Ишшстерзхяо нефтяной промышленности
Проязтюлстпопное ордена Ленина я ордена трудового Красного Знаыояя объединение Башнефть
Башкирский гооударотвеиккй н&упно-иссладозательсклй я проектный институт нефтяной поошлплеаности
чЖ'Л |
|
V 0Щ
* ' -V у,^ л.<^ |
МЕТОДИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ БИОРАЗЛАГАЕМОСТИ НЕИ0Н0ГЕННЫ1 ПОВЕРХНОСТНО-АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ ПОД ДЕЙСТВИЕМ ПЛАСТОВОЙ МИКРОФЛОРЫ
РД 39-25-749-82
ШКСТёРСТВО НЕФТЯНОЙ ПРОШШШКНОСТИ
Утверждаю:
Закестьтел^Г Монстра нефтяной промышленности
' '"""В.КЛЗдии
U\\- "//-« 1932 г.
Методика с пределен ия бкора зл&га е кости неионогениых повар я-ностно-активных веществ под действием пластовой микрофлоры
РД 39" 23-7^*9-82
Настоящий документ разработан:
Башкирским государственным научно-исследездтспскич а про ектним институтом н ewmofl. пр о мишл енн ост и ( Б &шк ипиие^&гь)
Директор* ю.нд .техи *иаук,'/ч&Ух*''* т + Н Л'.Кагпрмгно»
• • . Л V, * ч .
Ответственные испслпит^ли:^/^^
7р.х.:
Ст. инженер ........
Инженер
.Ха эи нов Н.ЗЛ(даноЕа 3«Н«Кравчук
■:хлЯи.,>:
Ч A*v 44;\?V\*
Замдиректора Всесоюзного нео.тега^ового научио-исо-
ледов ателье кого института (&ШЬ) » Д-Р те хн «наук *
Замдиректора Кнститу^а//■'* * о//
бИОХИМИИ И ФИЗИОЛОГИИ ':^w‘ ' ’ М,?////
микроорганизмов АН СССР/ •• r/rfrr
чяс/икЪрр. All СССР у*. Л Ql4{i.f М.В.Ив — »• ,
Начальник Технического Управления М1\
оим.начальника Управления по повышению нефтеотдачи пластов
|
К •Н.юайдихов
В«Д«ЦОСКЬИН |
8
В исследуемой пробе через каждые 10 оутох определяются поверхностное натяжение, концентрация ПАВ, концентрация водородных ионов (pH) и окиолительно~восотановителы1ый потенциал. (0ЕП)..
Стер» гиэаиия контроля проводится путем введения в пробы формалина в количестве 0*05»0,10 %» Вышеуказанная концентрация в лабораторных условиях полностью подавляет жизнедеятельность бактерий и в настоящей методике проверяется путем контрольных посевов на вышеуказанные три физиологические группы до начала и по истечении 30 суток.
Выбор формалина для сторилкзации обусловлен также тем, что он в концентрациях 0,005-0,10 % не изменяет поверхностной активности й едзороцин ПАЗ типа СП-10.
4,4. Подученные результаты записывают в виде, таблицы и сравнивают о данными контрольных опытов.
Накмено-[Поверхностное натяжение! Койцеитрация ПАВ, !Ст*пень *а«ие ! ^/*2 wn/в !биораз-
оооазиа -1- - — - ^ - — ----—!----— --— — — ! рушения
ЛАВ ! В^емя^ сутки ! Время, сутки ! %
& ыЫ 10 1 Гго Y_30~ I
4.5. Степень бт> разрушения (х), в %ь за истекший период определяет по формуле:
„ . ССх-с2>тоо
х --- .
С1
1де (> X - степень био разрушения,
Cj и С*2 - концентрация ПАВ соответственно до начала к после опыта, «?/д.
