государственная комиссия по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями РАСТЕНИЯ И СОРНЯКАМИ ПРИ мех СССР
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ МИКРОКОДЧЕСТВ ПЕСТИЦИДОЗ В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ, КОРМАХ И ВКЕшНЕЙ СРЕДЕ
Часть XI
Москва - 1961
Государственная комиссия по химичеоким средствам борьбы вредителями, болезнями растений и сорняками при МСХ СССР
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ МИКРОКОЛИЧЕСТВ ПЕСТИЦИДОВ В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ, КОРМАХ И ВНЕШНЕЙ СРЕДЕ
Чаоть Х1-я
Данные методики апробированы и рекомендованы в качестве официальных группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы о вредителями, болезнями растений и сорняками при МСХ СССР
Москва - 1981
тактирования сохраняется в пределах 1-20 нг.
2.6 Количественное определение проводят методом соотношения оо стандартом по высоте пиков. Содержание валексона в анализируемой пробе вычисляют по формуле:
- высота пика анализируемой проба, ш Нст - высота пика стандатра, ш Сст - содержание валексона в стандарте, нг У& - объем аликвоты, вводимой в хроматограф, мкл 2 ыкл)
У - o6njifl объем рабочего раствора, мл (2 мл)
А - навеска анализируемой пробы ( в перасчете на% сухое вещество), г или объем воды, мл.
Если при введении в хроматограф получаются слишком большие пики или происходитпзаожаливание", готовят более разбавленные растворы, добавляя к конечному раствору пипеткой иэвостное количество гексана. ^
Альтернативная колонка
Колонка стеклянная длиной 2 м, внутренним диаметром 3 мм, заполнена хрематономAf-AW-^IC^ (0,15-0,20 мм) с 296 полидиэтилен-гликольсукцинатом, Температура колонки 190°С, испарителя 2СК,°С.
Время удерживания валексона I мин 37 сек. Прочие ФСП определению не мекают, т.к. выходят значительно позже, например, время удерживания ьетафоса 7 иш.
Л1ПГЫ
Настоящая могодика р.г:: •r.-z: разработки авторских коллективов:
X. Петрооа Т.М., Федорова И.С., Всесоюзный научно-исследовательский
институт эапртти растений, г. Ленинград*
2. Лещинская Л.И., Новикова К.Ф., Косачева Е.И., Всесоюзный научно-исследовательский институт химических ородетв эащлты растений, Москва.
3, Швец Д.А, , Всероссийский иаучно-исслодопптельскиЯ институт оациты растений, пос. Ромомь, Воронежской обл.
Требования безопасности Общепринятые требовании безопасности при .аботе с горючими растворителями и фосфорорганичоскичи пестицидами. Осторожно o6j»a-щатьоя о ацетонитрилом, т.к. он дцовит.
60
Хлорсодеряэщио пестициды
1. Но тонические указания по определению ноорока л нодо методом газовой хроматографии . ......... .
2. Методические указания по определению нитрохлоре и
профорано в эфирных маслах и эфиромаеличном оырье методом газожидкостной хроматографии .......
3. Мотодичоскио указания по определению ЭФ-2 в воде и
почве газожидкостной хроматогрофиой ....... .
4. Мотодичоскио указания по определению хлорорганичес-ких пеотицидов в воде, продуктах питания, кормах и табачных изделиях хрометогрофиой в тонком олоо . .
5. Методические указания по определению полихлориро
ванных бифенилов в присутствии хлороргзничоских постицидов в птицепродуктах методом газовой гроыа-тографии...... . . .
Фосфорсодержащие постициды
I. Мотодиче окне указания по опродолению остаточных количеств вэлоксоно в растительном мате риале, ночво и водо тонкослойной и газожидкостной хроматографией •
2• Мотюдичоокио указания по опродолению остаточных количеств готорофоса в овощных культурах, почве и воздухе методами тонкослойной и газожидкостной хроматографии ....................
3. Методические указания по оиродолони» остаточных количеств дуребона в растительном материале, почве и воде тонкослойной и гсзохидкостной хроматогрэфиой •
4. Мотодичоские указания по определению остаiочных ко
личеств кзофоса-3 в рисе, почве и воде газожидкостной и тонкослойной хроматографией ...... • . •
3. Нотодпчоскиа указания по определению мотилнитроуоса и фоиитрооксоао в зорно и продуктах переработки зерна хромато-энзимами к гаэохроиотографичоским методом .......................
