ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ САНИТАРНО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОГО НАДЗОРА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
РОССИЙСКИЙ РЕСПУБЛИКАНСКИЙ ИНФОРМАЦИОННО-АНАЛИТИЧЕСКИЙ ЦЕНТР
МЕТОДЫ АНАЛИЗА ЧУЖЕРОДНЫХ ВЕЩЕСТВ В ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ
(Сборник нормативных материалов)
Москва, 1994 г.
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ САНИТАРНО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОГО НАДЗОРА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
РОССИЙСКИЙ РЕСПУБЛИКАНСКИЙ ИНФОРМАЦИОННО-АНАЛИТИЧЕСКИЙ ЦЕНТР
МЕТОДЫ АНАЛИЗА ЧУЖЕРОДНЫХ ВЕЩЕСТВ В ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ
(Сборник нормативных материалов)
Москва, 1994 г.
ВВЕДЕНИЕ
Загрязнение пищевых продуктов токсичными чужеродными веществами является частью глобальной проблемы загрязнения окружающей среды, поэтому в настоящее время очень важным аспектом является определение микропримесей загрязняющих веществ в продуктах питания и снижение их содержания. В последние годы все больший приоритет приобретают исследования по определению таких токсикантов как различные микотоксины (афла-токсины, патулин, зеараленон, вомитоксин, трихотецены и др.), соли тяжелых металлов, нитриты, нитраты, N-нитрозамины и др.
Настоящий сборник включает в себя ранее изданные Методические указания по определению наиболее приоритетных загрязнителей пищевых продуктов, разработанные научно-исследовательскими институтами медицинского профиля и утвержденные Главным санитарно-эпидемиологическим управлением Минздрава СССР и ГКСЭН РФ.
В соответствии с Постановлением Госкомсанэп ид надзора Российской Федерации от 06.02.92 г. № 1 *0 порядке действия на территории Российской Федерации нормативных актов бывшего Союза ССР в области санитарно-эпидемиологического благополучия населения» на всей территории Российской Федерации действуют общесоюзные санитарные правила и нормативные акты впредь до принятия соответствующих нормативных актов Российской Федерации в области санитарно-эпидемиологического благополучия населения.
Сборник предназначен для санитарно-гигиенических лабораторий центров Госсанэпиднадзора, НИИ и учреждений гигиенического профиля, кафедр гигиены питания медицинских институтов и институтов усовершенствования врачей, а также может быть использован лабораториями других организаций, занимающихся исследованиями пищевых продуктов.
Будем признательны за все критические замечания и пожелания, направленные на улучшение данного Сборника или составление аналогичных Сборников по другим разделам исследований пищевых продуктов.
Л. Г. Подунова
МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ АНТИБИОТИКОВ В ПРОДУКТАХ ЖИВОТНОВОДСТВА1
Определение остаточных количеств антибиотиков проводят по ♦Методическим указаниям по определению остаточных количеств антибиотиков в продуктах животноводства1 № 3049-84 от 29.06.84 г. При отсутствии возможностей использовать микробиологический метод можно использовать метод тонкослойной хроматографии.
Определение антибиотиков тетрацнклннового ряда методом тонкослойной хроматографии (качественный анализ)
1. Оборудование
Стеклянный сосуд для тонкослойной хроматографии
Стеклянные пластины размером 9 х 18 см
Пресс для приготовления кашицы из тканей (диаметр пор 1 мм)
Механическая мешалка с тефлоновым пестиком
Пробирки со шлифом
Пипетки разные
Камера для обнаружения тетрациклина на пластинах
Пульверизатор
Сушильный шкаф до 120° С
Стекла часовые (диаметр 8—9 см).
2. Реактивы
Н-бутанол перегнанный
Метанол перегнанный
Раствор лимонной кислоты 10%
Раствор соляной кислоты 0,1 н.
Раствор соляной кислоты 1,0 н.
Растворы соляной кислоты готовят из концентрированной соляной кислоты с маркой чда.
Силикагель с гипсом (ЛС 5/40 ц).
Раствор аммиака 25%.
3. Стандартный раствор тетрациклина
Раствор тетрацикл и на-гидрохлорида готовят из расчета 100 мкг в 1 мл 0,1 н раствора соляной кислоты.
4. Ход определения
4.1. Приготовление пластин с силикагелем. 3,75 г силикагеля с гипсом смешивают в ступке с 10,5 мл дистиллированной воды и быстро наносят на чистую обезжиренную пластину размером 9 х 18 см и помещают на горизонтальную плоскость, выверенную по уровню. Пластин ы оставляют на ночь до полного высушивания, затем их активируют один час при 120°С. После охлаждения на пластины наносят экстракт из тканей и стандартный раствор антибиотиков в разных разведениях (от 0,1 до 3 мкг/0,1 мкл).