4.6. Данные Пс бактериальной зараженности ^деторождения, литеры активности и концентрации химачеокогб продукта учитываются при применении или выборе того иди иного типа ПАВ для увеличения нефтеотдачи пластов конкретного ноотороадепия, При обком высоком содержании бактерий в закачиваемых пластовых водах лосиедько использовать реа:ект с низкой степенью биораэруве-нъа. При наличии высокоэффективных ПАВ, не удовлетворяющих
9
ото му требование, необходимо применять их о учетов микробиологических факторов,
5. ОСНОВНЫЕ ПРАВИЛА ТЕХНИКИ БЕЗОПАСНОСТИ ПРИ РАБОТЕ С МИКРООРГАНИЗМАМ НЕИОНОГЕННШИ ПАВ
5*1, Правила работы в микробиологической лаборатории:
- работа с любыми микроорганизмам требует обязательного наличия Халатов н колпаков или кооынок, а также сизиной обуви;
- необходимо следить за тем, чтобы бактериальная масса не вагрязняла руки, стол, окружающие предметы;
• ватные пробки, закрывающие оооуды с микроорганизмами, не должны своей внутренней поверхностью соприкасаться со столом или руками;
- если пролилась микробная взвеоь, необходимо обезвредить её, используя дезинфицирующие о ре детва, напримзр, карболовую кислоту;
- вою лабораторную посуду, содержавшую живые микроорганизмы, после работы необходимо подвергнуть термической обработке в автоклаве;
- выносить микробные культуры за пределы лаборатории soilрешаете я;
- при работе о любыми микро рсаниэмами необходимо о трог о Соблюдать личную гигиену, соблюдать чистоту на рабочем месте,
5.2, Мзры безопасности при работе с едкими веществами (минеральными кислотами и их твердыми и жидкими ангидридами, едким кали и натром, раствором аммиака и т,д,):
- для предотвращения ожогов вое работы о едкими г^щеотда-IM необходимо проводить в защитной спецодежде и пользоваться очками и перчатками;
- при приготовлении растворов оерной кислоты необходимо использовать тонкостенную отеклякную иди фарфоровую посуду, поливать кислоту к воде следует тонкой струей при непрерывном помешивании, чтобы не было иеотнохо’перегрзва, растрескивания отекл и выброса кислоты.
10
- запрещается совместное хранение концентрированных кио-
лот v легхсвосплпменяшщихоя жидкостей;
- переливать кислоту и щелочи из бутылей в мелку*» тару следует при помощи сифона или ручных насосов различной конструкции;
- разлитые кислоты или щелочи необходимо немедленно засыпать песком, нейтрализовать и лишь после этого проводить убор-
ку.
5.3* При работе с неионогенными ПАВ типа ОП-Ю необходимо выполнять олсдумпие правила:
- при работе с концентрированными препаратами ПАВ необходим? пользоваться защитными очками или прозрачными щиткам! для защиты глаз и Йояи лица;
- при попадании ПАВ на коку или глаза омыть обильным количеством воды;
- зггрязченкуо ПАВ одевду тщательно прополоохать теплой водой, до исчезновения пены;
•- запрещается применять ПАВ в качестве моющего средства для мытья рук, лица иди стирки одежды»
II
приложент I
обязательное
6. №ТОДИКА ОПРЕДЕЛЕНИИ ОБЩЕГО КШЧКТВА МИКРООЕГАНИЗМЭВ В ПЛАСТОВА ВОДЕ
Ход работы:
Сущность метода заключается в концентрировании бактерий из определенною объеме анализируемой боды на мембранный фильтр, окраске и просмотра под микроскопом.
Подготовка к работе мембранных фильтров производится еле* дующим образом: мембранные фильтры #2. Ю, проверенные на отсутствие трещин, отверстий и т.п., помещают по одному на поверхность дистиллированной воды, нагретой до 60°С в стакане, и медленно доводят до кипения на слабом огне и выдерживают в течение КЫГ* мил. Смену воды и последующее кипячение повторяют до полною удаления остатков растворителей из фильтров (>5 раз), после че!о они готовы к работе. Подготовленные фильтры сохранялся оухими или в широкогорлой банке с дистиллированной водой. Переда употреблением фильтры стерилизуются кипячением в дистиллированной воде.
