Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование Российской Федерации

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАТОРЫ

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ПЕСТИЦИДОВ В ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ, СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННОМ СЫРЬЕ И ОБЪЕКТАХ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ

Сборник методических указаний МУК 4.1.2062—4.1.2074—06

Издание офиииальное

Москва, 2009

ББК 51.21

037

037 Определение остаточных количеств пестицидов в пищевых продуктах, сельскохозяйственном сырье и объектах окружающей среды: Сборник методических указаний.—М: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2009 —147с.

1.    Сборник подготовлен Федеральным научным центром гигиены им. Ф. Ф. Эрисмана (академик РЛМИ, проф. В. Н. Ракитский, проф. Т. В. Юдина); при участии специалистов Федеральной службы по надзору п сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Разработчики методов указаны в каждом из них.

2.    Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

3.    Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМИ Г. Г. Онищенко.

4.    Введены впервые.

ББК 51.21

Формат 60x88/16    Печ.    л.    9.25

Тираж 100 экз.

Тиражировано отделом издательского обеспечения Федерального центра гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора 117105, Москва, Варшавское ш., 19а Отделение реализации, тсл./факс 952-50-89

Содержание

1.    Методические указания по определению остаточных количеств пиридабена в воде,

почве и яблоках методом газожидкостной хроматографии. МУК 4.1.2062-06.......... 4

2.    Методические указания по определению остаточных количеств триасульфурона в зерне хлебных злаков методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

МУК 4.1.2063-06.............................................................................................15

3.    Методические указания по определению остаточных количеств хизалофоп-п-этила

в зерне гороха, семенах и масле подсолнечника по основному метаболиту хизалофоп-п кислоте методом капиллярной газожидкостной хроматографии. МУК 4.1.2064-06..........22

4.    Методические указания по определению остаточных количеств Калиевой соли

сульфометурон-метила по сульфометурон-метилу в воде и почве методом газожидкостной хроматографии. МУК 4.1.2065-06..................................................33

5.    Методические указания по определению остаточных количеств тебуконазола в семенах, масле и зеленой массе рапса методом газожидкостной хроматографии.

МУК 4.1.2067-06.............................................................................................45

6.    Методические указания по определению остаточных количеств клетодима и его

основных метаболитов клетодим сульфоиа и клетодим сульфоксида в масле сои методом газожидкостной хроматографии. МУК 4.1.2066-06......................................52

7.    Методические указания по определению остаточных количеств Пендиметалина в зерне зерновых колосовых культур, риса, кукурузы, растительных маслах, зеленой массе кукурузы, рисовой соломке методом газожидкостной хроматографии.

МУК 4.1.2068-06............................................................................................63

8.    Методические указания по определению остаточных количеств дитианоиа в

винограде, виноградном соке, персиках методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. МУК 4.1.2069-06........................................................................77

9.    Методические указания по определению остаточных количеств Диквата в клубнях картофеля методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

МУК 4.1.2070-06.............................................................................................88

10.    Методические указания по определению остаточных количеств Трифорина

в яблоках, винограде, яблочном и виноградном соках методом газожидкостной хроматографии. МУК 4.1.2071-06........................................ 99

11.    Методические указания по определению остаточных количеств бифентрина в

воде, огурцах, томатах и бифентрина и малатиона в зерне пшеницы и риса методом газожидкостной хроматографии. МУК 4.1.2072-06.................................................109

12.    Методические указания по измерению концентраций дикамбы в атмосферном воздухе населенных мест методом газожидкостной хроматографии. МУК 4.1.2073-06...125

13.    Методические указания по измерению концентраций Бромадиолона в воздухе

рабочей зоны и атмосферном воздухе населенных мест методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. МУК 4.1.2074-06.....................................................136

3

УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей^ благополучия населения, Главныйгосударственный санитарный врачЕбссийсккй Федерации

и Онищенко

« $ » маязШ)бг.

