Государственная комиссия по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ МИКРОКОЛИЧЕСТВ ПЕСТИЦИДОВ В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ, КОРМАХ И ВНЕШНЕЙ СРЕДЕ

Сборник № 23

МОСКВА

ЦЕНТР НАУЧНО-ТЕХНИЧЕСКОЙ информации, ПРОПАГАНДЫ И РЕКЛАМЫ 1995 г.

Государственная комиссия пс химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ МИКРОКОЛИЧЕСТВ ПЕСТИЦИДОВ В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ, КОРМАХ И ВНЕШНЕЙ СРЕДЕ

Сборник № 23

МОСКВА

ЦЕНТР НАУЧНО-ТЕХНИЧЕСКОЙ ИНФОРМАЦИИ, ПРОПАГАНДЫ И РЕКЛАМЫ 1995 г.

Температура испаригетя - 230^е С.

Температура детектора - 260° С.

Газ-носитель - азоте расходом 65-70 мл/мин.

Вводимый объем - 3 мкл.

Шкала множителя - 20.10¹"

Скорость диаграммной ленты - 240 мм/час.

Воемя удерживания - 7,14 мин.

2.6.3.2. ТСХ.

Пробу, сконцентрированную до 0,5 мл, количественно переносят на пластинку *⁴Сялуфол". Параллельно наносят серию стандартных растворов с содержанием 0,3, 0,5 и 1,0 мкг дейстзуюшего зе щесгва ажила. Хроматографируют з системе растзорителей гехсан: этилацетат: уксусная клслота= 66:33:1. После высушивания пластинку обрабатывают 0,05% раствором бромфенолового синего а обесцвечивают фон обработкой пласгинхи 5%-ным раствором уксусной кислоты. Ажил обнаруживается з виде синих пятен на желтом фоне. Rf« 0,50± 0,02. Предел обнаружения - 0,3 мкг.

Определение содержания ажила в пробе проводят путем сравнения интенсивности окраски и размера пятен проб с пятнами стандартных растворов. Пропорциональная зависимость площади пятна от концентрации наблюдается з пределах 0,3-2 мкг. При больших концентрациях анализируют аликвоту экстракта.

2.6.4. Обработка результатов анализа.

2.6.4.1.    ГЖХ.

Количественную оценку проводят методом абсолютной калибровки по сравнению со стандартом ажила.

Расчет результатов анхлиза проводят по формуле:

СЯ2Л^З

^л Hi.Vi.P ^,гле

X - содер;какие пропаквизафопа в анализируемой пробе, мг/ кп

С - концентрация стандартного раствора хля ГЖХ. вводимого в хроматог-раш, мкл/мл:

Н: - высота пика стандартного растзора, мм:

Нг - зысота пика пробы, мм:

V1 - объем бензндированного экстракта пробы, мл:

Vi - объем стандаотного бензилированного растзора. зеленного в хроматограф, мкл;

V} - объем бензилированной пробы, звеленный в хроматограф, мкл;

Р - навеска анхлизируемой пробы, г(мл>.

2.6.4.2.    ТСХ-

Количество пропакзизафопа (X, мг/кг, л) з анализируемой назеске ггрооы вычисляют по формуле:

У.У

V\.P'^T

У - количество пестицида з хроматографируемом объеме пробы, мкг.

V    - общий объем пробы, мл:

VI    - объем пробы, взятый хтя хроматографирования, мл;

Р - назеска пробы, г (мл).

3. Требования безопасности.

Соблюдать зсе требования техники безопасности, обычно рекомендуемые для работы с органическими растворителями и токсическими зещесгзами.

41

I. Ахйл- оропаквизафоп.

2-Берет-спеаиаль- фенпиклонил + имазалкл.

3.    Берет-фенпиклонил.

4. Длкуран- хлортолурон. о.Лограя- триасульфурон.

б.Маврюс- флювалинат.

7*Рубиган- фенарямол.

