МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

по определению микроколичеств пестицидов в продуктах питания, кормах и внешней среде

Сборник № 25

Москва 1997 г.

Министерство сельского хозяйства и продовольствия Российской Федерации

Государственная комиссия по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками

ТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ МИКРОКОЛИЧЕСТВ ПЕСТИЦИДОВ В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ, КОРМАХ И ВНЕШНЕЙ СРЕДЕ

Сборник № 25

Москва

Центр научно-технической информации, пропаганды и рекламы 1997г.

Алфавитный указатель

стр.

1. 2-Амино-4,6-днмстил-1.3-пиримилнн - 9 2. 2-Амнно-4-лиметнламнно-6-хлор~1.3.5-триазин - 16.21 3. 2-Метил-4-лнметнламннометил-бензнмнлазол-5-ол-днгилрохлорнл -5 4. 2-Метокснкарбонкл-М-(4.б-лнмсткл-1.3-пирнмнлнн-2ил>-ямннокарбонкл- бензо л сульфамид - 45 5. 2-Метокснкар6оннл-М-(4.6-лнметнл-1.3-пнрнмндн11-2ил')-ами11окарбоннл- бензолсульфамнд калиевая соль - 45 6. 5-оксн-КЗ-бензоксатнолон -2 - 65 7. N - Г4-метокси-6-метнл~1.3,5-триазин-2ил)-Г'Г -42.5-днметилфенил)сульФо- ннлмочевнна - 70 8. 1Ч-окснд-2,6-лутидина и янтарной кислоты комплекс - 36.40 9. Амбиол -5 10. Аминопиримнднн -9 И. Аминофумаровой кислоты лиметнловый эфир -27 12. Анкор-5 -45 13. Анкор-85 -45 14. Грамекс.метаболит и полупродукт синтеза - 16,21 15. Лигнлроаспарагиновой кислоты лнмстиловый эфир -27 16. Днннконазол - 33 17.1-Карбамоил-3(5)-метилпнразол -51 18. Каскад -73 19. Ленок - 80.87 20. Люцис - 36.40 21- ММП -51 22. Номолт -61 23. Павстим -54 24. Препарат-1 - 80.87 25. Соналан -97 26. Спайк -57 27. Суми-8 -33 28. Тсбутиурон -57 29. Тефлубензурон -61 30. Тиолон -65 31. Утнур -70 32. Флуфеноксурон -73 33. Фосфитов смесь -77 34. Фумар - 27 35. Хардин - 80.87 36. Хлорсульфурона калиевая соль - 80.87 37. Экостим -94 38. Эталфлуралнн -97 39. Эфаль-М.промежуточные продукты синтеза -77

106

Государственная комиссия по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками

Редакционная коллегия:

Калинин В.Л. -к.с.н., профессор, зав.кафедры ТСХА; Пушкина Г.П. - к.б.н., Российский институт лекарственных культур; Борисов Г.С.-зав. KTJI РРСТАЗР; Федорова Н.Е.- к.х.н., МНИИГ им.Эрисмана.

Настоящие методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхозпрода РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов в продуктах питания, кормах и объектах окружающей среды.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.

Ответственный за выпуск - Орехов Д.А., председатель Госхимкомиссии

тел. 207-63-90

Сборник подготовлен к изданию Российской республиканской станцией защиты растений Департамента химизации и защиты растений Минсельхозпрода РФ.

г.Раменское Московской обл., ул.Нефтегазосъемки 11/41 тел.(246) 3-09-52

СОДЕРЖАНИЕ:

1.    Временные методические указания по определению остаточных количеств 2-метил-4-димстиламинометил- бензимидазол- 5 - ол- дигидрохлорида в воде, почве, зерне и зеленой массе кукурузы методом тонкослойной хроматографии.

29.07.91 г. № 6264-91     стр.5

2.    Методические указания по измерению концентраций 2-амино-4,6 диметил-1,3-пиримидина в воде методом жидкостной хроматографии.

29.07.91 г. №6152-91     9

3.    Временные методические указания по определению 2-амино-4-диметиламино-6-хлор -

1.3.5- триазина в воде хроматографическими методами.

