государственный стандарт

СОЮЗА ССР

ВИРУСВАКЦИНА ПРОТИВ ТРАНСМИССИВНОГО ГАСТРОЭНТЕРИТА СВИНЕЙ (ТГЭ) КУЛЬТУРАЛЬНАЯ

ТЕХНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ И МЕТОДЫ ИСПЫТАНИИ

ГОСТ 27147-86 (СТ СЭВ 5158-85)

Издание официальное

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ПО СТАНДАРТАМ

Москва

Продолжение

Наименование показателя Характеристика и норма 6. Инфекционная активность в титрах по ТЦД50/смэ не ниже 106 7. Безвредность Внутримышечное введение вакцины разведения 1 : 1 в объеме 2 см3 подсвинкам массой 20— 25 кг не должно вызывать их заболевания и гибель в течение 14 дней 8. Иммуногенная актив- Процент защиты поросят-сосунов, полученных ность производственного от вакцинированных свиноматок, должен быть не штамма менее 70

2. МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЙ

2.1.    Отбор проб

2.1.1.    Для проведения испытания от каждой серии отбирают 25 флаконов, 15 используют для анализа, а десять хранят в архиве государственного контролера в течение 18 мес.

2.1.2.    Флаконы, предназначенные для хранения, сопровождают документом с указанием:

наименования биопрепарата; даты изготовления; номера серии; номера контроля; даты отбора пробы;

общего количества упаковочных единиц; объема серии; срока годности;

обозначения настоящего стандарта; должности и подписи лица, отобравшего пробу.

2.2.    О п р е д е л е н и е внешнего вида, цвета и наличия посторонней примеси

Для определения внешнего вида, наличия посторонней примеси, плесени, трещин флаконов, изменения консистенции каждый флакон с вакциной тщательно просматривают при дневном свете.

2.3.    Определение массовой доли влаги по ГОСТ 24061-80.

2.4.    Определение растворимости

Сущность метода заключается в определении времени, необходимого для полного растворения лиофилизата в равном объеме соответствующего растворителя.

2.4.1. Аппаратура и материалы

Для проведения испытания применяют:

часы;

ГОСТ 27147-86 С. 3

шприцы инъекционные вместимостью 20 см³ по ГОСТ 18137-77;

канюли инъекционные; раствор физиологический.

2.4.2.    Проведение испытания

В открытый флакон с лиофилизированным препаратом при помощи инъекционного шприца вводят физиологический раствор в равном объеме от исходного объема препарата до лиофилизации.

2.4.3.    Обработка результатов

Препарат после встряхивания должен полностью раствориться в течение 1—2 мин.

2.5.    Определение контаминации бактериальной и грибковой микрофлорой

Сущность метода заключается в определении роста бактерий и грибов в посевах из проб вакцины на питательные среды.

2.5.1.    Аппаратура и материалы

Для проведения испытания применяют:

термостат с температурой нагрева (22±2)°С и (37±0,5)°С;

флаконы вместимостью 100 см³;

пипетки мерные вместимостью 1, 2 и 5 см³ по ГОСТ 20292-74; раствор физиологический;

бульон мясо-пептонный (МПБ) по ГОСТ 20730-75; бульон мясо-пептонный печеночный (МППБ) под вазелиновым маслом;

агар мясо-пептонный (МПА); агар Сабуро.

2.5.2.    Проведение испытания

Для проведения испытания берут не менее 5 флаконов. Содержимое каждого флакона растворяют в 10—12 см³ стерильного физиологического раствора. Из каждого флакона берут по 0,5 см³ и делают посевы не менее чем в две пробирки с каждой питательной средой и агаром Сабуро. Питательные среды с посевами инкубируют при температуре (37±0,5)°С, а агар Сабуро при температуре (22±2)°С в течение 14 дней.

2.6.    Определение инфекционной активности Сущность метода заключается в определении титра вакцины

на основании вызываемого цитопатического действия в культуре клеток и вычислении ТЦД _50/см3.

2.6.1. Аппаратура и материалы Для проведения испытания применяют: термостат с температурой нагрева (37±0,5)°С; микроскоп;

пробирки по ГОСТ 25336-82;

сосуды стеклянные для выращивания клеток и вируса; пипетки вместимостью 1 и 10 см³ по ГОСТ 20292-74;

С. 4 ГОСТ 27147-86

раствор физиологический; среду поддерживающую; культуру клеток.

2.6.2.    Подготовка к испытанию

Из лиофилизага вакцины готовят до 10~⁷ десятикратные разведения на физиологическом растворе. Для испытания серии отбирают свежую культуру клеток в 20 пробирках со сплошным монослоем. В стерильных условиях среду роста заменяют свежей поддерживающей средой. В каждом опыте оставляют 4 пробирки с незараженной культурой клеток.