8. Сандофан- оксадиксил.

9. Сатис- триасульфурон + флюглшсофен. Ю.Телл- примисульфурон.

11-Тилт- пропихоназол.

12. Топик- хлодинафоп + пропаргял.

13. Фронгьер- диметенамид.

14.ЭЙМ- клорфлуазурон.

Указатель химических названий по ИЮ ПАК.

L.Диметенамид-    стр. 3, 7

2.0ксадиксил-    11

3. Примисульфурон-    19, 24

4. Пропаквизофоа-    28,33

5-Попиконазол-    40

6. Триасулъфурон-    45,51

7. Хлодинафоп-пропаргил-    56,62

8. Хлортолурон-    67

9. Хлорфлуазурон-    71

Ю.Фенаримол-    76

11 .Фенпиклонил + имазалил- 79 12.Флюгликофен-    93.98

13 .Флювалинат-    37

Псиме^ание

На странице 1С4 а указателе химических названий по ИЮ ЛАК надо учесть, что номера страниц сдвигаются на 2 згесед.

Заказ 838. Типография, Ветошный пер.. 2. Тираж 1000.

Государственная комиссия по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками

Редакционная коллегия:

Калинин В.А.- к.с.н., профессор, зав.кафедры ТСХА; Пушкина Г.П.- к.б.н.. Российский институт лекарстр°^ичы* (л/пьтуо: Борисов Г.С.-заз. КТЛ PPC7A3P;

Настоящие методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательсхих учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических , контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхозпрода РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов а продуктах литания, кормах и внешней среде.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.

Ответственный за выпуск - Орехов Д.А.. заместитель председателя Госхимкомиссии тел. 207-63-90

Сборник подготовлен к изданию Российской республиканской станцией зашиты растений ТлавхимзащигъГ МСХ РФ

г. Раменское Московской обл., ул. Нефтегазосъемки 11/41 тел. (246) 3-09-52

ОГЛАВЛЕНИЕ:    стр.

1.    Методичесхие указания по определению лим стенам ил а з золе, зеленой массе, почве а зерне метолом тзо;кллхостной хроматографии.

N 6232-91 29 июля 1991 г.................................... 5

2.    Методические указания по определению диметенамила з зоз-лухе рабочей зоны метолом газожидкостной хроматографии.

N 6231-91 29 июля 1991 г.................................... 9

3.    Методические указания по определению оксадикслла в картофеле, огурцах, томатах, сахарной сзехле. зинограде, почве и золе методами газожидкостной и тонкослойной хроматографии.

N 6270-91 29 июля 1991 г.................................... 13

4.    Методические указания по определению примисульфурона в золе, почве, растительном материале методами тонкослойной и газожидкостной хроматографии.

N 6210-91 29 июля 1991 г.................................... 21

5.    Методические указания по определению примисульфурона в воздухе рабочей зоны методом газожидкостной хроматографии.

N 6211-91 29 июля 1991 г.................................... 26

6.    Методические указания по определению пропаквизафопа s воздухе рабочей зоны методами газожидкостной и тонхослойяой х ро матограсЬии.

N 6250-91 29 июля 1991 г.................................... 30

7.    Методические указания по определению пропаквизафопа в растительном материале, волокне и семенах хлопчатника, воде и почве: методами газожидкостной и тонкослойной хроматографии.

N 6251-91 29 июля 1991 г.................................... 35

8.    Методические указания по определению пропиконазола в воздухе рабочей зоны методами газожидхостной и тонкослойной хроматографии.

N 6246-91 29 июля 1991 г.................................... 42

9.    Методические указания по определению триасульфурона з растительном материале, соломе, зоде и почве методами газожидкостной и тонкослойной хроматографии.

N 6177-91 29 июля 1991 г.................................... 47

10.    Методические указания по определению триасульфурона в зоздухе рабочей зоны методами газожидкостной и тонкослойной хроматографии.