29.07.91    г. №6161-91     16

4.    Временные методические указания по определению 2-амино-4-диметиламино-6- хлор-

1.3.5- триазина в воздухе хроматографическими методами.

29.07.91    г. №6159-91     21

5.    Временные методические указания по определению остаточных количеств диметилового эфира аминофумаровой кислоты в воде, почве, яблоках, виноградном соке, эфирных маслах, рисе, картофеле методом газовой хроматографии.

29.07.91    г. № 6230-91     27

6.    Методические указания по измерению концентрации диниконазола в воздухе рабочей зоны методом газожидкостной хроматографии.

29.07.91    г. № 6156-91     33

7.    Методические указания по определению остаточных количеств N-okhch-2,6 -лутидина в воде, почве, зеленой массе люцерны методом тонкослойной хроматографии.

29.07.91    г.    №6179-91     36

8.    Временные методические указания по измерению концентраций М-окиси-2,6-лутидина в воздухе рабочей зоны методами газожидкостной и тонкослойной хроматографии.

29.07.91    г.    № 6178-91     40

9.    Методические указания по измерению концентраций 2-метоксикарбонил-М-(4,6 -диметил-1,3-пиримидин-2-ил)-аминокарбонил-бензолсульфамида и его калиевой соли в воздухе рабочей зоны методом жидкостной хроматографии.

29.07.91    г.    №6171-91     45

10.    Временные методические указания по измерению концентраций карбамоил- метил-пиразола в воздухе рабочей зоны методом тонкослойной хроматографии.

29.07.91    г.    № 6236-91     51

11.    Методические указания по измерению концентраций павстима в воздухе рабочей зоны колориметрическим методом.

29.07.91    г.    № 6277-91     54

12.    Методические указания по измерению концентрации тебутиурона в воздухе рабочей зоны методом газожидкостной хроматографии.

29.07.91    г.    №6199-91     57

13. Временные методические указания по измерению концентраций тефлубензурона в воздухе рабочей зоны хроматографическими методами.

29.07.91 г. №6234-91

14.    Временные методические указания по измерению концентраций тиолона в воздухе рабочей зоны методами тонкослойной хроматографии и спектрофотометрии.

29.07.91    г.    №6168-91     65

15.    Методические указания по измерению концентраций М-(4-метокси-б-метил-1,3,5-триазин^-шО-Г'Г -(2,5-диметил фенил) сульфонилмочевина в воздухе рабочей зоны методом тонкослойной хроматографии.

29.07.91    г.    № 6240-91     70

16.    Временные методические указания по измерению концентраций флуфеноксурона в воздухе рабочей зоны хроматографическими методами.

29.07.91    г.    № 6235-91     73

17.    Методические указания по измерению концентраций смеси фосфитов (промежуточные продукты синтеза препарата эфаль-М) в воздухе рабочей зоны фотометрическим методом.

29.07.91    г.    №6266-91     77

соли в воде методом газожидкостной хроматографии.

29.07.91    г. № 6167-91     80

19.    Методические указания по измерению концентраций хлорсульфурона и его калиевой соли в воздухе рабочей зоны методом газожидкостной хроматографии.

29.07.91    г. №6170-91     87

20.    Методические указания по измерению концентраций экостима в воздухе рабочей зоны фотометрическим методом.

29.07.91    г. № 6276-91    ............................................ 94

21.    Методические указания по определению остаточных количеств эталфлуралина в семенах хлопчатника и хлопковом масле методом газожидкостной хроматографии.

29.07.91    г. № 6244-91    ............................................ 97

Алфавитный указатель.     106

4

Утверждено Министерством здравоохранения СССР “29” июля 1991 г. №6161-91

ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ 2-АМИНО-4-ДИМЕТИЛАМИНО-6-ХЛОР-1,3,5,-ТРИАЗИНА В ВОДЕ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИМИ МЕТОДАМИ.

1. Краткая характеристика вещества.

CsHsNsCl М.м. 173,61

2-амино-4-диметиламино-6-хлор-1,3,5-триазин (АДХТ) -метаболит и полупродукт синтеза грамекса.Белое кристаллическое вещество без запаха с Тпл 210-211° С. Растворимость в воде - 0,049% (25° Q, ацетоне - 1,94%, хлороформе - 0,34%.

ПДК в воде водоемов - 0,02 мг/дм ³.

