферного раствора № 2 (pH 10)

1,42 г безводного Na₂l 1Р0₄ и 40 г NaCl растворяю! в химическом стакане в 400 мл воды и доводят pH раствора до 10 путем добавления по каплям 1 N раствора гидроксида натрия при перемешивании. Щелочность раствора контролируют с помощью мономера.

2.5.5    Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ

При подготовке подвижной фазы для анализа просульфурона отмеряют 380 мл ацетонитрила и 100 мл метанола, переносят в колбу на 1000 мл, добавляю! 520 мл 0,005 М ортофосфорной кислоты, перемешивают, фильгруют, дегазирую!.

2.5.6    Кондиционирование колонки

Промыть колонку для ВЭЖХ 20 мл смеси ацетонитрил-вода (1:1, по объему), а затем смесью ацетонитрил-метанол-O.OOS М ортофосфорная кислота (38:10:52, по объему) (п.2.5.2) в течение 30 минут при скорости подачи растворителя 1 мл/мин. Включить детектор и подождать стабилизации базовой линии (5-15 минут).

Z>3

2.5.7    Приготовление стандартных растворов

Основной стандартный раствор просульфурона с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением 0,01 г вещества в метаноле в мерной колбе на 100 мл. Раствор хранят в холодильнике при температуре -12°С нс более одного месяца.

Рабочие стандартные растворы с концентрациями 0,025;0,05; 0,125 и 0,25 мкг/мл готовят из основного стандартного раствора просульфурона соответствующим последовательным разбавлением подвижной фазой для ВЭЖХ (п. 2.5.5) непосредственно в день проведения анализа. Раствор хранят в холодильнике не более суток.

При изучении полноты открывания просульфурона в модельных матрицах используются ацетоновые растворы вещества.

2.5.8    Построение калибровочного графика

Для построения калибровочного графика в инжектор хроматофафа вводят по 20 мкл рабочего стандартного раствора просульфурона с концентрацией 0,025; 0,05; 0,125 и 0,25 мкг/мл. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений и находят среднее значение высоты хроматографического пика для каждой концентрации. Строят калибровочный график зависимости высоты хроматографического пика в мм от концентрации препарата в растворе в мкг/мл.

2.5.9    Подготовка колонки с силикагелем для очистки экстракта

В нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 1,0 см вставляют тампон из стекловаты, медленно выливают в колонку (при открытом кране) суспензию 5 г силикагеля в 30 мл гексана. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и колонку последовательно промывают 20 мл элюента № 2 (гексан-ацетон, 7:3) и 20 мл элюента №1 (гексан-ацстон, 8:2) со скоростью 1-2 капли в секунду.

2.5.10    Проверка хроматшрафического поведения просульфурона на колонке с силикагелем

В круглодонную колбу емкостью 10 мл отбирают 0,1 мл стандартного раствора просульфурона с концентрацией 20 мкг/мл, отдувают растворитель потоком теплого воздуха, остаток растворяют в 5 мл элюента №1 и наносят на подготовленную колонку. Промывают колонку 20 мл элюента №1 и затем 50 мл элюента №2 со скоростью 1-2 капли в секунду. Отбирают фракции по 5 мл каждая, упаривают досуха, остаток растворяют в 5 мл подвижной фазы для ВЭЖХ (п.2.5.5) и анализируют на содержание просульфурона по п.2.7.

Фракции, содержащие просульфурон, объединяют и вновь анализируют по п.2.7. Рассчитывают содержание вещества в элюате, определяют полноту смывания с колонки и необходимый для очистки объем элюента.

ПРИМЕЧАНИИ: Профиль вымывания просульфурона с колонки может меняться при использовании новой партии сорбента и растворителей.

2.6 Описание определения

2.6.1.1 Вода. К образцу предварительно отфильтрованной воды объемом 100 мл добавляют 1,18 г Na₂HP04 х 2H_zO, перемешивают до растворения соли и pH раствора доводят до 10 с помощью 1 N раствора гидроксида натрия. Полученный раствор переносят в делительную воронку емкостью 250 мл, промывают смесью гексан-хлористый метилен (20:80, по объему) трижды (25+15+10 мл), которую отбрасывают. Водную фазу подкисляют 2М ортофосфорной кислотой до pH 3 (контролируя его значения на иономере), переносят в делительную воронку и просульфурон экстрагируют смесью гсксан-хлористый метилен (65:35, но объему) трижды (30+2x15 мл). Объединенную органическую фазу пропускают через 1-см слой хлопковой ваты и упаривают на роторном испарителе досуха при температуре 30°С. Сухой остаток растворяют в 4 мл подвижной фазы для ВЭЖХ (п.2.5.5) и анализируют на содержание просульфурона по п.2.7.

