ГОСУДАРСТВЕННАЯ К МИССИЯ ПО ХИМИЧЕСКИЕ СРЩСТВ/Ч БОРЬБЫ С ВРЕДИТЕЛЯМИ, БСЙЕЗНЯЛИ РАСТЕНИИ И СОРНЙКААЙ ПРИ МСХ СССР

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ МИКРОКОДИЧЕСТВ ПЕСТИЦИДОВ В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ, КОРМАХ И ВНЕШНЕЙ СРЕДЕ

Часть УП

Москве •> ГУ/б г.

ГОСУДАРСТВЕННАЯ КОМИССИЯ ПО ХИМИЧЕСКИМ СРЕДСТВАМ БОРЬБЫ с ВРЕДИТЕЛЯМИ БОЛЕЗНЯМИ РАСТЕНИЙ И СОРНЯКАМИ ПРИ МСХ СССР

Утверждено

Министерством здравоохранения СССР

1975 г.»

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ МИКРОКОЛИЧЕСТ» ПЕСТИЦИДОВ В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ, КОРМАХ И ВНЕШНЕЙ СРЕДЕ

Часть Ун

Данные методики апробированы и рекомендованы в качестве официальных группой экспертов при Госкоинссии по химическим средствам борьбы о вредителям, болезнен* растений и сорняками ври МСд СССР

1976 год

по

Севин плохо растворяется В воде (менее 0,1#),хорошо - в полярных органических растворителях.® щелочной среде гидролизуемся ' образов£либм1-нафтода.Вацускается в виде 50-85# смачивающихся порошков и 5-7,вдуете.

Принцип метода ^х^

а) .Метод определения севпла в тканях животного происхождения основан на экстрагировании севина и его штаболита 1-нафтола из патматериала (органы животных,содержимое желудка и т.д.) бензолом или хлорофорыом,упаривашш последнего током воздуха,переводе сухого остатка в этиловый спнрт»в котором севин,гидролизованный щелочью до 1-нафтола, сочетается с диазобензосульфокислотой с образованием азокраски красного цвета.Чувствительность метода 0,2 мг/кгЛочностъ определения 85-90#.

б) Метод определения севина в моче основан на очистке мочи с помощью уксуснокислого свинца и последующей экстракции препарата из ф^л>трата н-гексаном.Опр* деление севина и продукта его метаболизма I-.. фтода производится в спиртовой среде путем реакции сочетания его с диазотированным диметил-п-февидендааминоы.

Чувствительность метода -0,15-0,20 нг/л или 3 мкг Севана в анализируемой пробе.

х) Н.И.Хаворонков (Всесоюзный ордена Ленина институт экспериментальной ветеринария) ,0.А.Малинин (Украинский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии), утверждено 22 сентября 197: г., #1350-75.

Л1

Реактивы и оборудование

Бензол

Хлороформ

Сулвфаяиловая кислота_гх.ч.

Соляная кислота Углекислый натрий £цкий натрий Спирт этиловый н-Гексан

Свинец уксуснокислый среднвй-20# раствор на дистиллированно! воде (или 20$ раствор основного уксуснокислого свинца на 10# уксусной кислоте).

Уксусная кислота

Натрий сернокислый безводный»^,

10% раствор глицерина на этиловом спирте Калий едкий Нитрит натрия

0/05# раствор дшетил-д-фенилендиамина сернокислого в I У соляной кислоте (раствор сохраняется в холодильнике при 0-5°с в течение 2-3 дней),

Фотоэдектроколориметр (ФЭК-М,ФЭК-56_#другие модели), Выпарйвательные чашкг Хзттеская посуда (разная).

Приготовление диазотированяой сульфаниловой кислоты.

Навеску 4,0 сульфаниловой кислоты растворяют в 60 мд 5# раствора углекислого натрия к прибавляют 2,0 нитрита натрия* Затем смесь охд«*даю? на льду и в дтот раствор медленно- по каплям, вливают 20 мл 20# охлажденной льдом соляной кислоты.А Вышлекй осадок отфьтьтрошвают^тммвают на фильтре 50-100 мл

ш

8талового спирта в высушивают при комнатной температуре на фильтровальной бумаге до воздушно сухого состояния.

Перед постановкой реакции гордится 0,5$ рготвор диазоОенэо-оудьфскислоты в ZOf- растворе едкого натрия.Реактив пригоден в течение одного дня.

Ход определения

а).Определение севина в тканях животных.

Навеску ткани 10,0 измельчают,помещают в банку о притертой пробкой,заливают 10 мл бензола иди хлороформа,перемешивают отехдянвой палочкой и ставят в холодильник (при 4°с) для экстракции Ив менее чем на 12. насоз.ПвМе этого бензол или хлороформ сливают в фарфоровые чашки и в исследуемый материал снова добавляют 10 мд бензола или хлороформа и экстракцию повторяют в течение 3-4 чаоов.Затем экстракта объединяют и испаряют досуха током воздуха.

Сухой остаток растворяют 2-3 мл этилового спирта а сливают в пробирку,после этого фарфоровую чанадг дополнительно ополаскивают несколько раз небольшими порциями спирта о таким расчетом, чтобы общее количество спирта для растворения остатка составляло 10 мл.