N 6158-91 29 июля 1991 г.................................... 53

11.    Методические указания по определению хлодинафоп - пропар-гила в растительном материале, зерне, почве и воде методами газожидкостной и тонкослойной хроматографии.

N 6253-91 29 июля 1991 г.

гила з воздухе рабочей зоны методами газожпдхостной и тонкослойной хроматографии.

N 6252-91 29 июля 1991 г.................................... 64

13.    Методические указания по определению хлортолурона з зоз-духе рабочей зоны методом газожидкостной хроматографии.

N 6184-91 29 июля 1991 г.................................... 69

14.    Методические указания по определению хлорфлуазурона в растительных объектах, воде и почве методом жидкостной хроматографии.

N 6150-91 29 июля 1991 г.................................... 73

15.    Методические указания по определению фенаримола з воздухе рабочей зоны методом тонкослойной хроматографии.

N 6275-91 29 июля 1991 г.................................... 78

16.    Методические указания по определению фенпиклонила и има-залкла при совместном присутствии з воздухе рабочей зоны методом газожидкостной хроматографии.

N 6157-91 29 июля 1991 г.................................... 81

17.    Методические указания по определению фенпиклонила в зерне, почве и воде методом газожидкостной хроматографии.

N 6175-91 29 июля 1991 г.................................... 85

18.    Методические указания по определению флувалината в меде и воске методом газожидхостной хроматографии.

N 6223-91 29 июля 1991 г.................................... 89

19.    Методические указания по определению флюгликофена в воде, почве, растительном материале методом газожидкостной хроматографии.

N 6247-91 29 июля 1991 г.................................... 95

20.    Методические указания по определению флюгликофена з воздухе рабочей зоны методом газожидкостной хроматографии.

N 6213-91 29 июля 1991 г.................................... ИЮ

21. Предметный указатель.     104

“Утзерждено" Министерством здравоохранения СССР N 6251-91 *

“29" июля 1991 г.

Методические указания по определению пропакзизафопа в растительном материале, волокне и семенах хлопчатника, воде и почве методами газожидкостной и тонкослойной хроматографии.

1. Взодная часть.

Ажил, 100% концентрат эмульсии, ф. ”Сяба", Швейцария.

Пропаквизафоп.

2-азопроггалиденамино - оксаэтил (R) -2- [4- (6-хлорхикоксамин - 2- охси; фенокси] аропионат(ИЮПАК).

N

C22H22C1N30J М.м.443,89

Кристаллическое вещество. Тол. 62,5* С. Растворимость в воде - 1.0 .

10 г/л (1,9 ppm;. Растворимость в органичесхих растворителях:

10-50 г/л - гептан, технический этиловый спирт, изо пропанол;

>100 г/л - хлороформ, метанол, диметил су л ьфокслд, диоксан;

> 250 г/л - толуол, ацетон, ацетонитрил, ксилол, циклогексанон.

Давление паров: 1.2 . 10^-/ Ра (25° С) или 9.00.10мм. рт. ст.

Ажил - гербицид, эффективный против широкого спектра злаковых сорняков в посевах сахарной сзеклы. льна, хлопчатника при норме расхода 1.5 - 2.0 л/га.

Пропаквизафоп относится к малоопасным препаратам. Острая оральная ЛДоО для крыс 2500 мг/кг, дермальная 2000 мг/кг. Наблюдается /меренное раздражение глаз и кожи у кроликов. Токсичен для рыб. Отрицательного действия для птйп, я других организмов не было обнаружено.

Разработано: Мурашхо С.В. ВНИИГИНТОКС г. Киев.

35

2.Методиха определения.

2.1.1. Приняли метола.

Метод основан на извлечении пропаквизафопа из исследуемого объекта ацетоном и хроматографическом ( ТСХ ) разделении з тонком сдое пластинок "Сил у фол" в подзижнон фазе гексан: этила цетат: уксусная кислота и проявлении реагентом на основе оромфеяолового синего.

