МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СОВЕТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ, МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ

(МГС)

INTERSTATE COUNCIL FOR STANDARDIZATION. METROLOGY AND CERTIFICATION

(ISC)

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ

СТАНДАРТ

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ, КОРМА, ПРОДОВОЛЬСТВЕННОЕ СЫРЬЕ

Метод определения микотоксинов с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием

Издание официальное

Москва

Стандартинформ

2017

Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены в ГОСТ 1.0-2015 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2-2015 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные. правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия. обновления и отмены»

Сведения о стандарте

1    РАЗРАБОТАН Федеральным государственным бюджетным учреждением «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГБУ «ВГНКИ»)

2    ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3    ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 1 июня 2017 г. № 51-2017)

За принятие проголосовали:

Краткое наименование страны no МК (ИСО 3166) 004—97 Код страны по МК(ИСО 3166)004—97 Сокращенное наименование национального органа по стандартизации Армения AM Минэкономики Республики Армения Беларусь 8Y Госстандарт Республики Беларусь Казахстан К2 Госстандарт Республики Казахстан Киргизия KG Кыргызстандарт Россия RU Росстандарт Узбекистан U Z Узстандарт

4    Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 18 июля 2017 г. № 719-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 34140-2017 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2018 г.

5    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок — в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (www.gost.ru)

© Стандартинформ. 2017

В Российской Федерации настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен. тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

Таблица 3 — Массовые концентрации микотоксинов в матричных градуировочных растворах

Микотоксин Массовая концентрация микотоксина, нг/см3 ®1 g2 <*э 64 <?5 6в З-Ацетил-дезоксиниваленол 1.0 2.0 10 20 100 200 15-Ацетил-дезоксиниваленол 1.0 2.0 10 20 100 200 Агроклавин 1.0 2.0 10 20 100 200 Альтернариол 1.0 2.0 10 20 100 200 Альтернариола-метиловый эфир 1.0 2.0 10 20 100 200 Афлатоксин В, 0.1 0.2 1 2 10 20 Афлатоксин В2 0.1 0.2 1 2 10 20 Афлатоксин G, 0.1 0.2 1 2 10 20 Афлатоксин G2 0.1 0.2 1 2 10 20 Боверицин 5.0 10.0 50 100 500 1000 Вортманнин 1.0 2.0 10 20 100 200 Глиотоксин 1.0 2.0 10 20 100 200 Гризеофульвин 1.0 2.0 10 20 100 200 Дезоксиниваленол 5.0 10.0 50 100 500 1000 Дезоксиниваленол-З-глюкозид 5.0 10.0 50 100 500 1000 Деэпокси-дезоксиниваленол 1.0 2.0 10 20 100 200 Диацетоксисцирленол 1.0 2.0 10 20 100 200 Зеараленон 2 4.0 20 40 200 400 Койевая кислота 10,0 20.0 100 200 1000 2000 Мелеагрин 1.0 2.0 10 20 100 200 Микофеноловая кислота 1.0 2.0 10 20 100 200 Монилиформин 1.0 2.0 10 20 100 200 НТ-2 токсин 1.0 2.0 10 20 100 200 Неосоланиол 1.0 2.0 10 20 100 200 Ниваленол 5.0 10.0 50 100 500 1000 Охратоксин А 0.1 0.2 1 2 10 20 Охратоксин В 0.1 0.2 1 2 10 20 Паксиллин 0.1 0.2 1 2 10 20 Патулин 1.0 2.0 10 20 100 200 Пенициллиновая кислота 1.0 2.0 10 20 100 200 Рокфортин С 1.0 2.0 10 20 100 200 Роридин А 1.0 2.0 10 20 100 200 Стахиботрилактам 1.0 2.0 10 20 100 200 Стеригматоцистин 1.0 2.0 10 20 100 200