Подготовка фильтровальное аппарата к анализу: фильтровальный аппарат стерилизуют фламбироманием после обтирания ватным тампоном, смоченным спиртом. После охлаждения на нижнюю часть аппарата (столик) кладут флаыбированным пинцетом стсрил>"ий мембранный фильтр, прижимают его верхней частью прибора и закрепляют устройством, предусмотренным конструкцией прибора.
Фильтрование воды: перед анализом проба в пробирке тщательно взбалтывается и о тс таивиетоя в течение 5-10 мин. для отделения нефти от плаотовой воды. Затем, не взбалтывая, стерильной пипеткой из н ид ней части пробирки отбирается 3-10 мл Пластовой воды в зависимости от содержания мцкроорхакизмоа. Затем, пробы фильтруются.
Фильтр о осевшими на ном микроорганизмам выоуоивавтоя на фильтровальной бумаге при комнаткой тежературе или в термоота-
12
те. Для удаления ооадка фильтры обрабатывают O.I процентным ре-
отвсроч соляной кислоты.
^кроорганизмы на фильтре фиксируются формалином и после прооуики окрасиваютоя эритрозином в течение 20-30 мин. (время подбирается экспериментально)* после чего фильтр промывают в дистиллированной воде до прекращения окраски новых порций воды.
Окропенные фильтры высушивается, помещается На предметное отекло в каплю иммерсионного масла* покрывается покровным стендом и просчитываются под микроскопом с окулярным сетчатым микрометром. Просчитывается 20~Ю квадратов сетки с площадью не менее 300 «к*?*
В каждом ноле зрения просчитывал тс я бактерии в Ц маленьких квадратах* расположенных по диагонали. Содержание бактерий не должно превышать 30 в каждом квадрате» но не менее 2-5.
Окончательный подсчет бактерий в I мд пластовой воды производится по формуле:
у . 31R* 10*6
асе
Где X - количество бактерий в I кд;
R - радиус фильтрующей поверхности мембранного фильтра, ом;
I03- переводной коэффициент;
в - чиоло бактерий в полях зрения;
а- число полей зрения;
С - плозтдь поля зрения, мк)?;
О - количество профильтрованной воды* мд;
С-ибхп определения может заключаться в субьективном учете микроорганизмов исследователем. Крок того, необходимо учесть* что частицы отличаются от микроорганизмов тем* что они или не воспринимают окраску, или бесформенны, Бактерии в основном имеют фор;<у палочек или кокков и окрашены в красный цвет. Средняя ошибка прямого счета зависит от числа просчитываемых полей зрения и колеблется в пределах 2*8 - Ю£*
13
ПРИЛОЖЕНИЕ 2 обязательное
7. СОСТАВУ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД
Для качественною выявления о.дельна физиологичеоких групп бактерий использует жидкие питательные средых Поотгейта -для оу-
дьфатвооотанавливающмх, Норенкодой -для угдеводородокиодявщих, Баркера -для метано о бразуеших.
.'41кроорханиэмы 1 Питательные ! Признаки роста на оредах
| О роди |
Сульфатвосс такав- л лл _вИ_
ливаьщие бактерии Пооттейта
Уг леводо родо кио- Коронковой
лдощие бактерии
Мзтанообразусцие Баркера бактерии
Почеонение ореды о образованием сульфида железа
По толщине бактериальной пленки, помутнение ореды и *#«кро-окопированием
По наличию пленки, осадка, помутнение ореды* По образовании метана в количестве не менее
ПО'2* об.