Газохроматографический метод ( ГЖХ ) определения пропакзязафопа основан на изв-течении его метаболита после гидролиза экстракта в кистой среде органическим растворителем а постедующнм определении с детехтором постоянной скорости рекомбинации з зиле ацильного производного.

2Л.2. Метрологическая характеристика метода.

Исследуемый Предел об- j нарушения мг/кг; Среднее значе- Стандартное от | Доверительный объект ние клонение, % j интервал i определения. % среднего. % ГЖХ Вола 1 0.001 89 I 1 5.42 i ±7.01 Почва i I 0.005 ; 81 1 1 5.63 ! =6.91 Растительный j I 0,005 j 80 8.65 t =10.61 материал ! i 1 Сахарная свекла 0.005 78 1 8.72 i zrlO.52 Хлопчатник: 1 ' 1 I семена ! 0.010 l 70 1 8.70 1 =10.60 волокна ‘ 0.005 78 ! 6.90 • Г7.05 \ \ 1 ( i тех I Зола 0.5 82 1 6.06 г 7.92 j Почва 1 0.5 80 ! 5.75 г 7.06 Растительный ; 0,5 ; 68 1 9.10 rl 1.05 материал ! Сахарная свекла 0.5 68 ! 9.60 ril.10 Хлопчатник: се 0.5 | 05 | 9.05 ; П0.35 чена 1 1 • золокна 0.5 73 8.45 Г9Д2

2.2. Реактивы и растворы.

Ацетон, осч.. ТУ 6-09-3513-86.

Гексан. ТУ 6-09-3375-78.

Дид-тловыи эфир 'медицинский).

Этиллиетат. чда.. ГОСТ 22300-76.

Уксусная кислота, ГОСТ 61-75.

0.1 N' НС1 ( фикса нал ).

1.0    N НС1 * фиксанал ).

1.0    N NaOH < фиксанал ).

Хлороформ.

Ацетонитрил, ТУ 6-09-3634-87.

Сульфат натрия безводный, ч., ГОСТ 4166-76.

36

Лжил ( производство фирмы Сиба-Гейги. 99,9%).

Охись хтюминия II ст. активности.

Силикагель марки КСК.

Уголь активированный марки OV-"A*\

Бензол, хч., ГОСТ 5955-78.

Пентафторбеязилбромид, ч., 1% раствор з ацетоне, (реактив по захазу синтезирует институт органической химии СО АН СССР: 630090, г. Новосибирск, проспект Лаврентьева, д.9).

Углекислый калий, хч., ГОСТ 4221-76, 30%-ный водный раствор, промытый бензолом.

Азот в баллоне, особой чистоты, ГОСТ 9293-74.

Неподвижная фаза - 5% ХЕ-60 на Хроматоне N-AW-DMCS.

2.3.    Приборы и посуда.

Ротационный испаритель типа ИР-1М, ТУ 25-11-917-76.

Колбы грушевидные ( круглодонные ) емкостью 50, 250. 100, 50 мл, ОКШ 500-29150-14, ГОСТ 10384-72.

Колбы мерные на шлифах, вместимостью 50, 100 мл, ГОСТ 1770-74.

Пробирки мерные на шлифах, вместимостью 5 и 10 мл, ГОСТ 1770-74.

Аппарат для встряхивания, ТУ 25-11-917-79.

Колба Бунзена, ГОСТ 6514-63.

Воронка Бюхнера, ГОСТ 6574-63.

Делительная воронка вместимостью 500 мл.

Холодильник Либиха.

Баня водяная.

Колбы конические, емкостью 500 мл, ГОСТ 1770-74.

Микрошприц на 10 мкл, МШ-10, TYSE-2333.024.

Секундомер СД Спр.1.2000. ГОСТ 5072-79.

Газовый хроматограф серии **Цвет" с ДПР.

Колонки стеклянные длиной 2 м и внутренним диаметром 3,5 мм.