2. Методика определения 2-амино-4-диметиламино-6-хлор-1,3,5-триазина в воде.

2.1.    Основные положения.

2.1.1.    Принцип метода.

Метод основан на экстракции АДХТ из воды хлороформом с последующим определением газожидкостной (ГЖХ) и тонкослойной (ТСХ) хроматографией. Минимально детектируемое количество с помощью пламенно-ионизационного детектора 0,01 мкг, минимально обнаруживаемое количество на тонкослойных хроматограммах 1 мкг. Предел обнаружения АДХТ в воде 0,008 мг/л (ТСХ) и 0,006 мг/л (ГЖХ).

2.1.2.    Избирательность метода.

Определению АДХТ не мешают другие триазины - полупродукты производства пестицидов - производных сульфанилмочевин.

Разработчики: Чмиль В.Д., Бродская Н.М., Киреева Л.В., Шутова Т.В., УкрНИИГИНТОКС, г. Киев.

2.1.3. Метрологическая характеристика метода приведена в таблице.

Таблица

Метод определения Предел обнаружения, мг/л Процент определения, % Средняя квадратичн. ошибка определения, мкг Доверительный интервал (Р—0,95; п=10) ГЖХ 0,006 65 ±1,1 +0,8 тех 0,008 72 +0,44 ±0,3

2.2.    Реактивы и растворы.

Ацетон, чда, ТУ 6-08-3513-75.

Бензол, чда, ГОСТ 5955-75.

Натрий сернокислый б/в, ч, ГОСТ 4106-76.

Этиловый эфир уксусной кислоты, чда, ГОСТ 22300-76.

Серебро азотнокислое, чда, ГОСТ 1277-75.

Бромфеноловый синий, чда, ТУ 6-09-37-9-83.

Лимонная кислота, осч, ТУ 6-09-584-75.

Хлороформ, хч, ТУ 6-09-4263-76.

Калий йодистый, чда, ГОСТ 4232-74.

Крахмал растворимый, чда, ГОСТ 10163-76.

Дистиллированная вода, ТУ 6-09-2502-77.

Калий марганцевокислый, чда, ГОСТ 20490-75, 3%-ный водный раствор. Хлористоводородная кислота, хч, ГОСТ 18290-72, 12%-ный водный раствор.

Кальций сернокислый, чда, ГОСТ 3210-66.

Кальций хлористый, ч, ГОСТ 4460-77.

Силикагель КСК №2, ГОСТ 3956-76, ТУ 6-09-2523-72.

Силикагель ЛС 5/40 для тонкослойной хроматографии с 13% гипса (Хемапол, ЧССР). Пластинки для тонкослойной хроматографии “Силуфол” (Хемапол, ЧССР). Гидроксид натрия, хч, ГОСТ 4328-77.

Азот особой чистоты, ГОСТ 9293-74.

Хроматон N-AW,0,20-0,25 мм с 5% ХЕ-60.

Хромосорб W-HP, 80/100 меш с 3% OV-17.

2.3.    Приборы и посуда.

Газовый хроматограф с пламенно-ионизационным детектором (Цвет-106 и т.п.). Мерные колбы на 25 и 100 мл, ГОСТ 1770-74.

Аппарат для встряхивания, ТУ 69-1-081-73.

Водяная баня, ТУ 46-22-60375.

Электроплитка, ТУ 92-275-76.

Стеклянные пластинки, 15 х 15 см.

Сито капроновое, 100/120 меш.

Пульверизатор стеклянный для обработки пластинок.

Камера для обработки пластинок, ТУ 10565-63,

Эксикатор, ГОСТ 6371-73.

Сушильный шкаф, ТУ 69-1-1411-76.

Делительная воронка на 500 мл, ГОСТ 100054-75.

Микрошприц емкостью 10 мкл, МШ-10М.

Фарфоровая ступка.

Ротационный испаритель.

Стеклянный водоструйный вакуумный насос, МРТУ 42961-64.

Весы лабораторные ВЛА-200-М.

Колбы конические, НШ, ГОСТ 1170-74.

17

2.4. Отбор проб.

Отбор проб производится в соответствии с “Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов”, утвержденных Заместителем Главного Государственного санитарного врача СССР 21.08.79г. за № 2051-79.