7.1. Соотав орвди Поотгейта ( pH -7,0 -7,5 )
Соединение |
j Химическая формула |
| Фличеотво, r |
Фоофо рно кислый кадий одно замещенный |
КНгРО< |
0.5 |
Хлористый аммоний |
NH<C1 |
1.0 |
Сбрнокиолый кальций |
CaS04 |
1.0 |
Серкокиолый магний |
Mg SO* |
1.0 |
Лдочкокиодый натрий |
CHjCHQHCOONa |
3.5 |
Хлористый натрий |
NaCl |
9.5 |
Вола водопроводная |
I 000,0 |
1%
Добавки:
5-процентный раствор дрожжевого ввтолизата - 1,0 г/л; 5-проиентный раствор FcS0<b однопроцентной HCI - 0,5 х/л; 5-процентный раствор аскорбиновой кислоты - 1,0 г/л I-процентный paCTBopN.v$B однопроцентномNtyCO*- вносить по 1-2 капли до образования серохо цвета.
Для корректировки pH среды используют 5-процентный раствор HCI и МлНСО/.
7,2. Состав среды Норенковой. |
Соединение j |
Химическая формула |
] Количество, |
Фосфорнокислый аммоний двухзамевенный |
М2нроа |
1.0 |
Хлористый аммоний |
nh4c< |
0.2 |
фосфорнокислый калий дВу*х?аиешенный |
КгНР0„ |
0,25 |
Фосфорнокислый калий однозомгщенный |
КН2Р0А |
0,25 |
Сернокислый магний |
MgSO* |
0,02 |
Соль М п |
0,01 |
.4>либдат аммония Нефть |
.(NH^Mo04 |
0,0052
5,0 |
Хлористый кальций |
CaCl: |
0,01 |
Вода водопроводная |
|
I 000,0 |
|
7,3. Состав среды Баркера ( pH *7,0 ) |
j Химическая формула [ Количество, г
Хлористый аммоний
фосфорю кислый калий двухэаысаенный
Хлористый нагний Органическое вещество
Бода дистиллированная
15
Перед посевом о роду кипятят для удаления растворенных га* вов и, охлади», дрбавляот 3 процента по объо^ раствора» содержащего 1% NctjS » 5 процентном NaHCO*, стерилизованного в автоклавов Добавлением отарильного раствора ооляиой кислоты устанавливают p!i -7.0» В качество субстрата нопользуат ацетат или маолдаь иур кислоту или «этанол. Выделение чнотыд культур проводят на агаризоваккой ореде указанного состава. Пробирки о заотьвэвй средой заливает омерьи равных частей парафина и вазелинового масла, чтобы предохранить от вьюыхания и проникновения воздуха.
16
ПРИШВИНЕ 3 обязательное
6. ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОНЦЕНТРАЦИИ ПАВ
Для определения концентрации ПАВ рекомендуется колориметрии чеокий метод о фоофорноводьфроиовой кислотой.
8.1* Колориметрический метод о фосфорновольфраювой кислоте й-гндрохиноновая модификация. Этот метод применим для определения ПАЗ в пределах концентрации от I до 25 мг/л при объеме используемой для исследования исходной пробц равном 10 мл.
Определение основано на осаждении ПАВ в виде комплексного соединения с фосфор»^вольфрамовой кислотой и хлористым бпеием, который в концентрированной оерной кислоте дает с гидрохиноном крлоио-коричневую окраску. Интенсивность окраски определяется визуально или при помощи фотоколориметра ( Д *500 «М, кювета -0,5 чти 1,0 о К). Определению мешают сульфаты при концентрации их более 200 mi/л» их влияние устраняется путем разбавления пробы»
8.2. Аппаратура н стеклянная посуда: фотокодориметр ( Д * •500 нМ), кюветы 0,5-1,0 оМ, центрифуга, пробирки центрифуги
емкое тьв 20мд.
б.З*. ^Активы:
U соляная кислота ч.д.а. раствор 1:1;
2. хлористый барий, 10-проиентиый раотвор;
% ^вольфрамовая кислота ч.д.а.» 2-лроцентный
А. серная кнолота ч.д.а.» уд.воо 1,6^ ;
5» гидрохинон, 5-процентный раствор в оерной кислоте;
6. основной эталонный раотвор ПАВ: растворить £ г ПАВ в мерной колбе на I л и долить до метки дистиллированной 1чздой ( I мл раствора*содержит £ кг ПАВ);
7. рабочий раствор ПАВ; дополнить £0 мл ооновкого раствора ПАЗ, содержащего я в мерной холбе, дистиллированной кодой до объема 100 мл ( I мк раствора содержит ОД мг 1Ш). Приготавливать раствор в день проведения анализа.
