ГОСКОМИССИЯ ПО ХИМИЧЕСКИМ СРЕДСТВАМ БОРЬШ С ВРЕДИТЕЛЯМ. БОЛЕЗНЯМИ РАСТЕНИЙ И СОРНЯКАМИ ПРИ МИНСЕЛЬХОЗЕ СССР

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЕ МИКРОКОДЕ ЧЕС ТЗ ПЕСТИЦИДОВ В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ * КОРМАХ И ВНЕ&-НЕЙ СРЕДЕ

ЧАСТЬ ХЕ-я

Москва - 1983

ГОСУДАРСТВЕННАЯ КОМИССИЯ ПО ХИМИЧЕСКИМ СРЕДСТВАМ БОРЬБЫ С ВРЕДИТЕЛЯМИ, БОЛЕЗНЯМИ РАСТЕНИЙ И СОРНЯКАМИ ПРИ МСХ СССР

МБТОДИЧВСКИВ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ МИКРОКОЛИЧЕС1В ПЕС1ИЦИДОВ В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ,КОРМАХ И ВНЕШНЕЙ СРЕДЕ

ЧАСТЬ ХШ

Данные методики апробированы и рекомендованы в качвотва официальных группой экспертов при Гоокомиосии ло химическим оредотвам борьбы с вредителями,болезнями растений и сорняками

при МСХ СССР

Москва-1983

-53-

фу 5мин при температуре П0°С, а затем обрабатывают прояв яющим реак тивом 2а.

Глг.фосат и аминометилфосфоноеая кислота проявляются в виде сиреневых или красных пятен (цвет - в зависимости от вариантов обработки) на светло-желтом фоне пластинки с R] соответственно 0,82-0,01 и 0,71*0,01.

Количественная оценка проводится путем оравнения площадей и интенсивности окраски пятен проб и стандартных растворов.

2.6 Обработка результатов анализа

Концентрацию глкфосата. и метаболита в анализируемых средах определяют по следующим формулам:

для воды -    для    почвы    и    растительного

материала -

где X - содержание глифосата или метаболита в анализируемой среде, мг/л или мг/кг;

а - количество глифооата или метаболита, найденное в анализируемой навеске пробы, мкг;

У - объем воды, озятой для анализа, мл;

Р - навеска почвы, растительного материала, г.

3, Требования безопасности

При проведении исследований по данной методике соблюдать правила предосторожности необходимые при работе с ядовитыми, взрыоо- и легковоспламеняющимися веществами.

Методические указания разработаны*

1.    Бунятян Юрий Андраникович, Армянский филиал ВПИИГИМТОКС.а, г. Ереван;

2.    Геворкян Анжела Амбарцумовна, Армянский филиал ВНМГИНТРКС.а, г. Ереван.

-259-

ССДБРЖАНИЕ

ХЛОРОРГАНлЧЕСКИБ ПЕСТИЦИДЫ

I.Временные методические указания указания по

определению ХОП (ДДТ,ДДЗ,ДДД, -ГХЦГ) в рыбе и рыбной продукции методом газожидкостной хроматографии.

2. Методические указали® по определению ХОП и сим-триазиновых пестицидов при их совместном присутствии в почве с помощью Г1Х*

3* Временные методические указания по определению остаточных количеств митрана в воде,сливах и

^яблоках методом ТСХ.

ШЙОРОРГАНИЧВСКИВ ПЕСТИЦИДУ

1.    Мотодические указания по определению афоса в воздухе рабочей зоны методами ГЬХ и ТСХ.

2,    Временные методические указания по определению боя-стара в ботве и клубняах картофеля,листьях и стеблях хлопчатника,капусте,почве к водэ ТСХ и ГЗЕХ.

3* Методические указания по определению глифосата и его метаболита- аминометилфосфоновой кислоты методом хроматографии в воде,почве,растительном материале,

4.    Мотодические указания по определению остаточных количеств дурсбана в воде,почве,лесной растительности

и биосредах методом ТСХ.

