Министерство здравоохранения Российской Федерации

ИССЛЕДОВАНИЕ МИКРОФЛОШ В ИНЪЕКЦИОННЫХ РАСТВОРАХ ДО СТЕРИЛИЗАЦИИ

(Методические указания) л

2.

ВВЕДЕНИЕ. Причиной пирогенности дистиллированной воды, предназначенной для изготовления инъекционных растворов, а также самих инъекционных растворов является контаминация их микроорганизмами и продуктами распада. Стерилизация освобождает растворы от наличия жизнеспособных микроорганизмов, но в растворах остаются мертвые клетки и продукты их распада, обладающие пирогенными свойствами. Попадая с различными лекарственными веществами, вводимыми в организм больного человека, пирогены могут вызывать осложнения в виде пирогенных реакций.

У человека различают три степени пирогенной реакции: легкую, среднюю и тяжелую, каждая из которых характеризуется определенными симптомами. Тяжелой степени пирогенной реакции соответствует сильный озноб,рвота, одышка, температура при этом достигает 40°С. Симтомы реакции носят затяжной характер и прекращаются лишь через сутки. Возможен летальный исход после введения пирогенных лекарственных средств, вызвавших тяжелую реакцию у больных.

При внутривенном введении бактериальные пирогены обладают значительно большей активностью, чем при подкожном или внутримышечном введении. В связи с этим особенно опасны инфузионные растворы, загрязненные бактериальными пирогенами, так как они вводятся больному человеку внутривенно в больших обьемах.

В нашей стране подавляющее большинство (в настоящее времр около 96$ от общего количества) инфузионных растворов изготовляется в аптеках лечебно-профилактических учреждений. Испытай^ на пирогенность, предусмотренное ГФ-XI, эти растворы не прохсэд^т. Поэтому в методические указания в первую очередь вводится мею^-ка обнаружения и нормы содержания пирогенобразующих микроорганизмов до стерилизации для инфузионных растворов аптечного

товления.

3.

ОПИСАНИЕ МЕТОДА:

ФОРМУЛА МЕТОДА. Впервые предлагается проводить оценку пи-рогенности ряда растворов для инъекций и дистиллированной воды, предназначенной для их изготовления, по количеству присутствующих в них до стерилизации живых грамотрицательных (пирогенобра-зутощих) микроорганизмов. Идентификацию пирогенобразующих микроорганизмов проводят по реакции образования геля при их взаимодействии с 3% раствором гидроксида калия.

МАТЕРЛАЛЫО-ТЕХНИЧЕСКОЕ ОБЕСПЕЧЕНИЕ МЕТОДА. Испытание лекарст венных препаратов на наличие в них микроорганизмов проводят я асептических условиях согласно требованиям ГФ-XI. Отбор проб исследуемых растворов для испытаний, применяемая питательная среда для выращивания микроорганизмов, условия инкубирования посевов (температура и сроки выдерживания в термостате) также соответствуют требованиям ГФ-XI.

Методика обнаружения и нормы содержания общего количества и пирогенобрэзующих микроорганизмов вводится на растворы для иньекций аптечного изготовления, на которые имеется нормативнотехническая документация в виде методических указаний.

ОПИСАНИЕ МЕТОДА. Бактериологический контроль лекарственных растворов для иньекций (выборочно) и дистиллированной воды, используемой для их изготовленияпроводят не реже двух раз в квартал.

Отбор и приготовление проб. От каждой серии исследуемого раствора отбирают среднюю пробу не менее 50 мл, состоящую из равных разовых проб, взятых минимум из 10 разных флаконов.

4

Методика обнаружения пирогенобразующих микроорганизмов в растворах для иньекций и дистиллированной воде, предназначенной для их изготовления

I мл исследуемого образца, взятого перед стерилизацией, засевают по 0,5 мл на поверхность двух чашек Петри с питательной средой № I (ГФ XI) и термостатируют в течение 5 суток при температуре 30-35°С. На предметное стекло пипеткой наносят капли 3% раствора гидроксида калия, одна капля служит контролем, а в другие петлей вносят каждый вид выросших колоний микроорганизмов и тщательно перемешивают. Если в течение 60 секунд происходит образование желеобразной массы,суспензия тянется за петлей, образуя нити, то исследуемый раствор содержит пирогенобразутощие микроорганизмы. Если образования геля не происходит, раствор остается гомогенным, то в исследуемом растворе отсутствуют пи-рогенобразующис микроорганизмы.

Разьяснение к методике.

Пирогенную реакцию в подавляющем большинстве случаев вызывают грамотрицательные микроорганизмы, в составе клеточной оболочке которых имеются липополисахариды. Грамположительные микроорганизмы, как правиле, не вызывают пирогенную реакцию- их пирогенная активность в 10X0 - 100X0 раз слабее, чем у грамотви-цательных микроорганизмов.