2.5. Подготовка к определению.

2.5.1.    Приготовление пластинок с тонким слоем силикагеля для ТСХ.

35 г силикагеля КСК, просеянного через сито 100/120 меш, смешивают с 2г сернокислого кальция и 90 мл дистиллированной воды в фарфоровой ступке или на аппарате для встряхивания в течение 15 минут. Около 10 г сорбционной массы наносят на стеклянную пластинку 15 х 15 см и,покачивая, равномерно распределяют по поверхности. Пластинки сушат на воздухе в горизонтальном положении при комнатной температуре 12 часов и затем активируют в сушильном шкафу при 190°С в течение 30 минут. Хранят в эксикаторе над слоем хлористого кальция. При использовании для приготовления пластинок силикагеля ЛС 14 г этого силикагеля смешивают с 38 мл дистилированной воды. На одну пластинку наносят 5-7 г сорбционной массы и далее поступают так, как это описано выше

2.5.2.    Приготовление стандартного раствора.

Стандартный раствор АДХТ в ацетоне с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением 10,0 мг вещества в мерной колбе на 100 мл.

2.5.3.    Приготовление проявляющих реактивов для ТСХ.

Проявляющий реактив №1:

раствор №1 - в мерную колбу на 100 мл. помещают 0,4 г бромфенолового синего и доводят до метки дистилированной водой;

раствор №2 - в мерную колбу на 100 мл. помещают 2г. азотнокислого серебра и доводят до метки дистилированной водой;

пластинку обрабатывают смесью (1:1) растворов №1 и №2 и затем 4%-ным водным раствором лимонной кислоты.

Проявляющие растворы при хранении в плотно закрытых склянках без доступа света годны для применения в течение месяца.

Проявляющий реактив №2:

раствор №1 - в мерную колбу на 25 мл помещают 0,25 г йодистого калия и доводят до метки дистиллированной водой;

раствор №2 - 0,75 г растворимого крахмала заваривают в 25 мл дистиллированной воды и затем охлаждают;

пластинку обрабатывают смесью (1:1) растворов №1 и №2.

Проявляющий реактив готовят перед употреблением.

2.5.4.    Построение градуировочного графика для определения АДХТ методом ГЖХ.

Для построения градуировочного графика в пробы воды (250 мл) вносят 1,5; 2,5; 5,0 и 7,5 мкг АДХТ в виде раствора в ацетоне и далее осуществляют извлечение АДХТ из проб и хроматографирование так, как описано в п.2.6.2. Хроматографирование одной пробы проводят дважды, измеряют на хроматограммах высоты пиков АДХТ и строят график зависимости высоты пика АДХТ от его содержания в воде. Полученные данные обрабатывают по методу наименьших квадратов и получают уравнение калибровочного ['рафика в виде

18

где Н - высота пика АД XT на хроматограммс,мм; х - содержание АД XT в воде, мг/л; А и В -коэффициенты, которые получают при обработке калибровочного графика по методу наименьших квадратов.

2.6. Описание определения.

2.6.1.    Тонкослойная хроматография.

Пробу воды (250 мл) помещают в делительную воронку, доводят pH до 8 с помощью 1М водного раствора гидроксида натрия и трижды экстрагируют хлороформом (3 х 25 мл). Объединенный хлороформный экстракт сушат над безводным сульфатом натрия (5-10 г) в течение 0,5-1 часа при периодическом перемешивании и удаляют растворитель на ротационном испарителе при температуре водяной бани 45° С до объема ~ 1 мл. Остаток количественно наносят на хроматографическую пластинку с тонким слоем силикагеля ( могут быть использованы пластинки, приготовленные в лабораторных условиях и пластинки “Силуфол”). На эту же пластинку наносят стандартные количества (1 и 2 мкг) АДХТ в виде раствора в ацетоне и проводят хроматографирование в системе растворителей этил-ацетат-хлороформ (1:1) в хроматографической камере, насыщенной в течение 2 часов парами подвижных растворителей. Для насыщения стенки камеры обкладывают фильтровальной бумагой, которая пропитывается смесью подвижных растворителей. После окончания процесса хроматографирования пластинку извлекают из камеры и сушат на воздухе в вытяжном шкафу. Для обнаружения АДХТ пластинку обрабатывают смесью №1 и №2 (1:1) и затем 4%-ным водным раствором лимонной кислоты. АДХТ обнаруживается в виде синих пятен на желтом фоне с величиной Rr =0,61+0,05.