МУК 4Л.Я*Ть^

Дата введения:    t

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ТЕБУКОНАЗОЛА В СЕМЕНАХ, МАСЛЕ И ЗЕЛЕНОЙ МАССЕ РАПСА МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

1. Вводная часть

Фирма производитель: Ашуст Торговое наименование: ВИАЛ-ТТ, Бункер, Колосаль. Действующее вещество: тебукопазол (ISO), Структурная формула:

ОН

С2Н4—С—С(СН₃)з

сн₂

(RS)-1 р-хлорфенил-4,4-д иметил-3 -(1Н-1,2,4-триазол-1 -ил метил)пентан-3-ил (ШРАС). Брутто формула: C16H22CIN3 О Мол. масса: 307.8.

Химически чистый препарат - бесцветное кристаллическое вещество.

Температура плавления: 105 °С Давление паров при 20°С - 1,7x10° шРа

Коэффициент распределения н-октанол/вода: Ко* log Р = 3,7 (20°С)

Растворимость в воде при 20°С ~ 36 мг/дм³ (pH 5-9);

гексане <0.1, изопропаноле, толуоле - 5-100, дихлорметане > 200 (в г/дм³ при 20°С). Вещество стабильно на свету, при повышенной температуре и гидролизу в чистой воде. Класс токсичности по ВОЗ - Ш, ЕПА - II.

Острая оральная токсичность (LDjo) для крыс 4000 мг/кг, дермальная > 5000 мг/кг. Гигиенические нормативы для рапса: МДУ (семена и масло) - в стадии разработки.

Область применения: системный фунгицид широкого спектра действия для борьбы с болезнями листьев и колосьев зерновых (фузариоз, сегггориоз, ржавчина, мучнистая роса и др.), серой гнилью виноградной лозы, некоторыми заболеваниями сои, рапса, подсолнечника. Используется как протравитель семян на зерновых.

Рекомендуемый ВМДУ тебуконазола в семенах и масле рапса 0,2 мг/кг.

2. Методика определения тебуконазола в семенах, масле и зеленой массе рапса методом газожидкостной хроматографии

2.1.    Основные положения

2.1.1.    Область применения и принцип метода

Настоящий документ устанавливает методику определения остаточных количеств тебуконазола в семенах и зеленой массе рапса в диапазоне концентраций 0.05 -0.5 мг/кг, в массе рапса 0.1 -1.0 мг/кг.

Методика основана на извлечении тебуконазола из семян, масла и зеленой массы рапса водно-ацетоновым раствором    или ацетонитрилом с    последующей очисткой

перераспределением между двумя несмешивающимися жидкостями и на колонке с флорисилом. Количественное    определение проводят    методом газожидкостной

хроматографии с использованием термоиониого детектора.

2.1.2.    Избирательность метода

Избирательность метода обеспечивается очисткой экстрактов анализируемых проб и сочетанием условий хроматографирования. Присутствие других пестицидов, близких по химическому строению и области применения, определению не мешает.

2.1.3.    Метрологическая характеристика метода

Метрологическая характеристика метода представлена в таблицах 1 и 2.

Метрологическая характеристика метода Таблица 1

Объект анализа Предел обнаруже ния мг/кг Диапазон определяемых концентраций мг/кг Среднее значение определения, % (для каждого объекта п-24) Относительное стандартное отклонение S, % Доверительный интервал среднего, п=24, РИ5.95 Зеленая масса 0.05 0.05-0.5 83.4 5.0 4.4 Семена 0,05 0,05-0,5 77.6 5.5 4.6 Масло 0,1 0,1- 1.0 77,4 6.7 5.1

Полнота определения тсбуконазола в растениях, семенах и масле рапса (№5 для каждой концентрации)

Таблица 2

Среда Внесено, мг/кг Найдено, мг/кг Стандартное отклонение, S, мг/кг Доверительный интервал, (Р-0.95, й—6),% Полнота определения, % Семена 0,05 0.0380 Шо3 5.8 76.0 0,1 0.0768 Шо3 5.0 76.8 . 0,2 0.1642 зТПР 6.0 82.1 0,5 6.3764 5.7-10-i 5.1 75.3 Среднее 77.6 Масло 0,1 _ 0.0763 2.M0-i 6.9 76.3 0,2 0.0148 ГЙО3 6.8 74.0 —Р,5 0.0401 7J103 6.7 80.2 1.0 0*792 Шо3 6.3 79.2 Среднее 77.4 Растение 0.05 0.0398 Шо3 5.4 79.6 ^0.1 0.0896 1.2-10’* 5.0 89.6 0.2 0.1767 Шо3 4.8 88.4 0.5 0.3802 Шо3 4.8 76.0 Среднее 83.4

2.2. Реактивы и материалы.