5.    Временные методические указания по определению каун-тора в растениях сахарной свеклы и почве методом ТСХ,

260-

6* Методические указания по определению метилмеркалто-фоса в воде,почве,винограде и зеленой массе хмеля ГЖХ и ТСХ.    67

7.    Временные методические указания по определению о<$у-

нака методами ГЖХ и ТСХ в почЕе,растениях,воде водоемов.    76

8.    Зременные методические указания по определению протио-фоса в растительном материале,почве и воде методами

ГКХ и ТСХ.    82

9.    Временные методические указания по определению се-лекрона в растительной продукции,почве и воде ТСХ

и ГЖХ.    91

10.    временны» методические указания по определению хлоро

фоса энзимно-хроматографическим методом в листьях болладоны и траве мяты перечной.    90

11.    Методические указания по определению в зерне и про

дуктах его переработки ФОП.применяемых для обеззараживания зерна и зернохранилищ,хроматографическими методами.    ₁₀₅

АЗОТСОДЕРЖАЩИЕ ПЕСТИЦИД]

1.    Методические указания по определению остаточных количеств пкрекса,диносеба,каратака,ДНОКа в воде,почве.

и растительном материале    хроматографическими методами. цу

2.    Временные методические указания по определению байгой*

методом ГЗКХ в молоке.    138

3.    Временные методические указания по определению барнона в воде,почве,растениях методом ГЖХ.

- 261 -

4.    Методические указания по определению кронетона

в воде,почве,корнеклубнеплодах и растительном материале ТСХ,    *54

5.    Временные методические указания по определению ридо-

кила методой хроматограмм в воде,почве,растительном материале,    *50

6.    Временные методические указания по определению ров-

роля методом ТСХ в поде,почве,томатах,картофеле,винограде, виноградном соке и ринэ.    I6S

7.    Временные методические указания ронилана в растительной продукции,почве и воде ТСХ и    ГЖХ.    175

8.    Временные методические указания по определению эвисех-

та в растительной продукции,почве и в воде ТСХ,    182

9.    Временные методические указания по определению эти-

римала в растительной продукции,почве и воде ТСХ,    188

ПРОЧИЕ ПЕСТИЦИДЫ

I* Времонние методические указания по определению гора-нилбутирата методом ГИХ и ТСХ в почве,воде,корнеплодах и листьях сахарной свеклы.    *^5

2.    Временные методические указания по определению бром-

пропилата(неорона) в яблоках и цитрусовых методом газовой хроматографии.    206

3.    Временные методические указания по определению иллокса-на в воде и печво методом ГП.

4.    Временные методические указания по хроматографическому определению иэатрина в печво    и    воде.    217

5.    Временные методические указания по определению омаЯта методами Г££Х и ТСХ в почве,в воде и растениях.

6.    Методические указания по определению хлората магния в почве,воде,растениях(подсолнечнике,луке) и в воздухе полярографическим и хроматографическим (ТСХ) методами.

7.    Временные методические указания по определению оста точных количеств некоторых аналогов ювенильного гор иона (алтосида.алтозара и п-<5ром*енилового эфира гераниола) в растениях картофеля и почве методами ТСХ и Ш.

Дополнения

Л- 71938 от 20Л«СЗгТирах 2000 экз. .заказ Н» шз Типография ВАСИ:ИЛ

Настоящие методические указания предназначены для

санитарно-эпидемиологических станций и научно-исслодова-телъских учреждений Минздрава СССР,а также ветеринарных_вагрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза СССР и лабораторий других Министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания,кормах и внешней среде.

Срок действия временных методических указаний устанавливается до утверждения гигиенических регламентов.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качество официальных группой экспертов при Госкомиссни по химическим средствам борьбы с вредителями,болезнями растений и сорняками при ИЛ СССР.(Председатель группы экспертов - М.Д.Клисенко).

Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования саяэпидслу^бы ИМПиТМ им.Мар-нпновского Е.Я. и лабораторным советом при Главней санитарно-эпидемиологическом управления Кик здрава СССР.