Для повышения надежности идентификации АДХТ хроматографирование может быть также проведено в системе растворителей ацеТон-бензол (3:2). Для обнаружения АДХТ пластинку предварительно помещают в эксикатор (камера для хлорирования) на 2 минуты на дно которого наливают смесь (1:1) 3%-ного водного раствора марганцевокислого калия и 12%-ного водного раствора хлористоводородной кислоты (камера насыщается парами хлора через 5-10 минут после помещения в неё растворов марганцевокислого калия и хлористоводородной кислоты). Затем пластинку вынимают из эксикатора, помещают в вытяжной шкаф на 40 минут для удаления паров хлора и обрабатывают проявляющим реактивом №2. АДХТ обнаруживается в виде синих пятен на светло-голубом фоне с величиной Rr =0,82±0,05 (пластинки “Силуфол”).

2.6.2.    Газожидкостная хроматография.

Извлечение АДХТ из пробы воды проводят так, как это описано в п. 2.6.1. Объединенный хлороформный экстракт сушат над безводным сульфатом натрия (5-10 г) в течение 0,5-1 часа при периодическом перемешивании и удаляют растворитель на ротационном испарителе при температуре водяной бани 45° С до объема ~ 0,5 мл. Остаток растворителя удаляют потоком теплого воздуха досуха и сухой остаток количественно переносят ацетоном (~1 мл) в градуированную центрифужную пробирку. Потоком теплого воздуха упаривали содержимое пробирки до 0,2 мл и вводили в хроматограф 2 мкл.

Условия хроматографирования (хроматограф “Цвет-106” с пламенным ионизационным детектором): стеклянная колонка (длина 1 м, внутренний диаметр 3 мм), заполненная хромосорбом W-HP с 3% OV-17; температура термостата колонки и испарителя 150 и 260°

С соответственно; скорость газа-носителя (азот особой чистоты) через колонку 40 мл/мин, шкала электрометра 10 х 10¹² а, скорость диаграммной ленты потенциометра 240 мм/час. Время удерживания АДХТ в этих условиях 6 минут. Для повышения надежности идентификации АДХТ может быть использовано хроматографическое определение на колонке ( длина 2 м, вутренний диаметр 3 мм), заполненной хроматоном N-AW с 5% ХЕ-60. Температура термостата колонки 180° С, остальные условия хроматографирования те же. Время удерживания АДХТ в этом случае 4 минуты 26 сек.

Содержание АДХТ в воде определяют с помощью предварительно построенного калибровочного графика.

2.7. Обработка результатов анализа.

Содержание АД XT в пробах при определении с помощью тонкослойной хроматографии рассчитывают по формуле:

х= 1Q3 . А ,

V. Р

где х - содержание в пробе АДХТ, мг/л; А - количество АД XT в анализируемом объеме пробы, мг; V - объем пробы, мл; Р - процент определения,% (см. Табл.).

Количественную оценку АДХТ на хроматограммах проводят путем сравнения интенсивности окраски и площадей пятен пробы и стандартных растворов или по величине площади пятен по формуле:

A=Ai -А2 -Ai.(Si-S)

S2 - Si

где A,S - количество (мкг) и площадь (мм² ) пятна АДХТ в анализируемой пробе; Ai, А2, Si и Si - количество (мкг) и площадь (мм²) пятен стандартных растворов АДХТ с большим и меньшим содержанием по сравнению с анализируемой пробой.

Величину площади пятен определяют, накладывая на пластинку прозрачную бумагу или кальку; очерчивают контур пятна, переносят его на миллиметровку и подсчитывают число мм² , входящих в контур.

Содержание АДХТ в пробах (X, мг/л) при определении с помощью газожидкостной хроматографии рассчитывают по формуле:

Х=Н - А В

где Н - высота пика АДХТ на хроматограмме анализируемой пробы, мм (среднее значение из двух параллельных определений).

3. Требования безопасности.

Соблюдаются требования безопасности, рекомендуемые при работе в химических лабораториях.

20