Аналитический стандарт тсбуконазола 99.6%

Ацетон, ч.д,а., ГОСТ 2603*79.

Ацетонитрил, х.ч.₍ ТУ 6-09-3534-87.

Азот газообразный в баллонах с редуктором, ТУ-б-16-40-14-88.

Бумажные фильтры "красная лента", ТУ 6.091678-86.

Вода дистиллированная, ГОСТ 6709-79.

Гексан, х.ч., ТУ 2631-003-05807999-98.

Дихлорметан х.ч., ТУ 2631-019-44493179-98 Калий углекислый, хл., ГОСТ 4221-76.

Кальция хлорид, хл., ГОСТ 4161-77.

Насадка для колонки: хроматон N-Super (0.125-0.160 мм) с 5% SE-30 (Чехия). Натрий сернокислый безводный, ч., ГОСТ 4166-76, свежепрокаленный.

Натрия хлорид, х л., ГОСТ 4233-77.

Стекловата.

Флорисил 150-250 pm (Merck, Германия), содержание воды 52.5%.

Этиловый эфир уксусной кислоты, ч.д.а., ГОСТ 22300-76.

Элюент для колоночной хроматографии №1: гексан-этилацетат (90:10 по объему). Элюентдля колоночной хроматографии №2: гексан-этилацетат (10:90 по объему).

2.3.    Приборы я посуда.

Газовый хроматограф Цвет-550 М с термоионным детектором и стеклянной насадочной колонкой, длиной 1м; внутренним диаметром 3 мм, или аналогичный по своим техническим характеристикам.

Весы аналитические ВЛА-200, ГОСТ 34104-ВОЕ или аналогичные.

Весы технические ВЛКТ-500, ГОСТ 24104-80,

Мельница лабораторная зерновая ЛМЗ, ТУ 1 -01 -0593-79.

Установка ультразвуковая «Серьга», ТУ 3,836.008.

Ротационный испаритель вакуумный ИР-IM, ТУ 25-11-917-74 или аналогичный. Микрошприц МШ-Ю.МШ- ЮМ, ТУ 2-833-106.

Насос водоструйный, МРТУ 42 861-64.

Колбы плоскодонные на шлифах КШ50О 29/32 ТС, ГОСТ 10384-72.

Колбы круглодоиные на шлифах КШ50 29-32 ТС, ГОСТ 10384-72.

Воронки лабораторные В-75-110, ГОСТ 25 336-82.

Воронки делительные ВД-3-500, ГОСТ 8613-75.

Цилиндры мерные на 100 см³, ГОСТ 1774-74.

Колбы мерные на 25,50, 100 см³, ГОСТ 1770-74.

Пипетки на 1, 2, 5,10 см³ * ГОСТ 22292-74,

Стаканы химические, ГОСТ 25336-82Е.

Колонка стеклянная хроматографическая длиной 25 см, диаметром 10 мм.

2.4.    Отбор проб.

Отбор проб производится в соответствии с ГОСТ 10852-86, «Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб». Зеленую массу растений замораживают при температуре -18°С и хранят в морозильной камере до анализа.

2.5.    Подготовка к определению.

2.5.1.    Подготовка н очистка реактивов и растворителей.

Растворители, используемые для анализа, специальной подготовки не требуют. Рекомендуется проверить чистоту применяемых растворителей. Дня этого 100 мл растворителя испаряют при помощи вакуумного ротационного испарителя при температуре 40°С до объема 1 мл и хроматографируют. При обнаружении примесей, которые могут мешать определению, растворители очищают общепринятыми методами.

2.5.2.    Кондиционирование колонки.