^,0"    "Утвиредаю"

Заместитель Главного Государственного санигарного врача СССР

Л.И. Зайченко

^и 6 " августа_1981 г

Гг 2434-81_

Методические указания но определению глпфооати и его мет<Л5олита - аминометилфосфоповой кислоты методом хромитогра-фин в воде, почве, растительном материале

I. Краткая характеристика препарата

N - Сфосфонометил)глицин

Структурная формула:    ^

110 - С - CHg - NH - СН₂ - f - 0К

ОН

Эмпирическая фор^/ла:

Молекулярная масса 138,1

Синонимы и торговые названия: гли;-ооа!С', раундап

^-(фосфономслиОгликин - белое кричал л ичес кое вещество, не летучее, стабильно при условии хранения.Выше 50°q разлагается. Ристгори-моегь в воде: 1% при 25 С. Нерастворид п большинстве органических растворителей. Удельный вес.Г,18 г/см (£Ь°С). Естественным метаболитом И-Сфосфонометил)глицина является аминометилфосфоновая кислота:

0

- Cil₂ - Р - ОН ОН

Острая оральная токсичность )»ли|< 0.4*va ^УЦ()) для белых крыс сос-; -»нля*г 49C*0mi /кг,

ц    И

ДСК г;;,/осатп в о ида продуктах - 0,3мг At г, ПДК в вод» - 0, Ivp/a .

Гли* гоелевсходояий, листовые ге^ "идиа, обладающий зффлктив-

нии действием на многолетние, двулетние, однолетние трльы и широколистные сорняки.

2. Методика определения глшьосата ^и аминометилфосфоноьой кислоты в вода, почве, растительном материале хромате графическим методом

2.1.    Основные положения

2.1.1.    Принцип метода

Метод основан на извлечении гхцфосатаи его метаболита - амином.. тилфосфоноеоД кислоты, очистке экстрактов на ионообменных смолах и хроматографировании в тонком слоо ионообменной смолы пластинок "4мк сион 60x3", с последующим проявлением нингидрином.

2.1.2.    Метрологическая характеристика метода

Метрологические параметры:Определяемое: Анализируемый объект : рещество : вода почва : виноград:kvkvuvh Диапазон определяемых • l’.’J.ilJiOCUT :0,05-0.3 0,05-1,0 :0,1 - 0,5:0 I - 1 концентраций.мг/л,мг/кг :Метаболит 0.05-0,8 ;Q,I - Q.4;0,[ - 0 Предел обнаружения, мкг :1гл‘Лфосат : 1,5 2.5 : 5,0 : 2.5 : Метабол.:? : Т J> .. 2,5 -i - 5,0 ; 2,5 Предел обнаружения,мг/л : гли^осат : 0,05 0,05 : 0,1 : 0,1 :Метаболит : 0.05 0.05 * 0,1. 0,1 Среднее значение определе :глифооат : 82.0 70,0 : 69,0 : 71,0 ния* стандартных количвс.гв:Метоболит : 80,0 73,0 : 72,0 : 74,0 <о. % ; Стандартное отклонение. :1гл11чЮоат : 4,6 3,46 : 3,86 : З.вс 5 :Метаболит : 5.0 4.19 -L 3,86 : 4,11 Относительное стандартное :глпфосат : 5,6 4,9 : 5,6 : 5,4 отклонение, •$£., X :Метаболит : 6,2 .. 5,7 : 5.3 ..5,5 Доверительный интервал ; Гл.^ЮСа? 4.3 : 4,8 : 1.8 среднего при рс0,95, п»5, _ ____ % . :М'*таб‘‘ чит : 6,2 5.2 : 4.8 : 5,1 Погрешность определения, :гдрфосат : 6,9 6.1 : 6,9 : 6,7 % :Метаболит : 7,7 _ZJ— : 6.6 :

2.1.3. Избирательность метода

Определению глнфосата мешалт соединения^дающие цветную реакции) с нингидрином - аминокислоты, пептлды, первичные и вторичные вчпн.< однако применяющиеся методы извлечения очистги экстрактов на к,-

-4«-

лонках с ионообменными смолами позволяют считать метод обладающим высокой степенью избирательности.