Микотоксин	Массовая комцентра^я микотоксина, нг/см-'
	б,	б2	б3	<?4	б5	б6
Т-2 тетраол	1.0	2.0	10	20	100	200
Т-2 токсин	1.0	2.0	10	20	100	200
Т-2 триол	1.0	2.0	10	20	100	200
Тентоксим	1.0	2.0	10	20	100	200
Тенуазоноеая кислота	1.0	2.0	10	20	100	200
Фузаренон X	5,0	10.0	50	100	500	1000
Фузариевая кислота	10,0	20	100	200	1000	2000
Фумагиллин	1.0	2.0	10	20	100	200
Фумонизин В,	10.0	20	100	200	1000	2000
ФуМОнизин В2	10.0	20	100	200	1000	2000
Фумонизин В3	10.0	20	100	200	1000	2000
Циклопиазоновая кислота	1.0	2.0	10	20	100	200
Цитреовиридин	1.0	2.0	10	20	100	200
Цитринин	5,0	10,0	50	100	500	1000
Эргокорнин	1.0	2.0	10	20	100	200

Пробирки встряхивают в вибрационном шейкере в течение 1 мин и проводят обработку пробы согласно разделу 7.

Срок хранения растворов G,—G₆ при температуре от 2 °С до 8 °С — не более 72 ч.

7 Отбор и подготовка проб

7.1    Отбор проб

7.1.1    Отбор проб зерна и продуктов переработки зерна — по ГОСТ 13586.3.

7.1.2    Отбор проб круп — по ГОСТ 26312.1.

7.1.3    Отбор проб муки и отрубей — по ГОСТ 27668

7.1    4 Отбор проб кормов — по ГОСТ ISO 6497.

7.1.5    Отбор проб жмыхов, шротов — по ГОСТ 13979.0.

7.1.6    Отбор проб комбикормов, комбикормового сырья — по ГОСТ 13496.0.

7.2    Подготовка проб

Из средней пробы зерна, продуктов его переработки, круп, кормов, комбикормов, жмыхов, шротов выделяют около 100 г продукта, измельчают на лабораторной мельнице и просеивают через сито с отверстиями диаметром 0.5 мм. перемешивают.

Из средней пробы муки, отрубей выделяют около 100 г продукта, тщательно перемешивают.

Взвешивают 5.00 г подготовленной пробы и помещают в виалу или полипропиленовую пробирку вместимостью 50 см³. Добавляют 25 см³ раствора для экстракции (см. 6.2.2). помещают на 30 с в вибрационный шейкер, затем — для перемешивания в течение 60 мин на качающийся шейкер. Центрифугируют при 3500 g в течение 20 мин.

В микроцентрифужную пробирку вносят 500 мм³ подвижной фазы А и 500 мм³ верхнего слоя экстракта. Центрифугируют при 15 000 g при температуре 4 °С в течение 20 мин. Пипеточным дозатором отбирают 700 мм³ верхнего слоя экстракта и фильтруют через микрофильтр с нейлоновой мембраной в виалу для ВЭЖХ-МС/МС анализа.

9

8 Порядок выполнения анализа

8.1    Условия хроматографических измерений

8.1.1    Хромато-масс-спектрометр включают в соответствии с руководством (инструкцией) по эксплуатации и устанавливают параметры рабочих режимов масс-спектрометрического детектирования и хроматографического разделения.

8.1.2    Например, для колонки диаметром 2.1 мм, длиной 150 мм. с обращенно-фазовым сорбентом С18, с размером частиц не более 5.0 мкм. соблюдают следующие условия хроматографирования:

-    температура колонки — 40 “С;

-    скорость потока подвижной фазы — 0,25 см³/мин;

-    температура в отсеке устройства ввода проб — 10 °С.

-    объем вводимой пробы — 20 мм³.

Разделение проводят в режиме градиентного элюирования в соответствии с таблицей 4

Таблица 4 — Условия градиентного элюирования

Время, мин Подвижная фаза А. % Подвижная фаза Б. % 0.0 100 0 2.0 100 0 12.0 0 100 18.0 0 100 16.1 100 0 25.0 100 0

8.1.3 Параметры режима мониторинга множественных реакций (МРМ) при измерении микотоксинов приведены в таблицах 5 и 6.

Регистрацию положительных и отрицательных ионов проводят путем двух отдельных последовательных измерений.