Камера хроматографическая, ГОСТ 23932-79.

Пульверизатор стеклянный, ГОСТ 10391-79.

П-тастинка хроматографические ** С;стуфол" ( Хемапол. ЧССР).

2.4.    Отбор, хранение и подготовка проб.

Отбор, хранение и доставка проб производится в соответствии с У ниш и -цированяыми правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, лжпе-зых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичестз пестицидов", утвержденных заместителем Главного государственного санитарного врача СССР N 2057-79 от 21.08.79 г.

2.5.    Подготовка к определению.

2.5.1. Приготовление стандартных растворов.

Основной стандартный раствор <ОСР) ажилас концентрацией 100 мкг/мл готовят взятием навески 10 мг (0,0100 о и растворением в ацетоне з мерной колбе емкостью 100 мл. Хранить в холо дильнике в течение 3-х месяцев. Рабочие

37

стандартные растворы с содержанием 10 мкг/мл и 1,0 мкг/мл готовят соответствующим разбавлением ОСР ацетоном. Хранить в холодильнике в течение 2-х месяцев.

2.5.2.    Приготовление проявляющего реактива.

I) 0,05%-ный раствор бромфенолового синего в ацетоне (10 мл) разбазля-ютдо 100 мл 1%-м водно-ацетоновым (1:3) раствором азотнокислого серебра: 2) 5% растзор уксусной кислоты.

2.5.3.    Подвижная фаза для ТСХ.

Гексан: этилацетат: уксусная кислота = 33: 16,5: 0,5

2.6. Описание определения.

2.6.1. Экстракция, очистка экстрактов.

2.6.1 Л. Вода. К 200 мл Нд О прибавляют 20 г хлористого натрия и экстрагируют 50 мл хлороформа з течение 1 часа на Шуттель-аппарате. Отделяют органический слой. Экстракцию повторяют. Объединенные экстракты сушат безводным сульфатом натрия л упаривают досуха. К сухому остатку прибавляют 50 мл 0,1 N НС1, колбу закрывают пробкой и проводят гидролиз при 100³ С з течение 40 минут. Охлаждают и водный слой подщелачивают 1,0 N NaOH до pH 9-10.

Экстрагируют 2 х 10 мл гексана, экстракт выбрасывают. К водной фазе прибавляют 1,0 N НС1 до pH 1-2 и экстрагируют 3 х 10 мл смесью гексан: эфир -4:1. Экстракт упаривают досуха. Далее проводят бензшшроваяие.

2.6Л.2. Почва. 25,0 г анализируемой пробы помещают в плоскодонную колбу, емкостью 500 мл. заливают 80 мл ацетона. Смесь перемешивают на .аппарате хтя встряхивания в течение 2-х часов, фильтруют на воронке Бюхнера с фильтром “синяя лента”. Остаток на фильтре тщательно промывают 50 мл ацетона. Объединенный фильтрат упаривают досуха в вакууме водоструйного насоса при температуре водяной бани 40° С и проводят очистку на колонке 0=50 см. d=0,5 см), заполненную в следующей последовательности: 10 г окиси алюминия 11 сг. активности. 5 г силикагеля марки КС К и 2 г безводного сульфата натрия. Остаток после упаривания растворяют в 2 мл гексана и переносят на колонку.

Затем проводят элюирование 70 мл смеси гексан: этилацетат (9: I), эту фракцию зыбрасывают. Элюируют вещество 200 мл гексан: этилацетат (7:3). элюат упаривают досуха. К сухому остатку прибавляют 50 мл 0.1 N НС. закрывают пробкой а проводят гидролиз при 100° С в течение 40 минут. Охлаждают л экстрагируют 3 х 10 мл смесью гехсан: эфир *4:1). Объединенные экстракты упаривают досуха и проводят бензилирование.