17
8.4. Шкала стандартов. В семь пробирок центрифуги последовательно отмеривает следующие количества рабочего стандартного раствора ПАВ: 0; 0,2; 0,5; 1,0; 1,5; 2,0; 2,5 мл, что соответствует веоивым количествам от 0 до 0,25 мт ПАВ в пробе. Дополнить содержимое пробирок дистиллированной водой до 10 мд, а затем поступать так, как указано в описании хода определения, начиная о добавления 2 капель соляной кислоты.
Шкала стандартов является нестойкой и стандарты для визуального определения следует приготавливать одновременно о после* дуемой пробой. При фото колориметрическом определении использовать приготовленные стандарты для вычерчивания калибровочного графика, откладывая по оси абсцисс концентрацию ПАВ, а по оои ординат -оптическую плотность.
8.5. Ход определения* Отмерить в пробирку центрифуги 10 мж или иное количество исследуемой пробы, соответственно концентрированной или разбавленной с таким расчетом, чтобы содеркание не* ионогенного ПАВ в пробе находилось в пределах от 0 до 0,25 иг. Добавить 2 кгпли соляной кислоты ( 1:1 ), I мл растворе хлористого бария и I мд раствора фосфо pro вольфрамовой кислоты, перемещать тонкой стеклянной палочкой (пользуясь ею в дальнейшем для проведения опыта).
Поместить пробирку с иооледуемой пробой и стандарты в химический отакан о кипящей водой и нагревать в течение 15 мин., поддерживал воду в стакане в состаянии кипения. Затем, вынуть пробирки и отцентрифугировать осадок в течение 5 мин. при скорости Вращения 2500 -3000 rtnf*. Образовавшийся над ооадком одой жидкооти осторожно слить, добавить в пробирки по 2 мд горячей дистиллированной воды, перемешать палочкой и снова центрифугировать, «:ак указано вше.
Жидкость слить, как в предыдущем случае, еще раз добавить по 2 мл горячей воды, перемешать, отцаитрифугировать и еще раз слить, Ооадок высушить в сушильном шкафу при 105*110 °С. Добавить в пробирки о осадком по 3 мл концентрированной серной кио-
ржоводйиИ докшнт
«ШИКА ШРЕДЕДЕНИгТ БГОРЛЗДЛГJEМОСТИ НЕИОНОГЕННЫК ПОВЕРХНОСТНО-ДХГИВНИС ВЕЩЕСТВ ПОД ДЕЙСТВИЕМ П1ЛСТОВОЯ ШКРЮДОРЫ
И 39-23-749-82
Вводите* впервые
Приказом Нснистеротва нефтяной проышденнооти от 01*10.82
» 3X5
Срок введения установлен о 01*11.82
Настояний руководящий документ устанавливает правила N последовательное ть определения биораэдагаемсоти иеионогенных поверхностно-активных веществ под действием пластовой микрофлоры.
Существующие методики оценки отепени биохитчеокого распада ПЛЗ Cl] разработки для условия аэротенков, для оиоте^ очно-тки с точи их вод* Данная методика составлена о цель» изучения биораэруяения, применяемых в настоящее время и новых непокорен-кмх ПАВ, под действием плаотовой микрофлоры и разработки мероприятий по их бактерицидной иди иной защите от бноповреддошй»
18
доты, перемешать и после полного растворения осадка добавить по 1 К1 раствора гидрохинона и перемешать. Содержимое пробирок дополнить концентрированно!) оеркой кислотой до объема 10 юг и перемешать.