Настройки масс-спектрометрического детектора (источника ионов, ионной оптики) устанавливают при внедрении метода на каждой единице оборудования путем прямого ввода анализируемых веществ в масс-спектрометр и установления оптимальных характеристик согласно рекомендациям производителя масс-спектрометра.

Таблица 5 — Параметры режима МРМ при регистрации положительных ионов

Микотоксин Ион-предшественник, m/z Ион-продукт 1/ ион-продукт 2 15-Ацетил-дезоксиниваленол 339 322/304 Агрокпавин 239 183/208 Афлатоксин В, 313 128/241 Афлатоксин В2 315 259/287 Афлатоксин G1 329 243/200 Афлатоксин Оз 331 245/189 Боверицин 807 384/784 Вортманнин 429 355/295

ГОСТ 34140-2017

Микотоксин Ион-лредшествениик. т/г Ион-продукт 1/ ион-продукт 2 Глиотоксин 327 263/245 Гризеофульвим 353 165/215 Диацетоксисцирпенол 384 307/105 Коиевая кислота 143 69/113 Мелеагрин 434 403/334 Микофеноловая кислота 338 207/303 НТ-2 токсин 442 263/105 Неосоланиол 400 215/185 Охратоксин А 404 239/102 Охратоксин 8 370 205/103 Паксиллин 436 182/167 Пенициллиновая кислота 171 125/97 Рокфортин С 390 193/322 Роридин А 550 249/231 Стахиботрилактам 386 178/150 Стеригматоцистин 325 310/281 Т-2тетраол 316 215/281 Т-2 токсин 484 215/185 Т-2триол 400 215/281 Фуэариевая кислота 180 152/134 Фумагиллин 459 177/131 Фумонизин В, 722 334/704 Фумонизин В2 706 336/688 Фумонизин В3 706 336/319 Цитреовиридин 403 139/297 Цитринин 251 233/205 Эргокорнин 562 544/223

Таблица 6 — Параметры режима МРМ при регистрации отрицательных ионов

Микотоксин Ион-предшественник, т/г Ион-продукт 1 /ион-продукт 2 З-Ацетил-дезоксиниваленол 397 59/337 Альтернариол 257 213/215 Альтернариола-метиловый эфир 271 256/227

11

Микотоксин	Ион-предшественник, т/г	Ион-продукт 1 /ион-продукт 2
Дезоксиниваленол	295	59/265
Дезоксиниваленол-З-глкжозид	517	427/59
Деэпокси-дезоксиниваленол	339	59/249
Зеараленон	317	131/175
Монилиформин	97	41
Ниваленол	371	59/281
Патулин	153	109/135
Темтоксин	413	141/271
Темуазомовая кислота	196	139/112
Фузаренон X	413	59/353
Циклолиазоновая кислота	335	140/195

8.2 Построение градуировочной характеристики

Построение и расчет градуировочной характеристики проводят в каждой серии измерений с помощью программного обеспечения хромато-масс-спектрометра.

8.2.1    Проводят однократные измерения не менее трех градуировочных растворов, приготовленных по 6.3.5. в порядке возрастания концентраций микотоксинов в соответствии с таблицей 3.

8.2.2    Вычисление площади пика проводят для каждого иона-продукта анализируемых микотоксинов. Допускается проведение количественных измерений по одному, наиболее интенсивному, иону-продукту.

8.2.3    При построении градуировочной характеристики используют линейную регрессию, при этом коэффициент корреляции должен быть не менее 0.98.

8.2.4    Построение линейного градуировочного графика и расчет концентрации микотоксинов в анализируемых пробах выполняются системой обработки данных в автоматическом режиме.

8.2.5    Градуировочную характеристику строят заново при каждой серии измерений.

8.3 ВЭЖХ-МС/МС измерение

8.3.1    Для измерения содержания микотоксинов проводят ВЭЖХ-МС/МС анализ в соответствии с руководством (инструкцией) по эксплуатации применяемого оборудования.

8.3.2    Анализ выполняют в виде серии измерений, включающей следующие образцы:

-    подвижная фаза А;

-    «чистая» проба:

-    градуировочные растворы (см. 6.3.5);

-    экстракты анализируемых проб, приготовленных по 7.2.