2.6.1.3.    Растительный материал. 10 г измельченной зелени помешают з плоскодонную колбу, емкостью 300 мл. заливают L00 мл ацетона, экстрагируют з течение 1 часа. Экстракт фильтруют на воронке Бюхнера с фильтром "синяя лента *. Экстракцию повторяют. Остаток на фильтре тщательно промывают 50 мл ацетона. Об ьединенный экстракт упаривают досуха. Остаток растворяют з 2 мл гексана и проводят очистку на колонке (1=50 см, d=0,5 ем), заполненную 10

33

г окиси алюминия II ст. активности, 5 г силикагеля марки КСК, 2 г безводного сернокислого натрия.

Элюируют 70 мл смеси гексан: этил ацетат (9:1), эту фракцию выбрасывают. Затем проводят элюнроваЕие 200 мл смеси гексан: этилацетат 7:3. его упар>гвают досуха з вакууме золострупного насоса. К остатку прибавляют 50 мл 0,1 N НО, колбу закрывают пробкой и проводят гидролиз при температуре водяной бани 100³ С в течение 40 мин. Охлаждают и экстрагируют 3x10 мд смесью гексан: эфир 4:1. Экстракт упаривают досуха и проводят бензилирова-ние.

2.6.1.4.    Хлопковые семена. 25 г.хлопховых семян, освобожденных от зо-локон и измельченных, заливают 50 мл ацетона и экстрагируют на аппарате для встряхивания в течение 2-х часов. Экстракт фильтруют на зоронке Бюхнера я упаривают до 2-3 мд. К остатку прибазляют 100 мл 10% -ого водного растзора N^raCl и экстрагируют 3 х 50 мл гексаном. Затем проводят реэкстрахцию объединенных гексановых экстрактов 3 х 40 мл ацетонитрилом. Ацетонитрильный экстракт упаривают досуха и проводят очистку на колонке, размером 50 см х 0,4 см, заполненную в следующей последовательности: 10 г AI2O3 II ст. активности, 5 г силикагеля марки КСК, 2 г безводного сульфата натрия.

Остаток раст воряют в 2 мл гексана и проводят хроматографию на колонке: элюируют 70 мл смеси гексан: этилацетат (9:1) и эту фракцию отбрасывают; собирают фракцию 200 мл гексан: этилацетат (7:3), ее упаривают досуха. К сухому остатку прибавляют 50 мл 0,1 N HCI ,закрывают пробкой и проводят пиролиз при 100³ С в течение 40 минут. Охлаждают, прибавляют 1,0 N NaOH до pH 9-10 и экстрагируют 2х 10 мл гексаном, органический слой выбрасывают, к водному стою прибавляют 1,0 N НС1дорН 1-2иэкстрапфуютЗ х 10 мл смесью гексан: эфир (4: L). Объединенные экстракты упаривают в вакууме водоструйного насоса при 40° С досуха и проводят бензилированне.

2.6.1.5.    Волокно хлопчатника. 10 г золокна хлопчатника измельчают, заливают 100 мл ацетона и экстрагируют на аппарате для встряхивания з течение 2-х часов. Дальнейшее определение проводят аналогично разделу 2.6.1.4

2.6.2.    Получение производного.

К сухому остатку прибавляют 10 чл ацетона, 0,2 мл 1% ацетонового растзора пентафторбензилбромила, 30 мкл 30% -ного водного раствора углекислого калмя я 3 г безводного сульфата натрия. Бензилированне проводят з кругл о донной колбе с обратным холодильником при температуре зодяной бани 70-75³ С з течение 40 минут. Охлаждают и хроматографируют.

2.6.3.    Условия хооматографирования.

2.6.3.1. ГЖХ.

Газовый хроматограф серия **Цзет" с ДПР.

Колонка хроматографическая стеклянная длиной 2.0 м и внутренним диаметром 3,5 мм.

Неподвижная фаза 5% ХЕ-30 на Хроматоне N-AW-DN1CS.

Температура колонки - 190^е С.

39