2.2. Реактивы и материалы

Пластинки хроматографические "Фиксион 50x8" (ВНР)

Вода бидистиллированная

Натрий тетраборьохислый, осч 3-4 ТУ 6-09-3970-75, 0,05М водный раствор (pH 9,18)

Нингидрин, чда, ТУ 6-09-I0-I384-79 Ацетон. ГОСТ 2603-79 Кадмий уксуснокислый, чда, ГОСТ 5824-71 Уксусная кислота (ледяная), хч, ГОСТ 61-75 Этиловый спирт, хч, ТУ 6-09-X7I0-77 Медь (11) азотнокислая, чда, ТУ 6-09-3757-74 Азотная кислота, хч. ГОСТ 4461-77 Катионообменная смола AG 50уУ х8 Катионооб иная смола КУ-2-8 ГОСТ 20298-74 Анионообмы1ная смола Дио£с£е А-101Д Амионообменная смола AB-I7-8, ГОСТ 20301-74

Соляная кислота, хч, ГОСТ 3118-77, 25$-ныЙ и 2М водные растворы Натрий гидроокись, хч, ГОСТ 4328-77, 10% и 4$ водные растворы Аммоний углекислый кислый, чда, i(XT 3762-78, 0,5М и IM водные растворы

Аммиак водный, чда, ГОСТ 3760-79, 0,5М годный раствор

Хлороформ, хч, ТУ 6-09-4263-76

Уголь активированный "БАУ", ТУ 6-09-3247-73

Сухой лед

Стекловата

Стандартнь(й раствор глифох/ата с содержанием 1мг/мл хч вещества Стандартный рас.трор аминометилфосфоновой кислоты с содержанием ?мг/мл хч вещества

Проявляющий реактив I: 1%-иый раствор нингидрина в ацетоне Пропвтпхлций реактив 2: 1г кадмия уксуснокислого в смеси 50мл ледяной уксусной кислоты и ЮОчл РОДЫ

Пропп»-чющий, реактив Ха: 0,2$ раствор нингиорикя в этиловом спирте и Змл ле*мной уксусной кислоты

Проявляющий Реактив 2а: Хгл насыщенного водного* раствора цепи » к - Здесь и в дальнейшем вместо слов"бидист;плированноя ¹вода" будет улогрсблятся с;: on о "соу.а"

-49-

аэотнокислой с 0,2мл 10%-ной азотной кислоты доводят до 100 мл этиловым спиртом

2.3. Приборы, аппаратура и посуда

Колбы мерные, ГОСТ 1770-59, на 100, 1000мл Колбы конические, ГОСТ 10394-72, на 50 и 250мл Колбы круглодонные, ГОСТ 10394-72, на 250мл Стаканы химические, ГОСТ 10394-72, на 100 и 250мл Пипетки, ГОСТ 20292-74, на 1,2,5мл Баня водяная, ТУ 46-22-608-75

Прибор для отгонки растворителя под вакуумом, ТУ 25-II-9I7-74 Камера для хроматографирования, ГОСТ 1065-66 Ванна стеклянная термостатируемая для хроматографической камеры ЧКЪ ТУ 26-11-X024-75 Пульверизаторы стеклянные, ГОСТ 19391-65

Хроматографическая колонка (внутренний диаметр 1,5см, высота 30 30см) для катионообменмой смолы

Хроматографическая колонка (внутренний диаметр 1,2см, высота 30 см ) для анионообменной смолы Камера для опрыскивания Микрошприц МШ-10, с ценой деления 0,2мкл Шкаф сушильный Шкаф вытяжной Вентилятор или феи Встряхиватель , ТУ 64-1-1081-73 Центрифуга (13т. об/мин) , МГТУ 42-219-69

2.4. Подготовка к определению 2.4.1. Приготовление растворов

0,054 раствор натрия тетраборнокислого. Готовят но 19,05г натрия

тетраборнокислого десятиводного растворением в воде и доведением до 1л водой.

10%-ный раствор азотной кислоты. Готовят из 57* (ct * 1,351г/см ) 14,8мл азотной кислоты разводят в 94мл воды.

25%-ний раствор соляной кислоты. 639мл соляной кислоты (35$,

^ » 1,175г/см ) разводят в 300мл воды.