8.3.3    В инжектор хроматографа вводят 20 мм³ пробы, подготовленной в соответствии с разделом 7. и проводят измерения в условиях, используемых при установлении градуировочной зависимости.

8.3.4    Определяют и регистрируют на хроматограмме время удерживания пиков двух ионов-продуктов каждого микотоксина, соответствующее времени удерживания, найденному при измерении градуировочных растворов.

9 Метрологические характеристики

Установленный в настоящем стандарте метод обеспечивает выполнение измерений содержания микотоксинов с относительной расширенной неопределенностью результатов аналитических измерений при коэффициенте охвата к = 2 и доверительной вероятности Р = 0.95. указанной в таблице 7.

is

V^м

8

8

8

8

8

8

8

8

8

8

8

8

8

8

Таблице 7 — Потсататели томности и прецияиоиности метода при

8

8

8

8

Я

Я

Я

н!

!

ill

il

§

II

8

fit

§

«■

ч

Я

6

8

&

8

6

а

8

!! I

от

I i 1

if

13

ГОСТ 34140-2017

Содержание

1    Область применения..................................................................1

2    Нормативные ссылки..................................................................1

3    Сущность метода.....................................................................2

4    Требования безопасности и условия выполнения измерений.................................2

5    Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, посуда и реактивы..............2

6    Подготовка к проведению измерений.....................................................4

6.1    Подготовка лабораторной посуды и реактивов.........................................4

6.2    Приготовление растворов..........................................................5

6.3    Приготовление градуировочных растворов............................................5

7    Отбор и подготовка проб...............................................................9

7.1    Отбор проб......................................................................9

7.2    Подготовка проб..................................................................9

8    Порядок выполнения анализа.........................................................10

8.1    Условия хроматографических измерений............................................10

8.2    Построение градуировочной характеристики..........................................12

8.3    ВЭЖХ-МС/МС измерение.........................................................12

9    Метрологические характеристики ......................................................12

10 Обработка результатов измерений....................................................18

11 Оформление результатов измерений...................................................18

12    Контроль правильности и прецизионности результатов измерений..........................18

III

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ, КОРМА, ПРОДОВОЛЬСТВЕННОЕ СЫРЬЕ

Метод определения микотоксинов с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием

Food products, feed, food raw materials Method for determination of mycotoxins by high performance liquid

chromatography — mass spectrometry

Дата введения — 2018—07—01

1    Область применения

Настоящий стандарт распространяется на пищевую продукцию, продовольственное сырье в части зерновых культур, корма, кормовое сырье в части зерновых и масличных культур, комбикорма и устанавливает метод высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием (далее — ВЭЖХ-МС/МС) для определения содержания микотоксинов.

2    Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие межгосударственные стандарты:

ГОСТ 12.1 005—88 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны

ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.019-79* Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ 12.2.085-2002 Сосуды, работающие под давлением. Клапаны предохранительные. Требования безопасности

ГОСТ 61-75 Реактивы. Кислота уксусная Технические условия

ГОСТ OIML R 76-1—2011 Государственная система обеспечения единства измерений. Весы неавтоматического действия Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания

ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042—83, ИСО 4788—80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия ГОСТ 2603-79 Реактивы. Ацетон. Технические условия

ГОСТ ИСО 5725-6-2003** Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике ГОСТ ISO 6497-2014 Корма. Отбор проб ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия ГОСТ 6995-77 Реактивы. Метанол-яд. Технические условия ГОСТ 13496 0—2016 Комбикорма, комбикормовое сырье. Методы отбора проб ГОСТ 13586.3-2015 Зерно. Правила приемки и методы отбора проб

* В Российской Федерации действует ГОСТ Р 12 1 019—2009 «Система стандартов безопасности труда Электробезопасностъ Общие требования и номенклатура видов защиты»

** В Российской Федерации действует ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений Часть 6 Использование значений точности на практике»

Издание официальное

ГОСТ 13979.0-86 Жмыхи, шроты и горчичный порошок. Правила приемки и методы отбора проб ГОСТ 22300-76 Реактивы. Эфиры этиловый и бутиловый уксусной кислоты. Технические условия

ГОСТ 26312.1-84 Крупа. Правила приемки и методы отбора проб ГОСТ 27668-88 Мука и отруби. Приемка и методы отбора проб

Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю «Национальные стандарты*, который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты» за текущий год Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку

3    Сущность метода

Метод основан на экстракции микотоксинов из анализируемой пробы, идентификации и количественном определении их по площадям пиков ион-продуктов с помощью градуировочной характеристики методом ВЭЖХ-МС/МС в режиме мониторинга выбранных реакций (МРМ).