Перед началом анализа колонку, заполненную хроматоном N-Super (0.125-0.160 мм) с 5% SE-30, не присоединяя к детектору, кондиционируют в токе инертного газа (азот) при температуре 250°С до получения стабильной нулевой линии.

2.5.3.    Приготовление стандартного и градуировочных растворов:

Берут точную навеску тебуконазола (50 мг), переносят в мерную колбу на 50 мл, растворяют навеску в ацетоне и доводят до метки (Станд артный раствор с концентрацией 1.0 мг/мл). Градуировочные растворы с концентрациями 0.5,1.0, 2.0,5.0 и 10 мкг/мл готовят методом последовательного разбавления по объему, используя для разбавления гексан. Стандартный раствор можно хранить в холодильнике при температуре 0-4°С в течение б месяцев, градуировочные растворы - в течение недели.

И

Для внесения в образец при определении полноты извлечения используют градуировочные растворы»

2.5.4.    Построение градуировочного графика.

Для построения градуировочного графика (высота или площадь пика - концентрация тебуконазола в растворе) в хроматограф вводят по 1 мкл градуировочных растворов (не менее 3-х параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4-х точек по диапазону измеряемых концентраций), измеряют высоты или площади пиков и строят график зависимости среднего значения высоты (площади) пика от концентрации тебуконазола в градуировочном растворе (мкг/мл).

2.5.5.    Подготовка колонки с флорисилом для очистки экстракта.

В нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 1 см помещают тампон из стекловаты и вносят суспензию 4 г фяорисила в 20 мл смеси гексан:этилацетат (1:1, по объему), дают растворителю стечь до верхнего края сорбента. Колонку промывают 20 мл этой же смеси со скоростью 1-2 капли в секунду, после чего она готова к работе.

2.5.6.    Проверка хроматографического поведения тебуконазола на колонке с

флорисилом.

В круглодониую колбу емкостью 10 мл отбирают 1 мл стандартного раствора тебуконазола с концентрацией 2 мкг/мл. Отдувают растворитель током теплого воздуха, остаток растворяют в 2 мл смеси гексан:этилацетат (1:1) и вносят в колонку. Колбу обмывают еще 2 мл этой же смеси и также вносят в колонку. Затем последовательно промывают колонку 20 мл гексана и 10 мл элюента №1. Далее элюируют тебуконазол 40 мл элюента №2 со скоростью 1-2 капли в секунду. Отбирают фракции по 10 мл каждая, упаривают досуха, остаток растворяют в 1 мл гексана и анализируют на содержание тебуконазола по п. 2.6.4. Фракции, содержащие тебуконазол, объединяют, упаривают досуха, остаток растворяют в 1 мл гексана и анализируют по п. 2.6.4. Рассчитывают содержание тебуконазола в элтоате, определяя полноту вымывания вещества из колонки и необходимый для этого объем элюента.

Примечание; профиль вымывания тебуконазола может меняться при использовании новой партии сорбента.

2.5.7.    Подготовка приборов и средств измерения.

Установка и подготовка всех приборов и средств измерения проводится в соответствии с требованиями технической документации.

2.6. Проведение определения

2.6.1. Экстракция тебуконазола из растений и семян рапса

Навеску измельченных растений или семян рапса, массой 10 г помещают в коническую колбу на 250 мл, заливают 50-100 мл смеси растворителей ацетон - вода (в соотношении 1:1) и экстрагируют тебуконазол в ультразвуковой ванне в течение 10 мин. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр («красная лента»). Экстракцию повторяют дважды порциями по 30 мл той же смеси. Объединенный фильтрат помещают в делительную воронку и переэкстрагируют тебуконазол дихлорметаном трижды порциями по 30 мл. Для ускорения расслоения можно добавить небольшое количество (5 мл) насыщенного раствора хлорида натрия. Объединенные дихлорметановые экстракты фильтруют через слой

М

безводного сернокислого натрия. Полученный раствор выпаривают на ротационном испарителе при температуре бани 50°С до полного удаления дихлорметана. Далее проводят очистку экстрактов по п.2.6.3.

