ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

МЯСО И МЯСНЫЕ ПРОДУКТЫ Метод определения L (-)-оксипролина

Meat and meal products. Determination of L (—)-hydroxyproline content

OKC 67.120.10 ОКСТУ 9209

Дата введения 1994—01—01

1    Назначение и область применения

Настоящий стандарт устанавливает метод определения массовой доли L (—)-оксипролина в мясе и мясных продуктах.

2    Ссылка

ГОСТ Р 51447-99 (ИСО 3100-1—91) Мясо и мясные продукты. Методы отбора проб

3    Определение

Массовая доля L (—)-оксипролина в мясе и мясных продуктах — массовая доля L (—)-окси-пролина. определенная в соответствии с методикой, установленной настоящим стандартом, выраженная в процентах к массе продукта.

4    Сущность метода

Гидролиз навески в постоянно кипящем растворе соляной кислоты, содержащем хлорид олова (II). Фильтрация и разбавление гидролизата. Нейтрализация гидроксидом натрия аликвотной части разбавленного гидролизата. Филырация и разбавление. Окисление L (—)-оксипролина хлорамином-Т с последующим образованием окрашенного в красным цвет соединения р-днметиламинобензальде-гида. Фотометрическое измерение при длине волны 558 нм.

5    Реактивы

Все реактивы должны быть аналитического качества. Используемая вода должна быть дистиллированной или эквивалентной чистоты.

5.1    Раствор соляной кислоты, содержащий хлорид олова (II)

Растворяют в воде 7.5 г хлорида олова (II) дигидрата (SnCI> 2Н_:0). разбавляют до 500 см³ и добавляют 500 см³ соляной кислоты (р_м 1.19 г/см³).

5.2    Соляная кислота, приблизительно 6 чоль/дч³ раствор

Смешивают равные объемы соляной кислоты (ру₀ 1,19 г/см³) и воды.

5.3    Гидроксил натрия, приблизительно 10 чоль/дч-' раствор

Растворяют в воде 40 г гидроксида натрия, охлаждают и разбавляют до 100 см³.

Издание официальное

© Издательство стандартов, 1992 © СТАНДАРТИНФОРМ. 2010

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства но техническому регулированию и метрологии

ГОСТ Р 50207-92

5.4    Гидроксил натрия, приблизительно 1 моль/дм³ раствор

Растворяют в воде 1 г гидрокаша натрия, охлаждают и разбавляют до 100 см³.

5.5    Буферный раствор. pH 6.0

Растворяют в воде:

50 г лимонной кислоты моногидрата (С₆Н_к0₇ Н₂0);

26.3 г гидроксида натрия;

146.1    г ацетата натрия трипшрата |Na(CH,CO>) ЗЬЬО|.

Разбавляют водой до 1000 см³. Смешивают этот раствор с 200 см³ воды и 300 см³ пропанола-1.

Этот раствор устойчив в течение нескольких недель при 4 'С.

5.6    Реактив хлорамина-Т

Растворяют в 10 см³ воды 1.41 г Л^хлор-р-тодуолсульфамида натрия три гидрата (хлорамин-Т) и последовательно добавляют 10 см³ пропанола-1 и S0 см³ буферного раствора.

Этот раствор готовят непосредственно перед использованием.

5.7    Цветной реактив

10.0 гр-диметиламинобензальдегида растворяют в 35 см³ 60 %-ного раствора хлорной кислоты (т/т), а затем медленно добавляют 65 см³ пропанола-2.

Этот раствор готовят в день использования.

Примечание — Если необходима очистка р-димстиламинобснзальлсгнда (см. примечание к и. S.5). поступают следующим образом: готовят насыщенный раствор /ьдимстиламинобснжиыкгила н горячем 70 %-ном этаноле (У/У). Охлаждают сначала при комнатой температуре, а затем в холодильнике. Примерно через 12 ч раствор фильтруют на воронке Бюхнера. Промывают небольшим количеством 70 %-ного этанола (V/V). Снова растворяют в горячем 70 %-ном этаноле (V/V). Добавляют холодную волу и тщательно перемешивают. Повторяют эту процедуру до тех пор, пока не образуется достаточное количество молочно-белых кристаллов. Оставляют на ночь в холодильнике. Фильтруют раствор на воронке Бюхнер;!, промывают 50 %-ным этанолом (V/V) и высушивают под вакуумом в присутствии оксида фосфора (У).