2.6.1.2. Почва. Навеску (20 г) воздушно-сухой почвы помещают в коническую колбу емкостью 250 мл, приливают 125 мл 90%-ного водного ацетонитрила и встряхивают в течение 30 минут на аппарате для встряхивания. Суспензию помещают в ультразвуковую баню ни 3 минуты и затем фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. Остаток почвы на фильтре промывают 75 мл 90%-ного ацетонитрила. Из объединенного фильтрата отбирают аликвоту раствора (около 45 мл), эквивалентную 5 г почвы. Дальнейшую очистку' проводят по пп. 2.6.2 и 2.6.3.

2.6.1.3 Зерно, семена, зеленая масса, солома. Навеску (10 г) размолотого зерна помещают в коническую колбу емкостью 250 мл, приливают 125 мл смеси метанол-фосфатный буфер №1 pH 7,0 (80:20, по объему) и перемешивают в течение 30 минут на аппарате для встряхивания. Суспензию помещают в ультразвуковую баню на 3 минуты и затем фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. Остаток на фильтре промывают 75 мл смеси метанол-фосфатный буфер № 1 (80:20, по объему). Из объединенного фильтрата отбирают аликвоту раствора (около 45 мл), эквивалентную 2,5 г зерна.

Навеску (10 г) размолотых семян льна помещают в коническую колбу емкостью 250 мл, приливают 125 мл 90%-ного, водного ацетонитрила и перемешивают в течение 30 минут на аппарате для встряхивания. Суспензию помещают в ультразвуковую баню на 1 минуту и затем фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. Остаток на фильтре промывают 75 мл 90%-ного ацетонитрила. Из объединенного фильтрата отбирают аликвоту раствора (около 45 мл), эквивалентную 2,5 г семян.

J/

Навеску (20 г) измельченной зеленой массы помещают в коническую колбу емкостью 500 мл, приливают 200 мл смеси метанол-фосфатный буфер №1 (80:20, по объему) и встряхивают в течение 1 часа на аппарате для встряхивания. Суспензию фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. Остаток на фильтре промывают 75 мл смеси метанол-фосфатный буфер №1. Из объединенного фильтрата отбирают аликвоту раствора (около 25 мл), эквивалентную 2 г ткани.

Навеску (5 г) размолотой соломы помещают в коническую колбу емкостью 250 мл, приливают 100 мл 90%-ного водного ацетонитрила и встряхивают в течение 1 часа на аппарате для встряхивания. Суспензию фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу емкостью 250 мл. Остаток на фильтре промывают 75 мл 90%-ного ацетонитрила. Из объединенного фильтрата отбирают аликвоту раствора (около 65 мл), эквивалентную 2 г соломы. Дальнейшую очистку экстракгов проводят по пп. 2.6.2 и 2.6.3.

2.6.2 Очистка экстрактов

Отобранные аликвоты растительного (из п.2.6.1.3) и почвенного (из п.2.6.1.2) экстрактов упаривают до водного остатка (объем 10-15 мл) на роторном испарителе при температуре 40°С. К оставшемуся водному раствору добавляют 30 мл фосфатного буфера № 2 pH 10 (п.2.5.4), при необходимости доводят pH раствора до 10 с помощью 2 N раствора гидроксида натрия. Раствор переносят в делительную воронку вместимостью 100-150 мл, промывают трижды смесью гексан-хлористый метилен (20:80, по объему) порциями по 25 мл, которую отбрасывают. Водную фазу переносят в химический стакан и подкисляют 2 М ортофосфорной кислотой до pH 3. Переносят раствор вновь в делительную воронку и просульфурон трижды (30+2x15 мл) экстрагируют смссыо гексан - хлористый метилен (65:35, по объему). Объединенную органическую фазу пропускают через 1-см слой хлопковой вагы и упаривают на роторном испарителе досуха при температуре 30°С.

2.6.3 Очистка на колонке с силикагелем

Остаток в колбе, полученный при упаривании очищенных по п.2.6.2 экстрактов зерна, семян, зеленой массы, соломы и почвы, переносят 3 порциями (2+2+1 мл) элюента № 1 (гексан-ацетон, 8:2) в подготовленную хроматографическую колонку (п.2.5.9). Колонку промывают 25 мл элюента №1, которые отбрасывают. Вещество элюируют 30 мл элюента № 2 (гексан-ацетон, 7:3), отбрасывая первые 15 мл и собирая последующие 15 мл. Раствор упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30°С. Сухой остаток экстрактов зерна и семян растворяют в 1 мл, почвы - в 2 мл, а зеленой массы и соломы в 4 мл подвижной фазы для ВЭЖХ (п.2.5.5) и анализируют на содержание просульфурона по п. 2.7.