Стр.
6* Методические указания по определению остаточных количеств рицида "П" в рисе и водо газожидкостной
хроматографией -................. 93
7. Методические указания по определению матилнитрофооа,
фенитрооксона и п-нитрокреаола в зерне и продуктах переработки зерна методом хроматографии в тонком
слое....................... ЮЗ
Азотсодержащие пестициды
*1# Производные мочевины, гуанидина, дитио-карбаииноаой кислоты, анилиды карбоновых кислот, нитропроизводные, дитиокарбаматы
I. Ыетодичоские указания по определению дуада в растительном материале, почве и воде хроматографией в
8. Энзимно-хроматограбический метод определения фоо-фороргэничоских пестицидов в раотителышх продуктах и биосуОстратах .................. 109
тонком слое.................... 118
2. Методические указания но определению остеточных ко
личеств гербицида малорано в почвах о различным содержанием гумуса методом TGX........... 124
3. Методические указания по определению остаточных количеств HE-I66 в огурцах хроматографией в тонком
сдое и фотометрическим методом .......... 129
4. Методические указания по определению остаточных количеств теидекса в воде и почве.......... 136
5. методические указания по опр делению ФДН -ди-
ывтмл-Ж-(З-хлорфонил)-гуанидиаа) в огурцах и воде методом тонкослойной хроматографии ........ 139
6. Методические укззаиия по определении дитана М-45 в
продуктах питания растительного происхождения и воде ........................ 149
П. Гетероциклические соединения
7. Методические указании но определению базаграна в
воде, почве, зерне и растительном историале .... 152
УЪ
Cip,
6. Uti то диче окне указания по определению фунгицида бай-летона методом ТСХ в почве, корнях,зеленых листьях,
плодах томатов и огурцов..........’. . . 159
9. Методические указания по газохидкостно-хроматографическому определению бентазона в почве ч растениях 166
10. Методические указания по определению диквата в се
менах подсолнечника и масле из семян подсолнечника опектрофотометричеоким методом .......... 174
11. Методические указания по определению метазина в во
де, почве, овощах и биологическом материале методом хроматографии в тонком одое сорбента....... 181
12. Методические указания по определению остаточных количеств симм-триазиновых гербицидов (симазинэ, ат-разина, проказина, промо трина, семерона, меэорэни-ла, метазина, метопротрина) в почве гээожидкоотной
хроматографией .................. 188
13. Мотодичеокие указания по определению котофора в семенах хлопчатника методом хроматографии в тонком
слоо....................... 198
14. Мотодичеокие указания по определению ронстэрт (ок
сидна зона) в рисе методами газовой и тонкослойной хроматографии ................... 205
15. Методические указания по определению тачигьренэ в
вода методом тонкослойной хроматографии ...... 209
1C Методические указания по определению тербацилэ в эфирных маолэх и эфиромасличном сырье методом газожидкостной хроматографии ............. 214
17. Мотодичеокие указании по определению трифорииэ в
воде....................... 220
18. Методические указании по определению остаточных ко
личеств текто(тиабанда зола) в картофеле и свекле тонкослойной хроматографлей............ 227
19. Методические указания но определению остаточных ко
личеств фона зоне в почве, воде, свекле и растительных обьоктах газожидкостной хроматографией .... 234
Прочие пеотигиды
I. Методические указания по определению остаточных.
количеств хлората магния полярографическим ue-wov ••• 2чЗ
2. Методические указания по определению нортроаа в
ьодо, черноземной почве и сахарной свекле ............ 2**8
3. Методичеокие указания по определению содержания
общой ртути в **чсе, яйцах, рыбе, молочных продуктах, ПОЧВ", .....*..................................Zj'J
Бактериальные пестициды
1. ?Летодические указания по определению микробиологи
ческих инсектицидов не прямым иммунофлюореогентним методом ..............................................268
2. U*годические указания по определению виталичина А
j воздухо м'етодом тонкослойной хроматографии.........276
Дополнения
I. Хроматографическое определение микроколичеотв пропанида, линурона, монолинурояа и их метаболи
3* Методические указания по определению полиэдров» вируса ядерного полиэдроза капустной совки на растительных объектах иыыунофлюоресцентным методом ....... 260
тов в воде, почве и растительном материале ......... 289
2. Методические указания по ^пределе*чю актеллика
растительной продукции, почве и воде ................. 296
Настоящие методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-иоследователь-ских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токоикологичеоких лабораторий Минсельхоза СССР и лабораторий других Министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пео-тицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде*
Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных группой экспертов при Госкомио-сии по химическим средствам борьбы о вредителями, болезнями растений и оорнпками при МСХ СССР. (Председатель группы экспертов М.А.Клисенко).
Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования оанэпидслужбы ИМПиТМ им.Е.И.Ыарциновокого и лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минэдрава СССР.
•утшаэддю"
ЗАМЕСТИТЕЛЬ ГЛАВНОГО ГОСУДАРСТВЕННОГО САНИТАРНОГО ВРАЧА CCQ
А.И. ЗАЙЧЕНКО 19 октября 1979г.
» -093-79
КЕТ0Д1ЧЫЖЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ВАЛЕКСОНА В РАС ТИТР ТЬНСЫ МАТЕРИАЛЕ, ПОЧВЕ И ВОДЕ ТОНКОСЛОЙНОЙ И ГА302ИДС0СТН0Й ХРШАТ0ГРАЙ1ЕЯ
I. Краткая характеристика препарата
I. I. Валексон
I. 2. 0,0-диэтилтиофосфорил-0-(«><.-ци&нобензальдокскм)
!. 3. $ сц
CI^I5°3^
Мол. масса 298,3 1.4. Фоксим, байтной, волатон, Bay-77468, EN Т-27448 I. 0. В чистом виде жидкость светло-желтого цвета с Т. кип. Ю2°С
при 0,01 мм рт. ст., Т. пл. 3-4°С. Хорошо растворяется в большинстве органических раствори толей; растворимость в поде при 20°С - 7 мг/л.
Разрушается в сильных кислотах и щелочных средах.
Препарат малотоксичен для теплокровных» При оральном введе-
НИИ для крыс Л%ф 1900 - 2060 мг/хг.
Выпускается в форме 504-ного концентрата эмульсии, 404-ного смачивающегося порошка для борьбы с сосущими и грызущими насвк(мы-ми на капусте, картофеле, томатах, яблонях и др. культурах, а также в виде 54-ных гранул для борьбы с почвенными вредителями,
ПДК валексона в продуктах питания, воде и почве не установлена.
2. Методика определения валекоона
2.1. Основные положения
2.1.1. Принцип метода
Метод основан на извлечении валексона из анализируемых проб органическим растворителем или для почвы смесью ацетона с 0,05 н водный раствором хлористого кальция (смесь в соотношении 1:1), перераспределением между двумя несмешивающимися растворителями о пс;ледуюо{им определением тонкослойной или газожидкостной хроматографией с ТИД. При определении методом тонкослойной хроматографии пробу дополнительно чистят на колонке.
2.1.2. Метрологическая характеристика метода
Минимально детектируемое количество
Нижний предел определения (чувствительность метода)
ГКХ :
I чг :
0,004мг/кЬ
0,001мг/л:
R размах варьирования, 4 в растениях 70,5-87,5
в почвах 92-97
с среднее значение определения, 4
0,1 мг/г 0,05 мг/л
83-67
90-95
в растениях 76,3
в почвах 94
$ стандартное отклонение, 4
в растениях 7,9
в почвах 3,5
Доверительный интервал среднего при
р=0,9б и П *5, 4, для растений 76,3^9,1 для почв 94Т4
2.1.3. Избирательность метода
Метафос, фталофос, фозалон, карбофос, диазинон, фосфамид, гардона, трихлорметафос-3 огтроделению не мешают,
2.2. Реактивы м. растворы
Ацетон, ч. ГОСТ 2603-63 -СН3СОСН3 Гексан, х.ч,, МРТУ 6-09-2937-66 - CH3(CHj>)4CH3 Хлороформ, х.ч., ГОСТ 3160-51 -СНС13 Бензол ч.д.а., ГОСТ 5955-66 -
Ацетонитрил, ч., МР1У 6-09-G446 - CHjC}f Диметилформакид, ч., VPVf 6-09-20Б8-65 - НСО (CH3)£
Хлористый натрий, х.ч. ГОСТ 4233-66 -^аС1 Хлористый кальций, х.ч., ГОСТ 4161-67 - CaC^ISHgO Сульфат натрия, безводный, ч.д.а. ГОСТ 4166-66 -А/а3/^ 04
Уголь активированный марки КАД-молотый или СУ-А
Силикагель КСК с флюоресцирующей добавкой или пластинки "Силуфол-