раствор соляной кислоты. 177,5мл соляной кислоты (35$_t<kl,Г'/5 Г/см ) доводят до 1л водой.

IOVur.* раствор гидроокиси натрия. 1СЭг гидроокиси натрия рас^яо jvrb я 900мл воды.

-50-

4%-ныЙ раствор гидроокиси натрия. «Юг гидроокиси натрия растворить в 960мл ьоди.

0,2%-ный раствор нингидрина в этиловом спирте. 0,2г нингидрина растворить в 126,2мл этилового спирта.

IM раствор аммонии углекислого кислого, 79г аммония углекислого кислого растворяют в воде и доводят до 1л.

0,5М раствор аммония углекислого кислого. 39,5г аммония углекислого кислого растворяют в воде и доводят до 1л.

0.5М раствор аммиака. 173,Смл йодного аммиака (227», б--0,915г/см^) доводят до I литра водой.

2.4.2. Приготовление ионообменных колонок

Ионообменная хроматографическая колонка с катионитом АО 50\tfx6 или КУ-2-8. Катионит с размером зерен 0,4-1,5мм, помещают в химический стакан емкостью 250мл, заливают бидистиллировпн юй водой и остаяля г на 24часа для набухали т. Воду затем сливают, а катионит заливают 25%-ной соляной кислотой и встряхивают на встряхивателе в течение 1часа, эат»»м промывают трижды водой и осторожно переносят вместе с яодой в хроматографическую колонку (высота столбика смоли 16-17см). Сверху катионит уплотняют тампоном из стекловаты. Через колонку пропускают 50мл 25%-ной соляной кислоты при скорости злюо-•дии 3-4кл/мин и промываю^ водой до pH 7, Переведенный таким образом в И - ^юрму катионит готов для просздеиия хроматографических разделений.

Для регенерации катионита после хромаюгрвфичс ckoi о разделения, колонку звлиеают 10%-ным водны»- раствором едкого мэтра, остаоляя его в контакте с катионитом в течение ЗС-40мииут. После этого раствор из колонки удаляют, а к катиониту прибавляют свежую порцию раствора щелочи. Такую обработку катионита проводят 2-3 раза. Затем катионит промывают бидисти.чпнрованиой впдой и переводят в II -форму как описано выше.

Ионообменная хроматографическая колонка с анионитом Дио£< te 101Д или AB-I7-8. Анионит суспензируют с водой в течение 1ч;»са и. переносят в хроматографическую колонку (1,2x30см), заполненную на треть водой (высота столбика смоны 20см). Сверху анионит уплотняют тампоном из стекловаты. Затем анионит промывают водным раствором гидро-* карбоната аммония пока исчезнут видимые остатки после выпаривании взятой пробы злюата (выпаривание проводят трехкратно добавляя каждый раз 50мл поды), обычно на приведенную колонку расходуется 1,5-2л til раствора гидрокарбоната аммония. Затем промывают смолу 4 раза

-51-

100мл водой.Переведенный таким образом в НСО^-форцу анионит готов для проведения хроматографических разделений.

Для регенерации анионита поело хроматографического разделения, колонку заливают 4^-ным водным раствором гидроокиси натрия, оставляя его в контакте 20-30минут. После этого раствор из колонки удаляют, а к аниониту приливают свежую порцию раствора щелочи. Такую обработку повторяют 2-Зраза. Далее анионит отмывают от щелочи водой до нейтральной реакции по фенолфталеину, переводя затем в HCOI-форцу, как описано выше.

2.4.3 ^^тбоР пробы

Отбор проб осуществляется в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденным Зам.Главного Государственцого санитарного

врача СССР за Л 2051-79 от 21.08.1979 г.