При установлении нормативов предельного содержания микроорганизмов в дистиллированной воде, предназначенной для изготовления инъекционных растворов и растворах для иньекций до стерилизации, была учтена избирательная идентификация пирогенобразующих микроорганизмов.

Нормативы предельно допустимого содержания непатогенных микроорганизмов в дистиллированной воде и растворах для инъекций

Предельно допустимое содержание микроорганизмов в I мл

1.    Дистиллированная вода, используе- пирогенобразующих-5 мал для изготовления инъекционных общее количество 10-15 растворов

2.    Растворы для инъекций до стерилизации не позднее 3 ч*сов после изготовления:

2.1.    глюкозы 5%,10%,25% и 40%    пирогенобразуюцих-10

2.2.    натрия хлорида 0,9%    общее доличество-50

2.3.    натрия гидрокарбоната 4&

2.4.    солевой раствор с глюкозой состава:

калия хлорида 2,0 кальция хлорида 0,4 глюкозы 100,0 воды для инъекций до I л

2.5.    Рингера

2.6.    Рингера-Локка

2.7.    Квартасоль

2.В. Новокаина 0,25%,0,5%.Т%и2%    пиоогенобразующих 30-40

общее количество - 100

Примечание: при внутривенном введении взрослым растворов глюкозы, 0.0% раствора натрия хлорида, 4% раствора натрия гидрокарбоната, солввого раствора с глюкозой, растворов Рингера, Рингера-Локка и Квартасоль в объеме не превышающем 100 мл допустимым является содержание не более 30-40 пирогенобразутощих микроорганизмов в I мл, общее количество не должно превышать 100 в I мл.

6.

При разработке методики оценки пирогенности растворов по количеству присутствующих з них живых грамотсмцатсльных микроорганизмов до стерилизации учитывались следующие факторы:

1.    Ряд лекарственных препаратов влияет на пирогенную активность микроорганизмов. Одни лекарственные вещества способны активизировать действие бактериальных пирогенов» другие, наоборот, значительно ослаблять, поэтому в каждом конкретном случае проводились исследования по изучению пирогенности исследуемых растворов, содержащих гоамотрицательные микроорганизмы.

2.    Кроме живых микроорганизмов, пирогенную реакцию вызывают мертвые микроорганизмы и продукты их распада,содержащие тер-мостабильный липополисахарид. 3 виду чего изучалось влияние выживаемости микроорганизмов и возможного накопления липополисаха-ридов на пирогенность исследуемых растворов.

3. Способность пирогенов утрачивать активность при хранении зависит от среды, в которой они присутствуют, поэтому важное значение имеет изучение изменения пирогенности исследуемых растворов, с о держащих мертвые микроорганизмы.

4.    При установлении предельно допустимого количества пиро-генобразующих микроорганизмов в инфузионных растворах до стерилизации учитывалось, что официальное биологическое испытание на кроликах не гарантирует надежность результатов при контроле на пирогенность инфузионных растворов. Это связано с тем, что положение о том, что при испытании на пирогенность доза препарата на I кг массы кролика должна составлять 1/10 - 1/20 максимальной, применяемой в клинике, не соблюдается. Доза препарата при испытании его на пирогенность на кроликах, считая на I кг массы животного, может быть меньше суточной дозы для человека не более чем в Ю-20 раз. На практике для инфузионных растворов, которые

обычно вводятся людям в больших количествах,дозы для кролика и человека различаются в 200 - 300 раз. При таких больших различиях между дозами для кролика и человека проведение испытания на пиоогенность с использованием указанных доз представляется з значительной степени лишенным смысла. Вышеуказанное было учтено при установлении предельно допустимого содержания пиро-генобоазущих микроорганизмов в ичьекционных растворах до стерилизации. При сравнении предлагаемой методики с результатами биологического испытания на кроликах необходимо иметь в виду, что при наличии в указанных обьектах до стерилизации живых пи-рогенобразующих микроорганизмов в количестве до 50 в I мл пирогенная реакция не наблюдается. При содержании 50 - 100 микроорганизмов в I мл пирогенная реакция у кроликов наблюдается не всегда, однако это содержание уже опасно. При наличии пироген-образующих микроорганизмов более 100 в I мл наблюдается выраженная пирогенная реакция.

Пирогены теряют активность при хранении, поэтому при сравнении двух методов желательно проводить анализ с интервалом 2-3 дня.

ЭФФЕКТИВНОСТЬ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ МЕТОДА. На протяжении многих лет растворы для инъекций аптечного изготовления не испытываются на пиоогенность из-за недоступности для контрольно-аналитических лабораторий дорогостоящего официнального биологического испытания на кроликах. Предлагаемая методика проста в исполнении, доступна, применение ее на практике позволит значительно повысить качество инъекционных растворов изготовляемых в аптеках.

Директор НИМФ доктор фармац.наук,профессор

Зав.лабораторией биологических и фnonnw-химических методов контроля качества лекарственных средств,доктор фармац.нау*;

Ст. научн. с отр.    J>