4    Требования безопасности и условия выполнения измерений

4.1    Применяемые в работе реактивы относятся к веществам 1-го и 2-го класса опасности по ГОСТ 12.1.007, при работе с ними необходимо соблюдать требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005.

4.2    Помещения, в которых проводят анализ и подготовку проб, должны быть оборудованы приточно-вытяжной вентиляцией.

4.3    Приготовление градуировочных растворов проводят в вытяжном шкафу

4.4    При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа соблюдают правила по электробезопасности по ГОСТ 12.1.019 и правила безопасной эксплуатации сосудов, работающих под давлением по ГОСТ 12.2.085.

4.5    Применяемые средства измерений должны иметь свидетельства о поверке, вспомогательные устройства — свидетельства об аттестации, оформленные в соответствии с требованиями национального законодательства в области обеспечения единства измерений.

4.6    К выполнению измерений методом ВЭЖХ-МС/МС допускаются лица, владеющие техникой ВЭЖХ-МС/МС и изучившие инструкции по эксплуатации применяемой аппаратуры.

4.7    При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

-    температура окружающего воздуха...................от    15*С до 30 °С;

-    относительная влажность воздуха.....................от    20    %    до    80    %.

5    Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, посуда и реактивы

5.1 Для измерения содержания микотоксинов применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и посуду:

-    весы неавтоматического действия высокого класса точности по ГОСТ OIML R 76-1 с максимальной нагрузкой не более 150 г и пределами допускаемой погрешности не более ± 0.001 г;

-    весы высокого (II) класса точности с пределами допускаемой абсолютной погрешности не более ± 0,02 мг;

-    масс-спектрометр с квадрупольным анализатором с диапазоном измерений от 50 до 800 атомных единиц массы (а. е. м), массовым разрешением не менее 1.0 а. е. м на полувысоте пика, с погрешностью измерений массы не более ± 0.5 а. е. м. с режимом получения и анализа фрагментных ионов (режим МС/МС);

-    систему высокоэффективную жидкостную хроматографическую, состоящую из градиентного насоса. системы фильтрования и дегазации подвижных фаз. термостата хроматографической колонки, обеспечивающего температуру нагрева до (40 ± 1) ^вС; ¹

ГОСТ 34140-2017

-колонку хроматографическую, заполненную обращенно-фазовым сорбентом С18 с размером частиц не более 5 мкм. длиной 150 мм и внутренним диаметром 2.1 мм;

-    компьютер с установленным программным обеспечением для управления масс-спектрометром и обработки результатов измерений;

-    баню ультразвуковую с рабочей частотой не менее 20 Гц и объемом не менее 1 дм^{2 3};

-    камеру лабораторную морозильную с цифровым контроллером температуры и рабочим диапазоном температур от минус 15 °С до минус 25 °С;

-    мельницу лабораторную;

-    сито лабораторное металлическое с ячейкой 0.5 мм;

-    систему получения деионизированной воды высокой чистоты с удельным сопротивлением 18 МОм см;

-    холодильник бытовой с цифровым контроллером температуры и рабочим диапазоном температур от 2 °С до 8 °С;

-    центрифугу лабораторную с центробежным ускорением не менее 3500 g и с адаптерами для пробирок вместимостью 50 см³;

-    центрифугу лабораторную с центробежным ускорением не менее 15 000 g и с адаптерами для микроцентрифужных пробирок;

-    шейкер вибрационный для пробирок орбитального типа движения с амплитудой встряхивания 3 мм и диапазоном скоростей от 150 до 2000 об/мин;