5.8    Стандартные растворы L (—)-оксипродина

Готовят основной раствор, растворяя в воде 50 мг 4-оксипирролидин-а-карбоновой кислоты (оксинролнн). Добавляют одну каплю раствора соляной кислоты и разбавляют водой до 100 см³. Этот раствор устойчив в течение 1 мес при 4 ’С.

В день использования 5 см³ основного раствор;! разбавляют до 500 см³ водой в мерной колбе. Затем готовят четыре стандартных раствора, разбавляя водой 10. 20. 30 и 40 см³ этого раствор;! до 100 см³ и получая соответственно концентрации L (—)-окснпролина 0.5; 1; 1.5 и 2 мкг/см³.

6    Аппаратура

Обычная лабораторная аппаратура, а также указанная в 6.1—6.10.

6.1    Механическая мясорубка лабораторного типа с решеткой, диаметр отверстий которой нс более 4 мм.

6.2    Колба для гидролиза круглодонная или плоскодонная. вместимостью около 200 см³, с широким горлом, оснащенная воздушным или водяным холодильником.

6.3    Электрическое устройство для нагревания (например, калильная сетка для нагревания, -электроплитка или электрическая песчаная баня).

6.4    Фильтры из фильтровальной бумаги диаметром 12.5 см.

6.5    рН-мстр.

6.6    Алюминиевая или пластиковая фольга.

6.7    Водяная баня с терморегулированием температуры в пределах (60±5) ‘С.

6.S Спектрофотометр, обеспечивающий измерение при длине волны (558±2) нм. или фотоэлектроколориметр со светофильтром, имеющим максимум поглощения при длине волны (558±2) нм.

6.9    Кюветы с толщиной поглощающего свет слоя 10 мм.

6.10    Аналитические весы.

7    Отбор проб

7.1    Отбирают пробу продукта не менее 200 г.

7.2    Пробу хранят в таких условиях, чтобы предотвратить порчу и изменение состав;!.

69

8 Проведение анализа

8.1    Подготовка проб к испытанию

8.1.1    Сырое мясо и мясные продукты

Мясо в охлажденном состоянии (чуть ниже 0 ’С) острым ножом нарезают на кубики (приблизительно 0.5 см³, т. е. длина стороны кубика примерно 8 мм).

Пробу помешают в сосуд и герметично закрывают или упаковывают под вакуумом в термостойкую пластиковую пленку; затем нагревают и выдерживают при температуре 70 *С в течение 30 мин; охлаждают и продолжают испытание в соответствии с требованиями и. 8.1.2.

В процессе последующих стадий подготовки пробы и взвешивания навески необходимо обеспечить хорошее перемешивание пробы, особенно равномерное распределение жира и жидкости.

Примечание — Тепловая обработка размягчает соединительную ткань и делает се менее устойчивой к гомогенизации. Однако это может также привести к отделению жидкости, содержащей желатин. Присутствие жира может также потребовать особого внимания к приготовлению гомогенной пробы для испытания.

8.1.2    Мясо и мясные продукты, готовые к употреблению

Пробу гомогенизируют, пропуская ее дважды через мясорубку и тщательно перемешивая. Хранят гомогенизированную пробу в целиком заполненном воздухонепроницаемом закрытом сосуде в таких условиях, чтобы предотвратить ее порчу и изменение состава. Анализ испытуемой пробы проводят в течение 24 ч.

8.2    Навеска

В колбу для гидролиза взвешивают около 4 г испытуемой пробы с точностью 0.001 г. Навеску берут так. чтобы ни одна частица пробы не прилипла к боковой стенке колбы.

8.3    Гидролиз

8.3.1    В колбу помешают несколько кусочков карбида кремнии для равномерного кипения, добавляют (100±1) см³ раствора соляной кислоты, содержащей хлористое олово (II). Колбу соединяют с воздушным или водяным холодильником, нагревают до спокойного кипения на нагревательном устройстве и выдерживают в течение 16 ч (лучше оставить на ночь).

Примечание — По желанию аналитика гидролиз можно проводить последовательно в две сталии, каждая от 7 до 8 ч в течение двух дней. Результаты данного альтернативного метода незначительно отличаются от результатов, полученных при проведении пиролиза в одну стадию в течение 16 ч.

8.3.2    Горячий гидролизат фильтруют через фильтровальную бумагу в мерную колбу с одной отметкой вместимостью 200 см³. Колбу и фильтровальную бумагу промывают три раза, используя каждый раз но 10 см³ горячего раствора соляной кислоты, промывную воду добавляют к гидролизату. Объем доводят водой до метки и перемешивают. Определение проводят не позднее следующего дня после гидролиза.