К спиртовому раствору исследуемого материала добавляют 0,05 мл диазобензосульфоккслоты в 10$ едкого натрия. Пробирку встряхивают, соде^химое фильтруют    через    бумажный

фильтр в оото-ляют в штативе.

Через 30 минут проб" кодорикетрируют на фоюэлектроколориметре м кюветах о рогетояни^м мал 7 рабочими гранями S мм при длине волны 490 нм (зеленый светофильтр).В качестве контрольной жидкости берчт зтмовый опарт.

из

Расчет суммарного количества севина и 1-нафтола проводится по калибровочному графику»построение которого ведется следующим образом;готовятся стандартные растворы севина в этиловом спирте с концентрацией от 0,1 до 20 мкг/мл объемом по 10 мл каждый*

В стандартные растворы добавляют 0,05 мл 0,5$ диазобензосулъфокис-доты в 10$ растворе едкого натра и через 30 минут колориметриру-ют в кюветах с расстоянием рабочих граней 5 мм при длине волны 490 нм.

В качестве контроля используют этиловый спирт. На каждую конценТ* рацию делают не менее 3-х изменений.Значение оптической плотности откладывают на оси X, концентрацию на оси У. Поскольку для определения севина и 1-нафтола всегда берется 10,0 ткани,а для колориметрии 10 мл спиртового экстракта, значения ьгт/т по графику соответствуют значениям мг севина и нафтола на 1 кг ткани.

Это исключает дополнительные пересчеты.

б)«Определение севина в мочв.

Кислую мочу разводят 0,25 л' укрусной кислотой из расчета 1:1.Шелочную мочу разводят 0,5,/ уксусной кислотой из расчета 1:1 (или 1:2 до четко выраженной тогтай реакция).Дяя очистки от балластных веществ к разведенной моче прибавляют раствор уксуснокислого свинца,из расчета I мл 20$ раствора ва каждые 10 мл разведенной мочи. После этого moHj фильтруют через бумажный фильтр. 2,2 мл фильтрата при этом будут соответствовать I мл не-разведенной мочи взятой для исследований.

Фильтрат,в количестве эквивалентном 1C яда 2Q мл нерааведенной мочи(Переносят в делительную воронку емкостью ICU-25Q мд н ^ч">йздн экстрагирует н-гексаном *используя дра эаом каждый раз по 2U-30 ш экс трате нта .Экс трат т t объединяют и осушют путем добавление I-& v безводного сернокислого ндтрня.После этого*

да

н-гексановый экстракт сливают в выпаривателъную чашку,а оставшийся осадок дв-ждв.промывают н-гексаном, который смывают в ту же выпаривательную чашку.

Шпаривание экстрагента (в-гексаяа) производят током теплого воздуха.Когда в чашке остается 5-IP мл экстракта,к нему добавляют 0,2 мл 10$ раствора глицерина в этиловом спирте.Оставшийся н-гексан осторожно выпаривают,продувая над чашкой слабую струю теплого воздуха.

После выпаривания я-гексана в чашку добавляют 3,0 мл 6С$ этилового спирта и переносят раствор в колориметрическую пробирку. Чашку второй раз промывают 2,0 мл 60$ этилового спирта и сливают его в тух же колориметрическую пробирку .К раствору в колориметрических пробирках (смыв 5 ил 60$ этилового спирта) добавляют по I мл 10$ раствора едкого калия я охлаждают пробы до 0-5°С.

К охлажденнному раствору в каждую колориметрическую пробирку добавляют по I мд диазореактява.

Диазореактчв готовится перед употреблением путем смешивания предварительно охлажденных до 0-5° с растворов:0,05$ раствора диметкд-п-фенилендиамина сернокислого в I У соляной кислоте я 2$ раствора нитрита натрия из расчета 1:1.

Через 3-5минут после добавления диазореактива ь каждую про-бирку добавляют еще по 5,0 ш 60$ этилового спирта и . пробы помещают в холодильник ыа 30-60 мину- ври 0-5°С.Кодорнметрию проводят против контроля на неспецифический цвет реактивов ( 60$ этиловый спирт,едкий калий ж джазореактив в тех же соотношениях к в той же последовательности,что и в опытных пробах,но без севхна) ,прх синем св«тофадьтре,в кюветах с рабочей длиной 20 ни. Окраска устойчивая в течение 6-8 часов (Специфическая с :раска махжновг i).

115

Количественное определение препарата в пробах производится по калибровочному графику,выведенному с внесением стандартных количеств севина в мочу и последующего анализа ее по описанной методике. Предварительно готовится стандартный раствор севина с содержанием 100 мкг препарата в I мл спирта.йэ этого стандартного раствора в пробы мочи (10-20 мд) вь^сят соответственно: 0;2;3; 5;10;20;30 мкг севина.Пробы анализируются по описанной выше схеме. Реакцию ставят 3 раза. Стандартный раствор препарата для э*кх целей готовят каждый раз отдельно.Подученные данные обобщают и до средним величинам строят калибровочный график.Перерасчет содержания севина в мг на I л мочи производят по формуле;

где: Х-содержание препарата в мг на I л мочи A-содержание препарата в пробе в мкг. e-количество мочи в ш взятой для анализа.