-    шейкер качающийся с частотой встряхивания от 2 до 50 об/мин;

-    шкаф сушильный с максимальной температурой нагрева не менее 200 °С и погрешностью поддержания заданной температуры не более ± 5 °С;

•    пробы, не содержащие микотоксинов, подготовленные и проанализированные ранее в соответствии с требованиями разделов 7 и 8. в зависимости от типа исследуемой матрицы («чистые» пробы)*;

-    фильтры нейлоновые мембранные с размером диаметра пор не более 0,45 мкм;

-    виалы (флаконы) полипропиленовые или пробирки полипропиленовые вместимостью 50 см³ с завинчивающимися крышками;

-    колбы 2—10—1 с пришлифованными пробками по ГОСТ 1770;

-    колбы 1—100(1000)—2 по ГОСТ 1770;

-    пипетки одноканальные переменной вместимости 20—200 мм³ с пределом допускаемого относительного отклонения среднеарифметического значения фактического объема дозы от номинального не более ±1.5%;

-    пипетки одноканальные переменной вместимости 100—1000 мм³ с пределом допускаемого относительного отклонения среднеарифметического значения фактического объема дозы от номинального не более ± 1 %;

-    пробирки микроцентрифужные полипропиленовые вместимостью 1.5 см³;

-    цилиндры 1—10(100.1000)—1 по ГОСТ 1770.

5.2    При определении содержания микотоксинов применяют следующие реактивы:

-    ацетат аммония с массовой долей основного вещества не менее 99.0 %;

-    ацетон по ГОСТ 2603;

-    ацетонитрил для ВЭЖХ-МС с массовой долей основного вещества не менее 99.9 %;

-    воду деионизированную для ВЭЖХ. полученную с использованием системы производства уль-трачистой воды из дистиллированной воды по ГОСТ 6709;

-    кислоту уксусную по ГОСТ 61;

-    метанол по ГОСТ 6995, х. ч;

-    эфир этиловый уксусной кислоты (этилацетат) по ГОСТ 22300. ч. д. а.

5.3    При измерении содержания микотоксинов в качестве образцов сравнения для приготовления исходных растворов применяют соединения с массовой долей основного вещества не менее 97.0 %;

-    3-ацетил-дезоксиниваленол;

-    15-ацетил-дезоксиниваленол;

-    агроклавин;

-    альтернариол;

-    альтернариола-метиловый эфир;

ГОСТ 34140-2017

-    афлатоксин В,:

-    афлатоксин В₂:

-    афлатоксин G,;

-    афлатоксин G₂;

•    боверицин;

•    вортманнин;

-    глиотоксин;

-    гризеофульвин;

-    дезоксиниваленол;

-    дезоксиниваленол-3-глюкозид;

-    деэпоксидезоксиниваленол;

-    диацетоксисцирленол:

•зеараленон:

-    койевая кислота;

-    мелеагрин;

-    микофеноловую кислоту;

-    монилиформин;

-    НТ-2 токсин;

-    неосоланиол;

-ниваленол;

-    охратоксин А;

•    охратоксин В;

-    паксиллин;

-    патулин;

•    пенициллиновая кислота;

-    рокфортин С;

-    роридин А;

-    стахиботрилактам;

-    стеригматоцистин;

-    Т-2 тетраол;

-    Т-2 токсин;

-    Т-2 триол;

-    тентоксин;

-    тенуазоновая кислота;

-    фузаренон X;

-    фузариевая кислота;

-    фумагиллин;

-    фумонизин В,;

-    фумонизин В₂;

•    фумонизин В₃;

•    циклопиазоновая кислота;

-    цитреовиридин;

•    цитринин;

-    эргокорнин.

5    4 Допускается применение других средств измерений и посуды, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам и обеспечивающих необходимую точность измерения, а также вспомогательных устройств, реактивов и материалов по качеству не ниже вышеуказанных.

6    Подготовка к проведению измерений

6.1    Подготовка лабораторной посуды и реактивов

6.1.1    Мойку и сушку посуды проводят в отдельном помещении, оборудованном приточно-вытяжной вентиляцией. Для сушки лабораторной посуды и подготовки реактивов необходимо использовать отдельные сушильные шкафы.