2.5 Проведение определения

Вода. 1-1,5л предварительно отфильтрованной воды проводят через янионообменную смолу со скоростью 10-12мл/мин, промыпают ЗхЮОмл воды и затем вытесняют 4x25мл (ДиоМ1а А-101Д) или 6x25мл (AB-I7-8) 0,5М раствором гидрокарбоната аммония. Собранный элюат (100мл в одном случае и 150мл в другом^ выпаривают в вакууме досуха при температуре не выше 40°С. Если в колбе остается белый осадок, то содержимое колбы растворяют в 50мл воды и выпарирают повторно. Остаток растворяют в 5мл воды и переносят в колонку с катионитом непосредственно на поверхность гатионита. Элюат собирают сразу после Ьнесенил первой 5мл порции раствора. Колбу смывают 2.:5мл водой и также переносят непосредственно на поверхность катионита. После того, как экстракт войдет в слой смолы, промывают колонку еще 50мл воды и собирают в тот же стакан. Содержимое стакана переносят в коуг-лодонкую колбу на 250мл, ополаскивают стакан 10-15мл воды и переносят в ту же колбу. Подсоединяют колбу к прибору для отгонки растворителя под вакуумом и нагревают на водяной бане не еы'пе 40°С, пои нимгя *емпературу медленно от комнатной. Сухой остаток растворяют в минимальном количестве воды и количественно переносят мнкро^нри-нем на хроматографическую пластинку.

Почва. Просеянную почву (2,3-2,5мм) с содержанием ^т0-?0,т алал-

-52-

ности в количестве 25-50г помечают в центрифужную бутыль на 250мл м заливает 150мл 0,5М водного раствора аммиака. Помешивают 15микут, а затем центрифугируют 15 минут со скоростью ПОООоб/мин. Водный слой отделяют в двухлитровую колбу, а в центрифужную бутыль заливают повторно порцию 0,5М раствора аммиака. Экстракцию повторяют четыре раза. Объединенные экстракты доводят до 1,5-1,8л и пропускают со скоростью 10-12мл/мин через колонку с анионитом, продолжая исследование аналогично воде. Собранный элюат обрабатывают 2г активированного угля в течение 15 минут встряхиванием. Затем раствор отфильтровывают на стеклянном фильтре с отсосом, промывают колбу и фильтр 2x10мл 0,5М раствора гидрокарбоната аммония и выпаривают досуха, повторяя пыпаривание с дополнительным количеством воды (50мл), до тех пор пока не исчезнет в к<&е белый осадок. Далее анализ проводят аналогично анализу воды.

Кукуруза (зеленая масса,зерно^-). Пробу зерна или сухой массы замораживают сухим льдом, измельчают и к навеске о 25г в центрифужной бутыле приливают 50мл хлороформа и 90мл воды. Помешивают I минуту и центрифугируют 15мин при 12-13тыс.об/мин, декантируют верхний водный слой. Подобную экстракцию повторяют трижды. Объединенные экстракты доводят водой до 1,5-1,8л и продолжают исследование аналогично почве.

Виноград. 50г винограда, предварительно превращенного в кашицу, заливают в центрифужной пробирке на 250мл 50мл хлороформа и 90мл воды, встряхивают 10-15минут и экстрагируют ?0 минут на центрифуге при 4000об/мин. Верхний слой декантируют, а к остатку добавляют свежую порцию воды. Проэкстрагировав навеску трижды, водные вытяжки доводят до 1200мп и продолжают анализ аналогично почве.

Хроглатогдатирование. Водные растворы наносят микрогаприцем на пластинку "Фиксион 50x8” на 2см от нижнего края пластинки, не повреждая слоя смолы и пятном не более 0,5см в диаметре, подсушивая рассеянной струей воздуха. Пластинку помещают а хроматографическую камеру с 1см слоем 0,05М раствора натрии тетраборнокислого в воде. Хроматографическую камеру предварительно помещают в т ермо стат и ру омую водяную рпнчу (50°О* Термостатирование осуществляется на все время развития хромате граммы восходящим способом. После окончания хроматографирования <около 90 минут), пластинку высушивают на воздухе и обрабатывают л] г»являющими растворами. Проявление производят двумя возможными ва! иаит&ми: I. обрабатывают пластинку смесью проявляющих растворов I ч 2 (5:2 по объему), высушивают на воздухе, а затем в сушильном шкафу 5г.:ин при темп- ратурз II0°J; 2. обрабатывают пластинку    rv_se*M    реахтйьзч    I*.    ъисуянъжс    на    воздухе    и    ь    сушильном    гака-