Опус?# 15 мая* визуально определить ннтононвноотъ окраокм пробы путем сравнения оо шкалой о тан да ртов или определить значение окотинкцик и отсчитать содержание ПАВ по калибровочному графику, учитывая пол разку на контрольно пробу. Результаты пересчитать на I л исследуемой пробы.
АННОТАЦИЯ
Наатолчея методика предназначена для определения степени биораэруиения неионогенных поверхноотао-аггмвных веществ (ПАВ) под действием Пластовой микрофлоры о целы) оценки перспективности их применения для увеличения нефтеотдачи* разработки мероприятия по предотвращения биопов рождения я расхода реагента и повышения эффективности процесса добичи нефти путей закачки и пласт водных растворов ПАВ.
Мзтодика предназначена для использования научно-иоолодо-Ватедъскими и производственными организациями* зачимавщимкоя вопросами разработки нефтяных месторождений о применением водных растворов ПАВ.
Данная методика разработана во исполнение протокола § I заседания секции научно-технических проблем внедрения хида-
чеокнх продуктов и нефтяной и газовой проиывлешюстн Научного совета по проблемам нефти и Газа ГКНТ СМ СССР от 07.12.77г., рекомендации ГКНТ СМ СССР В 6-7/04 от 07.02.7Б г. и решения Центральной ко миссии Й 605 от 21.02.79 г.* обсуждена на заседании Хчеиого совета института БаиШЛИнефть и рекомендована к утверждены» в качестве руководящего документа. Проблема
0.Ц.015* подпрограмма 0.П.05.Ц зтап М2б. (постановление ГКНТ й 492 от 8.12.82).
г
1. ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ
1*1* Одних из требований к КЛАВ* применяема* для увеличения нефтеотдачи, о точки зрения охраны окружающей среды, является повысеиная био разлагаемость.
1.2. При выэоксй бактериальной зароаеннссти {[21 пластовых вод бюдогичеокн *мягкие" ШАВ могут подвергаться биопоз-реждеким, в результате которого снижается к* поверхностная активность и концентрация. Псзтому» одним из новых требований предъявляемых к КЛАВ является опоеобкость сохранять длительное время технологически* свойства к заданную концентрацию в условиях применения на промыслах.
1.3. Лабораторные исодедования(виполненные при разработке данной методики в Бавжшииефти показали, что под действием микрофлоры содержащейся в пробех,отобранных из призабойных зон нагнетательных скважин^ онкжазтз я концентрация и поверхностная активность ШЛВ^Э ) типа ОД-10, 2BI3I7-I2, АФ-14 С31.
2. ЦЕЛЬ И ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ ОПРЕДЕЛЕНИЯ
2.1. Целью проводимых испытаний является определение величины йэмегмыя поверхностной ахтивностк и концентрации неио-ног*'нных ПАВ под действием микроорганизмов нефтяных месторождений*
2.2* Испытаниям могут быть подвергнуты практически все основные типы иеконогеннкх ПАВ £*] * Технология применения не-ионогаиныч ПАВ для увеличения нефтеотдачи пластов и фиэико-хи-мкчес/йе свойства некоторых из них представлены в РД 39-I-I99--75 [5].
2.3* До начала испытаний проводится определение бактериальной зараженности меотороддеиия, для чего осущеотвлязт отбор проб для анализов из водоводов на кустовой насосной станции (KiO), из уотьев нагнетательных н эксплуатационных скважин.
3
Из нагнетательной скважины отбор проб пластовой воды к :ег про-наводится методом оамоиэлиаа иди с использование и глубинных насосов.
2*4. Для относительной оценки бактериальной зараженности добываемых вод и дальнейшего испытания но настоящей методике ре попаду его я определить общее количество микроорганизмов и наличие трех физиологически,, групп бактерий ( СЙБ, игтаиообразу-вщих и углеиодородокиедямих). Краткая характерно гика 3 групп бактерий» рекомендуемых для экспериментального определения с цедьа оценки и контроля бактериальной зараженности» описала в литературе £3 6. 7] . При возможности для контроля наличия ккэпбопособник клеток югут быть определены и другие группы микроорганизмов»
2*5. Общее количество бактерий в I к» жидкоотн определяет» о я микроокопированием (приложение I).