4

ГОСТ 34140-2017

6.1.2    Стеклянную посуду подвергают стандартной процедуре очистки лабораторной посуды с последующей последовательной промывкой органическими растворителями: этилацетатом (однократно), ацетоном (дважды).

6.1.3    Процедуру промывки органическими растворителями следует проводить в вытяжном шкафу. Рекомендуется на стадиях промывки использовать ультразвуковую баню. Окончательную сушку посуды проводят в сушильном шкафу, установленном в вытяжном шкафу, при температуре от 105 °С до 110 °С.

6.1    4 Каждую новую партию реактивов проверяют на отсутствие контаминации анализируемыми соединениями путем проведения холостого опыта в соответствии с процедурой анализа.

6.2    Приготовление растворов

6.2.1    Приготовление растворов подвижных фаз А и Б

6 2.1.1 Подвижная фаза А

Для приготовления подвижной фазы А в мерную колбу вместимостью 1000 см³ приливают 890 см³ деионизированной воды, добавляют 100 см³ метанола. 10 см³ уксусной кислоты и 0.2 г ацетата аммония. перемешивают.

6.2.1.2    Подвижная фаза Б

Для приготовления подвижной фазы Б в мерную колбу вместимостью 1000 см³ приливают 970 см³ метанола, добавляют 20 см³ деионизированной воды, 10 см³ уксусной кислоты и 0.2 г ацетата аммония, перемешивают.

Срок хранения растворов при комнатной температуре — не более 3 мес.

6.2.2    Приготовление раствора для экстракции

В мерную колбу вместимостью 1000 см³ вносят 790 см³ ацетонитрила. 200 см³ деионизированной воды и 10 см³ уксусной кислоты, перемешивают.

Срок хранения раствора при комнатной температуре — не более 3 мес.

6.3 Приготовление градуировочных растворов

Для приготовления исходных растворов С₀ с массовой концентрацией 1000 мкг/см³ или С₀‘ с массовой концентрацией 100 мкг/см³ для каждого микотоксина рассчитывают необходимую массу нто вещества. мг, с точностью до первого десятичного знака, с учетом содержания основного вещества по формуле

^=-^-¹⁰⁰ 0)

*1

где С₀ — концентрация исходного раствора, мкг/см³;

V — объем мерной колбы, см³;

Р, — массовая доля основного вещества. %.

6.3.1    Приготовление исходных растворов С₀ фумонизина B_1t фумонизина В₂, фумонизи-на В₃, фузариевой кислоты, койевой кислоты

Для приготовления исходных растворов С₀ с массовой концентрацией 1000 мкг/см³ в мерные колбы вместимостью 10 см³ вносят по отдельности рассчитанные массы фумонизина В,, фумонизина В₂. фумонизина В₃, фузариевой кислоты, койевой кислоты. Добавляют 8 см³ ацетонитрила, перемешивают. помещают в ультразвуковую баню на 15 мин и доводят объем до метки ацетонитрилом.

6.3.2    Приготовление исходных растворов

Для приготовления исходных растворов С'₀ с массовой концентрацией 100 мкг/см³ в мерные колбы вместимостью 10 см³ вносят по отдельности рассчитанные массы микотоксинов, перечисленных в

5.3 (за исключением микотоксинов, указанных в 6.3.1). Добавляют 8 см³ ацетонитрила, перемешивают, помещают в ультразвуковую баню на 15 мин и доводят объем до метки ацетонитрилом.

Срок хранения растворов С₀ и Cq при температуре от минус 15 *С до минус 25 °С — не более 12 мес.

Перед применением растворы выдерживают при комнатной температуре в темном месте не менее 30 мин.

6.3.3    Приготовление рабочего раствора микотоксинов С₁

Для приготовления рабочего раствора С, в мерную колбу вместимостью 100 см³ вносят исходные растворы С₀ и Cq в объемах, указанных в таблице 1, и доводят до метки ацетонитрилом.