5. Экстракция тетрациклина из тканей
0,5 г образца свежей или замороженной ткани помещают на пресс, продавливают, гомогенизируют в механической мешалке, взвешивают по 100 мг и погружают в центрифужную пробирку, куда предварительно добавляют 1,9 мл 0,1 н раствора соляной кислоты. Пробирку помещают в холодильник на один час с периодическим встряхиванием. После этого смесь центрифугируют при 1500 об/мин в течение 30 минут. Экстракт выпаривают на часовом стекле при 37° С. Сухой остаток растворяют в 0,5 мл 0,1 н раствора соляной кислоты. На пластину для хроматографии наносят 0,02 мл. После просушивания нанесенных пятен на воздухе пластины помещают в сосуд с системой Н-бутанол-метанол-10% раствор лимонной кислоты (4:2:4) на 2,5 часа. Затем пластины высушивают на воздухе, опрыскивают из пульверизатора 1 н раствором соляной кислоты, прогревают при температуре 50° С одну минуту и помещают в камеру, насыщенную парами аммиака на пять минут, после чего пластины просматривают в ультрафиолете. Тетрацикли-ны флуоресцируют лимонно-желтым цветом.
143
Необходимым условием при определении антибиотиков методом тонкослойной хроматографии является проведение всех операций п темноте (особенно разгонка в системе, высушивание и выдерживание в парах аммиака).
Чувствительность метода ОД—0,2 мкг/г ткани.
Определение антибиотиков тетрацнклинового ряда флуориметрнческнм методом (количественный анализ)
В основу положен метод Kohn, принцип которого заключается в образовании комплекса из тетрациклинов и барбитурата кальция, флуоресцирующего в ультрафиолете.
1. Оборудование Флюориметр типа ФМ-1
Пресс для приготовления кашицы из тканей (диаметр пор 1 мм) Механическая мешалка с тефлоновым пестиком Центрифуга типа ЦЛР-1 Пробирки со шлифом на 20 мл Пипетки разные (от 0,1 мл до 10 мл).
2. Реактивы
Раствор соляной кислоты ОД н (готовится из концентрированной соляной кислоты марки чда).
Раствор натриятбарбитала 0,9 М
Хлористый кальций ОД М и 0,04 М (готовится из безводного) Этил-ацетат (перегнанный)
Этилендиамииотетраацетат натрия (ЭДТА — натрия) 0,9 М Трихлоруксусная кислота 0,44 н
Раствор однозамещенного фосфата калия (КЩРСЬ) 0,004 М в трихлоруксусной кислоте 1,5 н
Гаствор нитрата свинца РЬ(ГЧОз)2 в 0,06 н растворе натрия ацетата 2,0 М
Раствор иодноватистокислого калия (КЮз) 0,32 М.
3. Стандарт
Раствор тетрациклина-гидрохлорида готовится из расчета 100 мкг в ОД н растворе соляной кислоты (1 мл — 100 мкг, ОД мл — 10 мкг, 0,01 мл — 1 мкг).
4. Ход определения
0,5 г образца свежей или замороженной ткани помещают на пресс, продавливают, гомогенизируют в механической мешалке, взвешивают по 100 мг и погружают в пробирку со шлифом, куда
144
предварительно добавляют 1,9 мл 0,1 н раствора соляной кислоты. Пробирку помещают в холодильник на один час с периодическим встряхиванием. После этого центрифугируют при 1500 об/мин в течение 30 минут. Надосадочную жидкость сливают в центрифужную пробирку объемом 10 мл и добавляют 1 мл смеси 0,004 М раствора однозамещенного фосфата калия в 1,5 н растворе трихло-руксусной кислоты для осаждения белка. Затем центрифугируют 30 минут при 1500 об/мин.
К надосадочной жидкости добавляют 2,0 мл 0,06 н раствор нитрата свинца в 2,0 М растворе натрия-ацетата (для осаждения солей фосфора).
Образцы оставляют стоять 30 минут при комнатной температуре до полного осаждения, затем центрифугируют.
К надосадочной жидкости добавляют 1,0 мл 0,32 М раствора иодноватистокислого калия (для осаждения избытка свинца) и оставляют стоять на 30—60 минут, затем центрифугируют.
Надосадочную жидкость сливают в пробирку со шлифом, содержащую 3,0 мл этил-ацетат 0,9 М ЭДТА — натрия; 3,0 мл 0,9 М натрия-барбитала; 3,0 мл 0,1 М раствора хлористого кальция. Пробирки энергично встряхивают в течение двух минут и оставляют для расслоения (барбитал вначале выпадает в осадок, затем растворяется в фазе этил-ацетата). Измеряют флюоресценцию верхнего слоя.