2.6» Для количественного учета бактерий используют и*тод предельных разведений [в } • Для этого готовят пообиркн о 9 ил стерильной водоправедгой воды* Пробирки нумеруют. Сторидыой пипеткой берут I ил наследуемой воды и вносят в пробирку ft I о 9 мл стерильной воды» обжигая при этом гордого пробирки рад пламенем спиртовки (разведешь будет 1:10 )• Затаи» после перемешивания в течение.! мин» свежей эторилмюН пипеткой берут £ мл из пробирки ft X и вносят в пробирку ft 2 (ра^аеленна будет. 1:100 )* Таким же образом готовят разведения 1:1 ООО» 1 s 10 ООО И т.д* Каждое разведение пкоовеют в трек ьовтлрноетжх в пробирках о питательной оредой о юр ильной пипеткой и термостаты-руст при 20°0.
Для определения и подсчота наиболее ворэетного гчюда микроорганизмов в I мл используют таблиц Мав-Кредн *
2.7. Подготовку шпагальзих сред желательно прэподняо в спецнолмэировоиннк организации?*. Готовят «завес дм шпатодмт сред# растворит их в водопроводной вода к доводят pH раствори до к^ебходи'юго значения. Кутили оо средой стерч*гау»т в автоклаве а точение 30 мин* прно,Ог МПа, Ояжнхдепну» среду реэдивв»? » бокса в 10 миденмграые napgrovimoat* фльдсаа для делгх*№гого колитео таены© ос учотл бя*т?рйй по *егс*> предка-
4
и«х разведений, Флаконы закрывает стерильными резиновыми про* бх»ш, закрепляя их далее алюминиевыми колпачкам. Составы пи*
тотальных оред приведены в приложении 2,
2,6, В случае обнаружения микроорганизмов опыты по опре«* делении степени био разруления проводятся о использованием ода* «товой воды месторождения» рекомендованного к разработке о 0(п^снен..см водных растворов ЛАВ,
2.9, Поверхностная активность оценивается по величине мекфаэного натяжения на границе раздела раствор ПАВ в плаото-вой воде - очнпенный керосин, Для измерения межфазного натяжения рекомбгд>отся использовать сталагмометр по ютодике [5]*
2.10, Определение концентрации ПАВ проводится колоримет* рижским методом о использование фосфорновольфрамовой кислоты [10] (приложение 3 )♦ Кроме этого, в качестве вспомогательного метода возможно определение концентрации ПАВ по графику ее зависимости от поверхностного натяжения,
2.11, Анализы по определение концентрации водородных ионов (pH) и окислительно-восстановительного потенциала (ОВП) проводятся известными мзтодами [9] •
3, ПРИБОР**, ОБОРУДОВАНИЕ И РЕАКТИВЫ
-термостат электрический для выраииваиия бактерий о автоматическим терморегулятором до 50°С,
-автоклав эл-ктричесхуй по ГОСТ 9ЭВ6-75 -рН-мстр лабораторный "рН-262"
-микроскоп биологический по ГОСТ 8284-78 -центрифуга на 6-7 тш.об./мин,
-фотоэлектрок»лорн.''етр $J&-55 М -пробирки иа £0 ил яо ГОСТ LQ5IS-75 -пипетки на I и 10 кп по ГОСТ 20292-74 -спиртовка по ГОСТ 10090-74 -склянка Вульфа на 5 ж по ГОСТ 10378-73 -конйргишые фильтры $ 1-3
предметные с тема по ГОСТ 9284-75
покровные отекла по ГОСТ 21400-75
прибор ЗЕЙТЦА по ГОСТ 9775-69
водоструйный насос по ГОСТ 10696-75
човки Петри по ГОСТ £0973-75
пинцет по ГОСТ 21241-77
стеклянные о такай ы на 50 мл по ГОСТ 10394*72
формалин по ГОСТ 1625-75
керосин по ГОСТ 4753-68