5

Таблица 1— Вносимый объем исходных растворов С0 и Cq

Микотоксин Массовая концентрация микотоксина в исходном растворе С0 или С'0, мкг/см3 Вносимый объем исходных растворов Cq или Сд. см* Массовая концентрация микотоксина в рабочем растворе С1# мкг/см3 З-Ацетил-дезоксиниваленол 100 100 1.0 15-Ацетил-дезоксиниваленол 100 100 1.0 Агроклавин 100 100 1.0 Апьтернариол 100 100 1.0 Альтернариола-метиловый эфир 100 100 1.0 Афлатоксин В1 100 10 0.1 Афлатоксин В2 100 10 0.1 Афлатоксин G, 100 10 0.1 Афлатоксин G2 100 10 0.1 Боверицин 100 500 5.0 Вортманнин 100 100 1.0 Глиотоксин 100 100 1.0 Гризеофульвин 100 100 1.0 Дезоксиниваленол 100 500 5.0 Дезоксиниваленол-З-глкжозид 100 500 5.0 Деэпокси-дезоксиниваленол 100 100 1.0 Диацетоксисцирленол 100 100 1.0 Зеараленон 100 200 2.0 Койевая кислота 1000 100 10,0 Мелеагрин 100 100 1.0 Микофеноловая кислота 100 100 1.0 Монилиформин 100 100 1.0 НТ-2 токсин 100 100 1.0 Неосоланиол 100 100 1.0 Ниваленол 100 500 5.0 Охратоксин А 100 10 0.1 Охратоксин В 100 10 0.1 Паксиллин 100 10 0.1 Патулин 100 100 1.0 Пенициллиновая кислота 100 100 1.0 Рокфортин С 100 100 1.0 Роридин А 100 100 1.0 Стахиботрилактам 100 100 1.0 Стеригматоцисти н 100 100 1.0

6

ГОСТ 34140-2017

Окончание таблицы 1

Микотоксин Массовая концентрация микотоксина в исходном растворе С0 или Cj>, мкг/см3 Вносимый объем исходных растворов С0или С^. см3 Массовая концентрация микотоксина в рабочем растворе С,, мкг/см3 Т-2 тетраол 100 100 1.0 Т-2 токсин 100 100 1.0 Т-2 триол 100 100 1.0 Тентоксин 100 100 1.0 Тенуазоноеая кислота 100 100 1.0 Фузаренон X 100 500 5.0 Фуэариевая кислота 1000 100 10.0 Фумагиллин 100 100 1.0 Фумонизин В, 1000 100 ю.о Фумонизин В2 1000 100 10.0 Фумонизин В3 1000 100 ю.о Циклопиазоновая кислота 100 100 1.0 Цитреовиридин 100 100 1.0 Цитринин 100 500 5.0 Эргокорнин 100 100 1.0

6.3.4    Приготовление рабочего раствора микотоксинов С₂

В мерную колбу вместимостью 10 см³ вносят 1.0 см³ рабочего раствора С,, доводят до метки ацетонитрилом, перемешивают.

Растворы С, и С₂ хранят при температуре от 2 °С до 8 °С не более 6 мес.

6.3.5    Приготовление матричных градуировочных растворов микотоксинов G_t—G₆ Матричные градуировочные растворы G,—G₆ готовят в микроцентрифужных пробирках путем

обработки экстрактов «чистых» проб согласно разделу 7. в которые вносят рабочие растворы определяемых микотоксинов С, и С₂ в соответствии с таблицей 2.

Таблица 2 — Приготовление матричных градуировочных растворов G,—G6

Матричный градуировочный раствор Вносимый объем подвижной фазы А. мм3 рабочего раствора С,, мм3 рабочего раствора С2. мм3 экстракта «чистой» пробы, мм3 <5, 490 — 10 500 о2 480 — 20 500 400 — 100 500 480 20 — 500 <з5 400 100 — 500 <зб 300 200 — 500

Массовые концентрации микотоксинов в матричных градуировочных растворах приведены в таблице 3.

1

2

*    Допускается в «чистых» пробах присутствие микотоксинов на уровне не более 0.2 % от нижнего градуировочного уровня для каждого микотоксина

3