uv-г54"
Окись алюминия, для хроматографии МРТУ 6-09-5296-66-4 - AI^O^ Проявляющие реактивы:
1. 0,55*-кьгй раствор 2,6-дибром--хлор хин он ими на в гексане
2. 1#-ный раствор 4-Ср-нитробензил)пиридина в ацетоне; Ю#-ный раствор тетраэтиленпентамина в ацетоне
3. Смесь броыфенолового синего и азотнокислого серебра в ацето
не:
A. 0,5#-ный водно-ацетоновый раствор азотнокислого се-бра (I ч. воды : 3 ч. ацетона)
Б. 0,03 г. бромфенолового синего растворяют в 10 мл ацетона, а затем разбавляют раствором А до 100 мл
B. 5#-кый раствор уксусной кислоты Азот особой чистота
Водород
54
Стандартные растворы валексона в ацетоне с содержанием 5 мкг/мл (для ТСХ) и в гексане с содержанием 0,5; 1*2; 5; 7; 10 мкг/мл (для Ш ),
59б,^Е-30 и 3% ХЕ-СО на хромаеорбо //(80-100 меш), силаниэирован-ный
256 полиэтиленгликольсукцинат на хроматонеУ-А^-Д*1С$ (0,16-0,20мм)
2.3. Приборы и посуда
Хроматорраф Цпет-Юо или аналогична прибор с ТИД Аппарат для встряхивания
Ротационнып вакуумный испаритель или другой прибор для отгонки растворителей под вакуумом Хроматоскоп (хемоскоп) с излучением 250-280 н>*
Колбы конические со шлифами на 500 мл
Колбы круглодонные на 500 мл
/длительные воронки на 2л, 1 л и 0,5 л
Колбы мерные на 200 мл и 100 мл
Колонки для адсорбционной хроматограмм длиной 30 см, внутренний диаметром 15 мм Хроматографическая камера Камера для опрыскивания хроматограмм Пульверизаторы
Пипетки на 0,1 мл, I мл, 5 мл, 10 мл Почвенное сито Пикрошприц на 10 мкл
2.4. Отбор и подготовка проб
Растительную пробу (овои^, фрукты, зеленую массу растений) измельчают ножом на кусочки 0,5x0,5x0,5 см и отбирают среднюю пробу 25 г.
Почву в естественно-влажном состоянии или воздушно-сухую просеивают через почренное сито и для анализа отбирают среднею пробу 10 г.
55
Проба воды - 100 ил.
2.5 Проведение определения
Анализируемые навески помещают в конические колбы емкостью 250 мл, пробы воды - в долительные воронки, куда добавляют по 10 г хлористого натрия.
Из растений валексон экстрагируют 100 мл смеси ацетона с водой (1:1), из почв - 50 мл смеси ацетона с 0,05 н водным раствором хлористого кальция (1:1). Из воды экстракцию валексона проводят хло-роформоы порциями по 120, 100 и 75 мл.( экстракта и(Ь>единнмт.
"Экстракцию инсектицида из образцов производят с помощью механического встряхивания в течение 30 мин. Растительные экстракты охлаждают в холодильнике или в смеси соли со льдом. Пробы отфильтровывают от растительных и почвенных остатков в делительные воронки через бумажный фильтр. Экстракцию повторяют еще два раза тем же количеством растворителя. Объединенный экстракт подвергается очистке. Для ©того в делительную воронку прилипают гексан четыре раза по 20 мл. После встряхивания 3-5 мин и расслоения жидкостей собирают гексановую фракцию в круглодонную колбу, высушивают путем фильтрования через безводный сернокислый натрий. Объединенный гексановый экстракт концентрируют под вакуумом при температуре не выше 40° до объема 0,5 - 1,0 мл.