2.6.2. Экстракция тебуконазола из масла рапса

Навеску масла 20 г растворяют в 200 мл гексана н экстрагируют тебуконазол 100 мл ацетонитрила в УЗ-валне в течение 15 мин. Полученную смесь помещают в делительную воронку объемом 500 мл. После расслоения* нижний ацетонитрильный слой сливают, из верхнего гексанового слоя экстрагируют тебуконазол ацетонитрилом еще дважды порциями по 50 мл. К объединенному ацетонитрильному экстракту добавляют воду в соотношении ацетонитрил:вода = 1:4 и перезкстрагируют тебуконазол дихлорметаном трижды порциями по 30 мл. Объединенные дихлорметановые экстракты сушат над безводным сернокислым натрием и выпаривают досуха на ротационном испарителе при температуре 0°С. Сухой остаток растворяют в 5 мл ацетона и помещают в морозильную камеру с температурой -18°С на 2 часа. Охлажденный ацетоновый раствор декантируют в круглодонную колбу на 10 мл через фильтр «красная лента», после чего фильтр промывают 2 мл охлажденного ацетона. Полученный раствор упаривают на ротационном испарителе при температуре бани не выше 40°С до полного удаления ацетона. Далее очистку проводят по п.2.6.3.

*В случае образования сравнительно стойких эмульсий можно добавить несколько мл насыщенного раствора хлорида натрия.

2.6.3. Очистка экстрактов па колонке с флорисилом

Остаток в колбе, получепный при упаривании очищенных по п.п. 2.6.1 и 2.6.2. экстрактов семян или масла, количественно переносят двумя порциями по 2 мл смеси гексан-этилацетат (1:1, по объему) в кондиционированную хроматографическую колонку (п.

2.5.5.). Промывают колонку 20 мл гексана, которые отбрасывают, затем 10 мл элюента JVs 1, которые тоже отбрасывают. Тебуконазол элюируют 40 мл элюента №2 (гексан-зтилацетаг=1;9). Весь элюах собирают в грушевидную колбу емкостью 100 мл. Раствор выпаривают досуха на ротационном испарителе при температуре не выше 50°С. Сухой остаток растворяют в 1-2 мл гексана и 1 мкл раствора вводят в хроматограф.

2.6.4. Условия хроматографирования

1. Газовый хроматограф «Цвет-550М» с ТИД или аналогичный.

Колонка стеклянная 1 м х 3 мм, заполненная хроматоном N-Super (0.125-0.160 мм) с 5% SB-30. Температура колонки 235°С, испарителя 250°С, детектора 390°С.

Скорость газа-носителя (азот) через колонку 30 см³/мин, водорода 17 см³/мия, воздуха 200 см³/мин. Объем вводимой пробы 1 мкл.

Время удерживания тебуконазола 3.05мин.

Линейный диапазон детектирования 0.5-10 нг.

2.6.6. Обработка результатов анализа

Количественное определение проводят методом абсолютной градуировки, содержание тебуконазола в образце растений, семян или масла рапса (X, мг/кг) вычисляют по формуле:

X --

H,xP

где Н|- высота (площадь) пика тебуконазола в стандартном растворе, мм;

Н₂ - высота (площадь) пика тебуконазола в анализируемой пробе, мм;

V - объём экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл;

С - концентрация тебуконазола в стандартном растворе, мкг/мл,

Р - навеска анализируемого образца, г; (при определении тебуконазола в масле следует учесть взятую для определения аликвоту, т.е. Р/2).

Содержание остаточных количеств тебуконазола в анализируемом образце вычисляют как среднее из 2-х параллельных определений.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор тебуконазола 10 мкг/мл разбавляют.

3. Требования техники безопасности.

При работе с реактивами соблюдать требования безопасности, установленные для работ с юксичными, едкими, легковоспламеняющимися веществами (ГОСТ 12.1005-88).

При выполнении измерений с использованием газового хроматографа соблюдать правила шектробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.

4. Контроль погрешности измерений.

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости результатов измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ ИСО 5725-1-6. 2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

S. Разработчики.

! Цибульская И. А., Блинова Т.Ф., Копытова Ф.И.

всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений (Санкт-Петербург).