2.6.3.    Проведение испытания

По четыре пробирки с восприимчивой культурой клеток заражают разведениями вакцины от 10~³ до 10~⁷, добавляют 1 см³ разведения вируса и выдерживают в термостате при температуре {37±0,5)°С. При помощи микроскопа контролируют цитопатичес-кие изменения в испытуемых инфицированных культурах. Конечный учет культур клеток проводят не ранее чем через 5 дней после заражения.

2.6.4.    Обработка результатов

Обработку результатов проводят вычислением титра инфекционное™ по методу Кербера или Рида и Менча.

2.7. Определение безвредности

2.7.1.    Сущность метода заключается в выявлении реакции подсвинков в ответ на парэнтеральное введение им удвоенной дозы вакцины.

2.7.2.    Аппаратура и материалы

Для проведения испытания применяют: термометр для измерения температуры тела; шприцы инъекционные вместимостью 10 см³ по ГОСТ 18137—77;

канюли инъекционные; раствор физиологический.

2.7.3.    Подготовка к испытанию

На каждую серию вакцины берут двух здоровых подсвинков массой 20—25 кг и измеряют у них температуру в течение 8 дней. В день испытания лиофилизат вакцины растворяют 1 : 1 в физиологическом растворе с таким расчетом, чтобы в 2 см³ разведения вакцины содержалось вируса в дозе 2 -10⁶ ТЦДбо/см³.

2.7.4.    Проведение испытания

Для проведения испытания двум подсвинкам вводят разведение вакцины внутримышечно в дозе 2 • 10⁶ ТЦД _50/сма в объеме

2 см³.

2.7.5.    Обработка результатов

Серию вакцины считают безвредной, если в течение 14 дней после вакцинации клинические проявления у привитых животных не наблюдались.

ГОСТ 27147-86 С. 5

2.8. Определение иммуногенности

Сущность метода заключается в испытании посевного вируса ТГЭ (производственного штамма), используемого для изготовления вакцины, в опыте по защите поросят-сосунов.

2.8.1.    Аппаратура и материалы

Для проведения испытания применяют:

шприц инъекционный вместимостью 5 см³ по ГОСТ 18137-77;

канюли инъекционные;

семь вакцинальных доз посевного вируса ТГЭ с титром не ниже 10⁶ ТЦД_50/смз , используемого для изготовления вакцины;

3 см³ вирулентного вируса ТГЭ, вызывающего у незащищенных поросят мортальность выше 70%.

2.8.2.    Подготовка к испытанию

При испытании иммуногенности посевного вируса ТГЭ (производственного штамма), используемого для изготовления вакцины, предназначенной для перорального применения, трем супоросным свиноматкам за 2—3 недели до ожидаемого опороса вводят перорально с сухим кормом ежедневно в течение 7 дней вирус ТГЭ в дозе 10⁶ ТЦД _50/смз . В качестве контроля оставляют трех не-

вакцинированных свиноматок.

2.8.3.    Проведение испытания

Не позднее 3 дней после опороса заражают не менее чем по 10—20 поросят-сосунов в испытуемой и контрольной группах вирулентным вирусом ТГЭ. Для этого каждому поросенку вводят перорально вирулентный вирус в дозе 10³ ЛД_50/СМ» в объеме 3 см³. В течение 14 дней ежедневно наблюдают за поросятами, погибших поросят удаляют.

2.8.4.    Обработка результатов

Процент защиты испытуемой группы поросят вычисляют по разности между процентом выживаемости поросят в испытуемой группе и процентом выживаемости поросят в контрольной группе. Выживаемость в контрольной группе должна составлять не более 30%.

3. ПРОТОКОЛ ИСПЫТАНИЯ

Для каждой проверенной серии вирусвакцины составляют протокол испытания, который должен содержать следующие данные: наименование штамма вируса ТГЭ; использованный метод; результат испытания показателей качества; дату изготовления;

подпись лица, проводившего испытание; обозначение настоящего стандарта.

ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ

1. РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН Госагропромом СССР ИСПОЛНИТЕЛИ

Ю. А. Малахов, д-р вет. наук; Э. В. Ивановский, д-р вет. наук, Л. А. Мельникова, д-р мед. наук; И. И. Касюк

2.    УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от II декабря 1986 г. № 3762

3.    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

4.    ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ

Обозначение НТД, на который дана ссылка	Номер пункта, подпункта, перечисления, приложения
ГОСТ 18137-77	2.4.1; 2.8.1
ГОСТ 20292-74	2.5.1; 2.6.1
ГОСТ 20730-75	2.5.1
ГОСТ 24061-80	2.3
ГОСТ 25336-82	2.6.1

Редактор Г. П. Шатина Технический редактор М. И. Максимова Корректор И. В. Асауленко

Сдано в наб. 30.12.86 Подп. в печ. 24.02.87 0,5 уел. п. л. 0,5 уел. кр.-отт. #,38 уч.-изд. л. Тир. 8009    Цена    8    кон.

Ордена «Знак Почета» Издательство стандартов, 123840, Москва, ГСП, Новопресненскнй пер., 3 Тип. «Московский печатник». Москва, Лялин пер., 6. Зак. 4