Ооляиая кислота по ГОСТ 3118-77
аритрозин ТУ 6-09-07-369-75
фенол по ГОСТ 23519-79
иммерсионное маоло по ГОСТ 13739-78
фосфорнокислый кадий однозаипяениий по ГОСТ 4198-75
хлористый аичжий по ГОСТ 3210-77
сернокислый магний по ГОСТ 4523-77
молочнокислый натрия по ТУ 6-09-3664-74
хлористый натрий по ГОСТ 4233-77
дрожжевой автолизат по ТУ 6-09-39-79-75
аокорбииовая кислота по ГОСТ 4015-76
натрий сернокислый по ГОСТ 429-76
фосфорнокислый аммоний двузамэпенныи по ГОСТ 3772-74
ооль АЬра по ГОСТ 4208-72
аммоний молибденовокислый по ГОСТ 3765-78
хлориотыя кальций по ГОСТ 4460-77
хлористый магний по ГОСТ 4209-77 масляная кислота ТУ 6-09-530-75 парафин по ГОСТ 23683-79 вазелиновое кисло по ГОСТ 3164-78 фоофорновольфрамивая кислота по ГОСТ £8290-72 агар-агар по ГОСТ 17206-71
хлористый барий ТУ 6-09-3581-74 оернал кислота по ГОСТ 4204-/7 гидрохинон по ГОЛ 19627-74
*
- опирт этиловый ректификованный по ГОСТ 9962-о/
* вода дметилированная по ГОСТ 6709-72
Вое реактивы доданы быть квалификации ч.д.а.
<*, ОПРЕДЕЛЕНИЕ СТЕПЕНИ РАЗРЕШЕН И*
4.1* Опенка величины снижения поверхностной актигнооти
ооуцеотвд^тоя путем сопоставления поверхностного натяжения на грамме раствор П/Д) - очищенный керосин о контролам. Повышение коэффициента поверхмоотного натяжения указывает на снижение OKTHlMIOOTH I.AB.
4*2. определение бноразруаекня выполняют в той среде» Где предполагается применение ПАВ. Схема лабораторной установка для определения био распада ШАВ приведена на рисунке. Вое эксперименты проводятся в боксе для микробиологических робот над пламенем спиртовки.
Испытания проводят в склянках Вульфа о нижним тубусом (2) емкостью 3 л. окрашенных в черный цвет, полностью заполненных испытуемой водой с добавкой 0.03 % ПАВ. Для предотвращения попадания в оиотему аткоофериого кислорода используют "подув-гуп инертного геза. В качестве емкости для инертного газа ре-ясмоидуотся Использование резиновой камеры или подключение к оиотегч баллоне ш:срт>хо раза через редуктор. Для пре до тара* помня за:нтосн«я микроорганизмов о инертным газом пооледний стерилизуют с помощью «ембракнаго фильтра [ IIJ .Продолжительность испытаний г^рсделдстея* ноходя из следующих положений'' более высокая интенсивность био разрушения ИАВ может протекать в призабойной зона екз&гкн; ересей скорости фильтрации жидкости в пласте 0,3-1#3 м/сут. £123 I возможная область ма^* екмалЬисхо развития микроорганизмов, равная 5-10 м от забоя окодлчк [2J . южег быть достигнута раствором ПАВ за 15-20 суток. Таким образок, предполагается* что по истечении 30 суток скорость бнореспада ПАВ в пдаотоэых условиях практически будет оставаться и&йиеиьвей в постоянной.
7
Лабораторная установка для определения био разрушения ШАВ в анаэробных условиях
1. Ёмкость о инертным газом;
2. Склянка Вульфа о нижним тубусом;
3» Электроды: платиновый, каломелеэый, стеклянный;
Ц9 Прибор для определения концентрации водородных ионов (pH) и окиолительно-восстановительного потенциала;
3. Раствор ПАВ в пластовой воде;
6. Мембранный фильтр для стерилизации инертного газа*