8.4    Проведение цветной реакции и измерение оптической плотности

8.4.1    В химический стакан пипеткой переносят такой объем гидролизата, чтобы после его разбавления до 250 см' (см. п. 8.4.2) концентрация L (— )-оксипролина была от 0.5 до 2 мкг/см³.

П р и м с ч а н и с — В большинстве случаев объем гидролизата от 5 до 25 см³ в зависимости от количества соединительной ткани, солсржащсйся в пробе.

8.4.2    С помощью pH-метра доводят pH до (8±0.2), добавляя по каплям сначала 10 моль/дм³ раствор гидроксида натрия, а затем 1 моль/дм³ раствор гидроксида натрия. Содержимое стакана фильтруют в мерную колбу с одной отметкой вместимостью 250 см³. Промывают стакан и осадок гидроксида олова на фильтровальной бумаге не менее трех раз водой порциями по 30 см³, собирая промывную жидкость в мерную колбу. Объем доводят до метки и перемешивают.

8.4.3    4.00 см³ этого раствора переносят в пробирку и добавляю! 2.00 см³ реактива хлорамина-Т. перемешивают и оставляют при комнатной температуре на (20±1) мин.

8.4.4    Добавляют 2.00 см³ цветного реактива, тщательно перемешивают и закрывают пробирку алюминиевой или пластиковой фольгой.

8.4.5    Пробирку быстро переносят в водяную баню температурой (60±5) *С и нагревают в течение точно 20 мин.

8.4.6    Охлаждают под струей воды в течение не менее 3 мин.

8.4.7    Оптическую плотность измеряют при длине волны (558±2) нм в кювете на спектрофотометре или фотоэлектроколориметре со светофильтром.

8.4.8    Вычитают оптическую плотность контрольного раствора и находят концентрацию

70

ГОСТ Р 50207-92

L (— )-окснпролнна н разбавленном пшролнзате по калибровочному фафику. построенному, как описано в 8.6.

8.5    Контрольное испытание

Процедуру, описанную в 8.4.3—8.4.8. используя вместо разбавленного гидролизата воду, проводят в двух повторностях.

Примечай и с — Ест и оптическая плотность контрольного раствора превышает 0,040, следует приготовить свежий цветной реактив и. при необходимости, провести очистку /ъд и мстила м и нобен зал ыс гида.

8.6    Калибровочный (рафик

8.6.1    Повторяют всю процедуру определения, описанную в 8.4.3—8.4.8, используя вместо разбавленного гидролизата по очереди 4.00 см³ каждого из четырех разбавленных стандартных растворов L (— )-оксипролина.

8.6.2    Строят чертеж, нанося измеренные значения оптической плотности против соответствующих концентраций стандартных растворов Ц—)-оксипролина и проводя прямую линию через нанесенные на чертеж точки и начало координат.

При ме ч а и и с — Дли каждой серии анализов необходимо строить калибровочный (рафик.

8.7    Повторность результатов

Повторность проведения анализа двухкратная.

9 Выражение результатов

9.1 Метол расчета и формула

Для каждой из двух навесок массовую долю L (—)-оксинролнна (АЗ в процентах к массе продукта вычисляют по формуле

где с — концентрация /. (—)-оксипролина в разбавленном гидролизате, найденная но калибровочному графику, м к г/см³; т — масса навески, г;

V — объем гидролизата, используемый для разбавления до 250 см³, см³.

За окончательный результат анализа принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений при условии, что это удовлетворяет требованиям 9.2. Результат вычисляют с точностью до 0.01 %.

9.2 Согласование между повторными результатами испытаний

Расхождение между результатами двух параллельных определений, проведенных одним и тем же аналитиком, не должно превышать 5 % по отношению к среднеарифметическому значению.

10 Отчет об испытании

В отчете об испытании должны быть указаны используемый метод и полученные результаты. В нем также должны быть упомянуты любые условия проведения испытаний, не установленные данным стандартом или касающиеся как необязательных, так и любых других подробностей, которые могут повлиять на конечный результат.

Отчет должен включать в себя все подробные данные, необходимые для полной идентификации пробы.

71

ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ

1    ПОДГОТОВЛЕН И ВНЕСЕН Всесоюзным научно-исследовательским и конструкторским институтом мясной промышленности

2    УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 28 августа

1992 г. № 1062

Настоящий стандарт подготовлен методом прямого применения международного стандарта И СО 3496—78 «Мясо и мясные продукты. Эталонный метод определения содержания L (—)-оксипро-лина» и полностью ему соответствует

3    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

4    ПЕРЕИЗДАНИЕ. Январь 2010 г.

72