5.Расчет
Для расчета содержания тетрациклина в опытных образцах первоначально устанавливают показатель флюориметра на отметку 100, используя стандартный раствор тетрациклина.
Для этого берут 0,1 мл стандартного раствора, содержащего 10 мкг тетрациклина, в пробирку со шлифом и доводят до объема 2,5 мл дистиллированной водой. Затем в эту пробирку добавляют последовательно: 2,0 мл 0,44 н раствора трихлоруксусной кислоты;
2.0 мл 0,44 М раствора хлористого кальция; 3,0 мл этил-ацетата и
3.0 мл 0,9 М натрия-барбитала.
Расчет производят следующим образом:
v А*В ,
X “ —— • 10 мкг/г ткани, где:
А — количество тетрациклина стандартного раствора;
В — показание прибора опытной пробирки;
С — показание прибора стандартного раствора;
10 — коэффициент для расчета количества тетрациклина в 1 г ткани.
Чувствительность метода: 0,1—0,2 мкг/100 мг ткани.
10-220
СОДЕРЖАНИЕ
I МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МИКОТОКСИНОВ *
1. Методика определения афлатоксинов в пищевых продуктах методом тех.................................... 3
2. Методика определения афлатоксинов в пищевых продуктах с
помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии ... 11
3. Методика определения афлатоксинов в продуктах животного
происхождения ................................. 19
4. Методика определения содержания патулииа в фруктовых и
овощных соках и пюре............................ 26
5. Методика определения мпкотоксина патулииа в продуктах
переработки плодов и овощей ....................... 31
6. Методика определения зсарпленопл в пищевых продуктах .... 37
7. Методика определения дсзоксинивалспола (вомитокспна) в зерне
и зернопродуктах................................ 41
8. Методика определения дсзоксинниллснола и зсараленона в зерне
и зернопродуктах ............................... 45
9. Методика определения Т-2 токсина в пищевых продуктах и
продовольственном сырье.......................... 53
10. Методика определения охратоксина А в пищевых продуктах ... 57
11. Методики определения мпкотокеппои: Т-2 токсина, зсараленона
(Ф-2) и охратоксина А............................ 63
II. МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУЖЕРОДНЫХ ВЕЩЕСТВ 77
12. Атомно-абсорбционные методы определения токсинных элементов в пищевых продуктах и пищевом сырье.............. 77
13. Методика определения мстил-этилмсркурхлорида в пищевых
продуктах, кулннарно обработанных ................... 93
14. Методика определения содержания общей ртути в пищевых
продуктах методом беспламенной атомной абсорбции....... 97
15. Методика по определению хрома в овощных консервах...... 103
16. Методика определения содержания гистамина в рыбопродуктах
(флуоромстричсский метод)......................... 105
17. Метод выделения, идентификации и количественного определения
гистамина в рыбопродуктах (колориметрический метод)...... ПО
18. Методика определения нитратов и нитритов в молоке и молочных
продуктах..................................... 114
19. Методика определения жиратов и нитритов в плодовоощной
111. МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ СТИМУЛЯТОРОВ РОСТА СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ
20. Методика определения остаточных количеств
Диэтилстильбэстрола в продуктах животноводства и в
консервированной продукции........................ 124
биологических жидкостях .......................... 133
21. Методика определения остаточных количеств
Эстрадиола-17/? в продуктах животноводства ............. 138
22. Методика определения антибиотиков тстрациклинового ряда методом тонкослойной хромато<рафии (качественный анализ) ... 142
23. Методика определения антибиотиков тетрацикл и нового ряда
<]»луоримстричсским методом (количественный анализ) ...... 143
24. Определение летучих N-нитрозаминов в продовольственном сырье
и пищевых продуктах........................ . . . ]4<з
Брагина И. В., Орехова II. Л- — специалисты лаборатории физико-химических методов исследований Российского Республиканского информационно-аналитического центра.
Под редакцией: Подуповой JI. Г. — заместители Главного государственного санитарного врача РФ, заслуженного врача РФ.
Подписано к печати. 21.11.94.
Формат 60 х 88/16. Бумага офсетная. Уел. псч. л. 9,8. Уел. кр.-огг. 9,8. Тираж 1000 экз. Зак. 220.
Изготовлено в Московской типографии № 11 Комитета по печати РФ. 113105, Москва, ул. Нагатинская, 1,
1
— Методические указания по определению остаточных количеств анти
биотиков тетради клинового ряда (хлортетрациклии, окситетрациклин, тетрациклин) в мясных продуктах микробиологическим и химическим методами, утв. М3 СССР 07.04.75 г.