Пр:. определении методом ТСХ или в случав, если методом ПР( получаются "грязные" хроматограммыf проводит дополнительную очистку. Это относится в основном к образцам из растительных объектов. Для этого в пробы добавляют 5 мл ацетонитрила (ацетонитрил можно заменить диметклфО]*'Ямидом, однако с первым растворителем очистка проходит значительно лучше) и доводит общий обьем до 50 мл водой. Пробы встряхивают 1-2 мин, далее производят переэкстракцию валёксока в гексан. С этой цель»? пр^бы гер-.нсслт я делительную воронку, ири/.и-%
вают 20 ил гексана, встряхиваю» 1-2 мин и после разделении слоев гексановый сливают в круглодонную колбу дли отгонки, фильтруя через безводный сернокислый натрий, а водно-ацетонитрильный еще два раза промывают гексаном. Объединенные гексановые окстракты концентрируют под вакуумом при 40° до 5 мл и проводят количественное определение.
В случае если проба нуждается еще в очистке, то следует применить колоночную хроматографию, а именно, пробу вносят в колонку (30 см х 1,5 см), заполненную слоем сернокислого натрия (2-3 см), окиси алюминия для хроматографии (3 см), активированного угля КАД-молотыЯ или СУ-А (Зсм) и безводного сернокислого натрия (X си). Предварительно через колонку пропускают 30-40 цл хлороформа для уменьшении сорбционной емкости. Из колонки валексон элюируют 100 мл хлороформа при отсасывании с помощью водоструйного насоса. Хлороформ удаляют под вакуумом, остаток растворяют в гексане «* определяют количество иалексона хроматографическими методами.
Пробы воды, проэкстрагированные хлороформом, если необходимо, то чистят подобным способом.
(1,3)
Условия определения тонкослойной хроматографией
Проба с помощью капилляра или микропипетки наносится на хроматограф ческую пластинку. Парралельно на пластинку наносят серию стандартных растворов с содержанием I, 2 и 5 мкг валексона. Хроматограмму развивают в системе гексан-ацетон (4:1), подсушивают на воздухе и обрабатывают одним из трех проявляюиртх реагентов.
1. Хроматограмму опрыскивают 0,5%-ным раствором 2,6-дибром-^ -хлорхиконимина в гексане, а затем нагревают в течение 5-7 мин в термостате при П0°С. Валексон проявляется в виде оранжевых пятен на белом фоне. Нижний предел обнаружения 0,5 мкг.
2. Хроматограмму опрыскивают 1%-кым раствором 4-(р-нитробензил)-пиркдина, нагревают в сушильном шкафу 3-5 мин при 110°С, затем снова
57
опрыскивают 10%-ным раствором тетраэтилонпентамина в ацетоне. Ва-лексон проявляется в виде сине-фиолетовых пятен на светлом фоне. Нижний предел обнаружения 0,0 мкг.
3. Хроматограмму опрыскивают бромфеноловым реагентом с последующим снятием фона в реьультате обработки пластинки 0%-ным раствором уксусной кислоты. Валексон проявляется в виде сине-фиолетоьых пятен на светло-жьлтом фоне. Нижний предел обнаружении 3 мкг.
Пластинка со слоем силикагеля, в который внесен флуоресцирующий краситель или пластинки "Силуфол- 1/г254" можно, не проявляя их, просматривать в хроматоскопе. Инсектицид определяют по тушению флуоресценции. Нижний предел обнаружения I мкг.
валексона в системе гексан-ацетон (4:1) на пластинках "Си-луфол" составляет 0,5 - 0,02.
Содержание валексона в исследуемой пробе вычисляют по формуле:
мкг/кг (мг/л), где
С - количество препарата, найденное по хроматограмме при сравнении со стандартами, мкг;
А - навеска исследуемой пробы в мг или объем волы в мл.
Условия определения газожидкостной хроматографией
Хро^тограф Цвет 100 или другой модели с ТНД.
Скорость протяжки ленты самописца^1 см/мин.
Рабочая шкала элокгрометра 20x10 д
CTeKJiHHHaH колонка длиной 100 см и внутренним диаметром 3 мм, заполненная хроматином //-А^-ДЮо (0,10-0,20 *<) с 5#^1С-30.
Температура колонки и испарителя I30°C. С; рость азота 26 а-./мин, водорода 15 мл/мин, воздухи 150 м.ч/мин. Время удерживания пнлвк-сона 3 мин 22 сек. Прочие ФОЛ выходят по же.
В хроматограф вводят 2 мкг. рабочего раствора, *imtUHOiTb де-
S5
